王中明
- 作品数：24 被引量：62H指数：5
- 供职机构：河南农业大学牧医工程学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒河南分离株的遗传变异分析
- 经间接免疫荧光试验和RT-PCR鉴定,用Marc-145细胞从河南省不同地区送检的疑似猪繁殖与呼吸障碍综合征的病料中分离到16株猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV).扩增分离株的ORF5基因并进行序列测定.比较分析和...
- 李伟娟夏平安卢高峰党占国尹彦涛王中明邱璜崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒ORF5基因基因克隆
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP4蛋白的原核表达与纯化
- 根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF4基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为676bp的片段,并将扩增的片段...
- 王中明夏平安徐红运刘玉松范旭赵琳张凤华崔保安
- 关键词：PRRSV原核表达
- 文献传递
- tPA信号肽和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原核表达载体的构建被引量：5
- 2009年
- 根据GenBank(序列号E00896)上公布的人组织型纤溶酶原激活因子(tissue plasminogen activator,tPA)的序列,利用在线信号肽分析工具Signal P3.0 Server预测出人tPA的信号肽共有63bp,设计1对能互为模板直接进行扩增的特异性引物,通过重叠PCR的方法扩增出tPA信号肽。另设计1对连接引物,利用PCR方法将tPA信号肽与已删除自身信号肽的ORF5基因相连,成功构建了用tPA信号肽取代猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因原有信号肽的原核表达质粒,为下一步GP5蛋白分泌表达及猪繁殖与呼吸综合征疫苗开发、诊断试剂盒的研制与应用奠定基础。
- 邱璜夏平安卢高峰王中明刘明莉李伟娟党占国
- 关键词：PRRSVORF5基因原核表达载体
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP2蛋白的原核表达
- 根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF2基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为771bp的片段,并将扩增的片段...
- 刘明莉夏平安李伟娟王中明邱璜卢高峰崔保安
- 关键词：PRRSV原核表达
- 文献传递
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒Hn-1/06株GP2蛋白的原核表达被引量：1
- 2009年
- 根据GenBank中PRRSV美洲株ATCC VR2332的ORF2基因序列,利用Primer5.0软件设计合成了一对特异性引物,经RT-PCR从河南分离株Hn-1/06株扩增得到了大小为771 bp的片段,并将扩增的片段插入pTG19-T载体进行测序而获得含有ORF2的阳性克隆pTG19-T-GP2。将此基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1,经筛选获得了阳性重组质粒pGEX-GP2,进而在IPTG的诱导下成功表达,获得了大小约为45 kD的融合蛋白,纯化后经Western blot检测证实表达的融合蛋白具有良好的生物学活性。
- 刘明莉李伟娟王中明邱璜卢高峰夏平安李素平崔保安
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒原核表达
- PRRSV GP3和GP4的免疫活性及其在感染细胞内的分布研究
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus，PRRSV）是目前引起猪场繁殖障碍的主要病原之一，临床上可引起母猪发热、厌食、早产、流产、木...
- 王中明
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫活性感染细胞间接ELISA
- 文献传递
- 重组N蛋白抗原检测PRRSV抗体间接ELISA方法的建立
- 2009年
- 采用纯化猪繁殖与呼吸综合征病毒重组核衣壳蛋白作为ELISA试验的标准抗原,通过优化ELISA各种条件,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。该方法具有良好的特异性和重复性。
- 李素平赵琳夏平安汪银锋王中明邱璜刘明莉徐红运
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白间接ELISA
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒重组N蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立被引量：20
- 2009年
- 根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR2332的N蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用RT-PCR方法从PRRSV Hn-1/06株中克隆了大小为372bp的N蛋白基因(EU025136)。将N蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-N,在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为33000的可溶性融合蛋白N-His;经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的29%。将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达91%。用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性。利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗PRRSV N蛋白抗体的间接ELISA方法(N-ELISA),并将所建立的N-ELISA与国外进口的PRRS检测试剂盒IDEXX-ELISA对200份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为92.7%。结果表明,本试验建立的N-ELISA与IDEXX-ELISA具有同样高的特异性。
- 夏平安尹彦涛李素平党占国王建举王中明李伟娟崔保安
- 关键词：PRRSVN蛋白ELISA
- SOE-PCR法检测PRRSV ORF5缺失跨膜区的融合蛋白基因片段的研究
- 2009年
- PRRSV为有囊膜的单股正链RNA病毒，含有8个开放阅读框（open reading frames，ORFs），其中ORF5—7分别编码PRRSV主要的结构蛋白：糖基化囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）和核衣壳蛋白（N）。糖基化囊膜蛋白（E）又称GP5蛋白，具有良好的抗原性和免疫原性，分子质量约为25ku。重叠延伸PCR技术简称SOE—PCR，又称重叠区扩增基因拼接法、交错延伸剪接PCR技术或套叠PCR技术。此技术利用PCR技术在体外进行有效的基因重组和定点突变，而且不需要内切酶消化和连接酶处理。研究在分析了GP5蛋白跨膜区之后，采用SOE—PCR的方法将跨膜区基因缺失，对GP5蛋白编码跨膜区外的基因片段进行了克隆，旨在为获得高表达、高活性的基因产物打下基础。
- 刘明莉夏平安党占国王中明邱璜卢高峰李伟娟
- 关键词：基因片段跨膜区融合蛋白重叠区扩增基因拼接法正链RNA病毒
- 猪肠球菌溶血素cylA基因原核表达载体的构建
- 2009年
- 以猪致病性粪肠球菌染色体DNA为模板,PCR扩增溶血素cylA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET32a中,构建pET32a-cylA重组质粒,并将pET32a-cylA质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经HindⅢ、XhoI双酶切及测序鉴定,并与已发表的肠球菌溶血素cylA基因序列比较,同源性达99.8%。表明成功构建猪肠球菌溶血素cylA基因的重组表达质粒,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定了基础。
- 刘磊王亚宾程金平王中明段志刚蔡京雷崔保安
- 关键词：粪肠球菌溶血素原核表达
