卢高峰
- 作品数：18 被引量：78H指数：4
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒河南分离株的遗传变异分析
- 经间接免疫荧光试验和RT-PCR鉴定,用Marc-145细胞从河南省不同地区送检的疑似猪繁殖与呼吸障碍综合征的病料中分离到16株猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV).扩增分离株的ORF5基因并进行序列测定.比较分析和...
- 李伟娟夏平安卢高峰党占国尹彦涛王中明邱璜崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒ORF5基因基因克隆
- tPA信号肽和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原核表达载体的构建被引量：5
- 2009年
- 根据GenBank(序列号E00896)上公布的人组织型纤溶酶原激活因子(tissue plasminogen activator,tPA)的序列,利用在线信号肽分析工具Signal P3.0 Server预测出人tPA的信号肽共有63bp,设计1对能互为模板直接进行扩增的特异性引物,通过重叠PCR的方法扩增出tPA信号肽。另设计1对连接引物,利用PCR方法将tPA信号肽与已删除自身信号肽的ORF5基因相连,成功构建了用tPA信号肽取代猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原有信号肽的原核表达质粒,为下一步GP5蛋白分泌表达及猪繁殖与呼吸综合征疫苗开发、诊断试剂盒的研制与应用奠定基础。
- 邱璜夏平安卢高峰王中明刘明莉李伟娟党占国
- 关键词：PRRSVORF5基因原核表达载体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP2蛋白的原核表达
- 根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF2基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为771bp的片段,并将扩增的片段...
- 刘明莉夏平安李伟娟王中明邱璜卢高峰崔保安
- 关键词：PRRSV原核表达
- 文献传递
- SOE-PCR法检测PRRSV ORF5缺失跨膜区的融合蛋白基因片段的研究
- 2009年
- PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒，含有8个开放阅读框（open reading frames，ORFs），其中ORF5—7分别编码PRRSV主要的结构蛋白：糖基化囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。糖基化囊膜蛋白（E）又称GP5蛋白，具有良好的抗原性和免疫原性，分子质量约为25ku。重叠延伸PCR技术简称SOE—PCR，又称重叠区扩增基因拼接法、交错延伸剪接PCR技术或套叠PCR技术。此技术利用PCR技术在体外进行有效的基因重组和定点突变，而且不需要内切酶消化和连接酶处理。研究在分析了GP5蛋白跨膜区之后，采用SOE—PCR的方法将跨膜区基因缺失，对GP5蛋白编码跨膜区外的基因片段进行了克隆，旨在为获得高表达、高活性的基因产物打下基础。
- 刘明莉夏平安党占国王中明邱璜卢高峰李伟娟
- 关键词：基因片段跨膜区融合蛋白重叠区扩增基因拼接法正链RNA病毒
- PRRSV Hn-1/06株GP5蛋白基因表达载体的构建及高效表达被引量：4
- 2009年
- 通过对PRRSV Hn-1/06株ORF5基因序列分析,设计删除信号肽和跨膜功能区的ORF5序列的3对引物,应用重叠延伸PCR以PTG19-T-ORF5质粒为模板进行扩增目的片段,得到长度为410 bp的片段。然后将此基因亚克隆到原核表达载体PET32a,经筛选获得了阳性重组质粒PET32a-ORF5abc,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为34 kD的融合蛋白GP5abc-His,Western blotting检测结果证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。
- 卢高峰夏平安刘明莉李伟娟邱璜李素平
- 关键词：PRRSVORF5基因原核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP2蛋白的原核表达
- 根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF2基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCRAK河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为771bp的片段,并将扩增的片...
- 刘明莉夏平安李伟娟王中明邱璜卢高峰崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达生物学活性免疫特性
- 文献传递
- 狐狸奇异变形杆菌的分离与鉴定被引量：42
- 2008年
- 无菌采取病死狐狸内脏,用LB液体培养基和麦康凯琼脂平板培养,分离到1株细菌,通过对该菌的形态特征、培养特性、生化特性进行分析,初步鉴定为变形杆菌。用PCR方法扩增该分离菌株的16 SrRNA基因,结果获得大小为1 539 bp的DNA片段(已登录GenBank,登录号EU643833)。经BLAST分析,结果表明,该分离株的16 S rRNA基因核苷酸序列与GenBank上登录的奇异变形杆菌分离株(AY820623、EF091150)的同源性为99.7%,证实该分离菌株为狐狸奇异变形杆菌,并命名为HU/08。致病性试验证明,该分离菌株对小白鼠有高致病性;毒素测定试验证明,该分离菌培养液的无菌滤液对小白鼠无毒性作用。
- 段二珍夏平安张凤华卢高峰党占国李伟娟崔保安
- 关键词：奇异变形杆菌RRNA
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原抗体复合物感染PAM的研究
- 用猪抗PRRSV特异性抗体和FITC标记的兔抗猪IgG,在PAM和Mack-145细胞中建立了检测PRRSV的间接免疫荧光方法(IFA)。利用IFA在PAM和Mack-145细胞中分别测定猪抗PRRSV免疫血清的中和抗体...
- 张凤华卢高峰夏平安徐红运赵琳刘玉松范旭崔保安
- 关键词：PRRSVPAM抗原抗体复合物
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP2蛋白的原核表达被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF2基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为771 bp的片段,并将扩增的片段插入pTG19-T载体进行测序而获得含有ORF2的阳性克隆pTG19-T-GP2。将此基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1,经筛选获得了阳性重组质粒pGEX-GP2,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为45 kD的融合蛋白,纯化后经Western blot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。
- 刘明莉李伟娟王中明邱璜卢高峰夏平安李素平崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒强弱毒株感染对仔猪免疫机能影响的差异被引量：7
- 2009年
- 20日龄猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)阴性健康仔猪滴鼻感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Hn-1/06强毒株和BJ-4弱毒株,于接种后0、5、11、18、30、405、0 d无菌采血,制备血清和分离白细胞,并在感染猪发病死亡或第50天后分别剖杀取各器官组织。经RT-PCR方法检测,强弱毒株在血清、白细胞和各组织器官内分布基本一致;经ELISA方法和免疫荧光抑制试验及IFA流式细胞术检测,强弱毒株感染均诱导机体产生抗N蛋白抗体,强毒株的抗N蛋白抗体产生早于弱毒株;强毒株感染未能诱导产生中和抗体,弱毒株感染后第30天诱导产生了较低水平的中和抗体,随后逐步升高;在整个感染过程中,强毒感染猪CD3+T淋巴细胞及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群均下降,CD4+/CD8+比值远远小于对照组,弱毒感染猪CD3+T淋巴细胞及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群先下降,40 d后逐渐恢复正常水平,CD4+/CD8+比值先下降,11 d后开始逐步上升,18 d后超过对照组,近50 d恢复到正常水平。结果说明,在强毒株感染过程中,细胞免疫被抑制,不能产生有效的体液免疫,导致病毒快速增殖复制;在弱毒株感染过程中,细胞免疫和体液免疫先被抑制,后免疫功能逐步恢复正常水平,使体内病毒进一步被清除。
- 夏平安李伟娟周海范卢高峰刘明莉邱璜王中明崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒株强毒株
