许信刚
- 作品数：197 被引量：663H指数：11
- 供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”陕西省科技攻关计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 陕西省部分地区猪流行性腹泻病毒S、M和N基因的遗传变异分析被引量：2
- 2016年
- 为了解陕西省部分地区猪流行性腹泻病毒（PEDV）的遗传和变异情况,采集陕西省部分地区规模化猪场的5份疑似PEDV感染的猪小肠内容物,进行PEDV S、M和N基因的RT-PCR扩增,并对扩增产物进行序列测定和遗传变异分析。结果表明,5份病料均能扩增出PEDV S、M和N基因,5株病毒分别命名为SXSL、SX-BJ、SX-YL、SX-WN和SX-HZ株。序列分析表明,5株毒株之间的S、M和N基因核苷酸序列的同源性分别为96.7%～99.8%、98.4%～100%和97.2%～99.9%;氨基酸序列的同源性分别为97.4%～99.9%、98.2%～100%和98.2%～100%。该5株病毒与中国疫苗株CV777的S、M和N基因核苷酸序列的同源性分别为93.9%～99.8%、98.1%～100%和95.3%～99.9%,氨基酸序列的同源性为93.6%～99.9%、96.2%～100%和98.2%～100%。遗传进化分析结果显示,5个陕西分离株的S基因与中国疫苗株CV777亲缘关系较远,与近年来中国株、日本株以及韩国株亲缘关系较近。SX-SL株、SX-BJ株和SX-YL株的M和N基因与中国疫苗株CV777亲缘关系较近,且与中国株CHGD-01亲缘关系密切。SX-WN株和SX-HZ株的M和N基因与中国疫苗株CV777亲缘关系较远。该5株病毒的S基因以及SX-WN株和SX-HZ株的M基因和N基因变异程度较大,而SX-SL株、SX-BJ株和SX-YL株三个流行株均与中国株CHGD-01亲缘关系密切,并且与近年在陕西省流行的PEDV也不完全相同。
- 庞文静何亚鹏付明哲许信刚郭抗抗张琪
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因M基因N基因
- 表达IBDV VP2蛋白重组减毒沙门菌活载体疫苗株的构建及免疫原性分析被引量：5
- 2011年
- 通过PCR克隆出IBDV VP2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-VP2。将重组质粒电转入鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(缺失Asd、Cya、Crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-VP2)。进行重组菌VP2蛋白表达的鉴定;测定重组菌的稳定性、生长曲线、安全性以及小鼠免疫试验。结果表明,酶切鉴定证实重组质粒构建成功;SDS-PAGE和Western blot证实重组菌表达的VP2蛋白能与鸡抗IBDV阳性血清特异性结合;重组菌株在体外营养选择压力下,可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾脏;小鼠口服试验证实重组菌无毒性作用;口服重组菌免疫小鼠,ELISA检测产生了抗IBDV抗体;中和试验表明产生的抗体具有中和活性。本试验成功构建了能稳定表达IBDV VP2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌疫苗株X4550(pYA3341-VP2),为研究IBD口服基因工程疫苗奠定了基础。
- 许信刚赵红妮陈光达张宽童德文
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP2蛋白减毒鼠伤寒沙门菌
- 表达猪瘟病毒E2蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株的构建及动物免疫试验被引量：9
- 2011年
- 为了构建表达猪瘟病毒E2蛋白的口服重组减毒鼠伤寒沙门氏菌活载体疫苗株,亚克隆猪瘟病毒E2基因,将其插入到表达载体pYA3341中,构建了重组质粒pYA3341-E2。将该重组质粒电转入鼠伤寒沙门氏菌疫苗株X4550(缺失asd、cya、crp基因),获得重组疫苗菌株X4550(pYA3341-E2),并对重组菌表达的E2蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析、测定其在体内外的稳定性、生长曲线、安全性及动物免疫试验。结果显示,重组菌能表达E2蛋白且表达的蛋白能与猪瘟病毒阳性血清特异性结合。在体外营养选择压力下,重组菌株在体外可稳定地携带重组质粒传代繁殖,在体内可稳定地定居于肠系膜淋巴结和脾。小鼠口服试验证实重组菌无毒性,安全可靠。动物免疫试验表明,口服重组菌免疫猪产生了抗E2蛋白抗体。淋巴细胞增殖试验表明,重组菌能诱导机体产生较强的细胞免疫应答。结果表明,成功构建了能稳定表达猪瘟病毒E2蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,为研究猪瘟口服基因工程疫苗奠定了基础。
- 许信刚王丹童德文
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗
- 猪瘟病毒Shimen株E2基因的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建被引量：4
- 2006年
- 根据已发表的猪瘟病毒(classicalswinefevervirus,CSFV)Shimen株的全基因组序列,设计2对引物P1/P2和B1/B2,在B1和B2的5′端分别加上EcoR和BamH位点,以CSFV-Shimen株脾毒为材料,一步法提取总RNA,并以此为模板采用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nPCR),成功地扩增出约1.2kb的E2基因。将PCR产物回收后与pMD18-T载体连接并转化,经PCR和酶切鉴定获得重组质粒E2-T。将E2-T经EcoR和BamH酶切消化、回收目的基因后,与经BamH/EcoR酶切的逆转录病毒载体pBABE-puro连接并转化,经酶切鉴定获得重组质粒pBABE-puro-E2。序列测定表明,目的基因的插入位置、方向和读码框完全正确。
- 刘建玲苏正元许信刚李谱华张彦明
- 关键词：猪瘟病毒E2基因
- 猪瘟病毒石门株NS3基因在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2007年
- 采用PCR技术,扩增了猪瘟病毒石门株NS3基因的丝氨酸蛋白酶、NTPase、RNA解螺旋酶活性功能区长度为2 000 bp的片段,将其克隆到pET-32a中,构建了原核表达载体pET-NS3,并将其在大肠杆菌Rosetta(DE3)中进行了表达,同时对表达产物进行了SDS-PAGE和Western blotting检测。结果表明,IPTG诱导表达得到的pET-NS3融合蛋白的相对分子质量约为97 ku,与预期结果一致,且该重组蛋白能被CSFV阳性血清所识别。
- 鲁絮张彦明许信刚
- 关键词：猪瘟病毒大肠杆菌
- 表达IBDV免疫原基因的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗及其制备方法
- 本发明公开了一种表达IBDV免疫原基因的口服减毒鼠伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗及其制备方法和应用。具体地说涉及一种口服减毒鼠伤寒沙门氏菌，所述重组减毒鼠伤寒沙门氏菌带有SEQ ID NO.1所示的序列，该重组细菌能表达IB...
- 童德文许信刚张琪
- 文献传递
- 产气荚膜梭菌菌落多重PCR方法的建立及初步应用被引量：22
- 2013年
- 根据GenBank中已发布的产气荚膜梭菌α、β、ε、ι毒素基因序列,分别设计并合成针对4种毒素基因的特异引物,通过优化多重PCR反应条件,建立1种简单的产气荚膜梭菌定型菌落多重PCR方法。结果显示:A、B、C、D、E 5型产气荚膜梭菌参考菌株均扩增出了相应的预期目的条带,而大肠杆菌、巴氏杆菌和芽孢杆菌则均未能扩增出相应条带;将单个菌落稀释100倍,仍能扩增出相应的目的片段,该方法对B型和E型参考菌株最低检测量分别为2.6×l04 cfu/mL、1.2×l04 cfu/mL。应用该多重PCR方法从106份样品中检测到30株产气荚膜梭菌且均为A型,其中病死鸡的盲肠内容物分离率为36.5%(19/52),健康鸡群新鲜粪便样品分离率为20.4%(11/54)。本研究建立的多重PCR方法特异性强,敏感度高,重复性好,可以有效进行产气荚膜梭菌的快速检测及5种血清型的鉴别,对产气荚膜梭菌的感染及食品安全问题的研究均具有重要意义。
- 董洁杨晓静苗承霞沈晶杨柳姜艳芬许信刚
- 关键词：产气荚膜梭菌血清型
- 对《兽医微生物学》教学的几点体会被引量：2
- 2010年
- 许信刚邢福珊
- 关键词：兽医微生物学教学环节经济社会高校学生教学内容
- 规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的诊断与防控被引量：11
- 2022年
- 2020年11月10日,陕西省某4800头规模化母猪场引种200头后备母猪,2020年11月24日后备猪群出现咳嗽、呼吸困难、体温升高、采食量下降及后备母猪急性死亡等临床症状。2020年12月23日该猪场妊娠母猪群出现流产现象,分娩母猪产木乃伊胎、死胎、白胎及弱仔的比例明显升高。为解决该场的异常情况,兽医实验室通过检测诊断,确诊引起母猪发生繁殖障碍的病原为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的类NADC30毒株。针对该检测结果制定和实施疫苗免疫、药物保健方案及其他生产防控措施。对该猪场的生产成绩进行为期4个月的追踪,通过持续检测分析来评估综合防控效果。结果表明采取疫苗紧急免疫和药物保健等综合防控措施后,该猪场母猪繁殖障碍情况逐渐缓解,猪群趋于稳定,生产成绩得以恢复。
- 贾佩连星张琪郭抗抗许信刚周宏超
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征防控措施
- 猪瘟流行野毒株E_2基因编码的gp55蛋白模拟分析被引量：6
- 2003年
- 利用RT-PCR和PCR技术扩增出近期猪瘟流行野毒株的E2基因,将其克隆到载体上测定核苷酸序列,根据Alfort株和Brescia株、C-株确定起始氨基酸三联体的正确位置后推导出其氨基酸序列,结果表明近期流行的猪瘟毒株与疫苗毒株和强毒株之间存在一定差异;利用DNAstar软件分析E2基因编码的gp55蛋白的疏水性、抗原性和二级结构,并与猪瘟疫苗毒株(C-株)进行比较,结果表明,目前流行的猪瘟病毒与疫苗毒的gp55蛋白在抗原性、二级结构上存在一定的差异,而C末端疏水性差异不大。
- 张永国张彦明邢福珊许信刚胡建和刘湘涛韩雪清
- 关键词：猪瘟疏水性抗原性
