董雅凤
- 作品数：144 被引量：579H指数：16
- 供职机构：中国农业科学院果树研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目国家葡萄产业技术体系建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学经济管理医药卫生环境科学与工程更多>>
- 基于巢式反转录-聚合酶链式反应技术检测葡萄病毒A和葡萄病毒B被引量：2
- 2019年
- 皱木复合病在世界范围内普遍发生,是引起葡萄木质部畸形的一类病害的统称,在沙地葡萄、Kober5BB和LN33品种上表现茎痘、茎沟和栓皮等症状,其中葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)与Kober5BB品种上出现茎沟症状有关,而葡萄病毒B(Grapevine virus B,GVB)与LN33品种上出现栓皮症状有关。
- 胡国君董雅凤张尊平范旭东任芳
- 关键词：检出率反转录-聚合酶链式反应
- 葡萄4种病毒多重RT-PCR检测体系的建立被引量：20
- 2012年
- 以复合感染4种病毒的‘红地球’(Red Globe)葡萄样品为试材,对影响多重PCR的dNTPS浓度、Taq酶浓度、引物浓度、退火温度及模板量进行了调整和优化,建立了能同时检测葡萄卷叶伴随病毒3(Grapevine leafroll-associated virus-3,GLRaV-3)、沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting associated virus,GRSPaV)、葡萄病毒B(Grapevine virusB,GVB)和葡萄病毒A(Grapevine virusA,GVA)的多重RT-PCR方法。灵敏度测验结果显示,多重RT-PCR与单一RT-PCR检测灵敏度基本一致。多重RT-PCR获得的特异性片段大小分别为905、546、460和196bp,经过克隆、测序及序列比对,表明其序列与已报道的病毒序列具有较高的同源性。对7个已知带病毒的葡萄样品进行检测验证的结果表明,所建立的多重RT-PCR技术可用于大量田间样品中这些病毒的检测。
- 范旭东董雅凤张尊平任芳李亚惠
- 关键词：多重RT-PCR
- 苹果茎痘病毒外壳蛋白的原核表达及抗血清制备被引量：5
- 2010年
- 利用基因重组技术将苹果茎痘病毒Applestempittingvirus(ASPV)完整cp基因在大肠杆菌中表达,以纯化蛋白为抗原免疫新西兰兔制备其抗血清,并采用ACP-ELISA法测定其效价和应用PAS-ELISA法对其抗血清的有效性进行初步鉴定。结果显示,cp基因获得了高效表达,表达产物与Anti-His抗体产生特异性免疫反应。制备的抗血清具有较强的特异性,效价为1:800。PAS-ELISA检测结果显示,9个苹果样品中有8个样品与RT-PCR检测结果一致,仅1个样品RT-PCR检测为阳性,而PAS-ELISA检测为阴性。表明所制备的抗血清具有一定的应用潜力。
- 李丽丽张志宏董雅凤张尊平范旭东裴光前
- 关键词：苹果茎痘病毒外壳蛋白抗血清
- 梨病毒脱除技术研究被引量：40
- 1995年
- １９９２－１９９４年。采用恒温热处理、变温热处理、茎尖培养以及热处理与茎尖培养相结合的方法，对１３个梨品种进行脱毒试验，获得９个品种共４７个无病毒单株。其脱毒率分别为：恒温热处理４７．１％，变温热处理６４．３％，茎尖培养２８．６％，茎尖培养与热处理相结合９０．９％。
- 洪霓王国平张尊平董雅凤薛光荣
- 关键词：病毒病脱毒茎尖培养
- 葡萄病毒B CP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化被引量：3
- 2018年
- 葡萄病毒B Grapevine virus B(GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原,为开展抗GVB转基因研究,本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein,CP)基因,与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404,并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系,PCR检测其中3个株系为阳性,阳性株系播种获得的64株T_1代植株中有30株扩增到目的条带,阳性率为46.9%,表明目的基因GVB cp成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T_1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定,其中有6株对接种病毒GVB具有抗性。
- 任芳张尊平范旭东胡国君李正男董雅凤
- 关键词：外壳蛋白基因植物表达载体烟草
- 果品维生素C含量测定中的几个问题被引量：8
- 2001年
- 聂继云董雅凤巩文红
- 关键词：果树维生素C色素物质
- 落叶果树生产中农药的安全使用被引量：7
- 2001年
- 聂继云董雅凤王志
- 关键词：落叶果树农药安全使用
- 酵母pac1基因介导对葡萄B病毒的抗性被引量：1
- 2015年
- 为明确广谱性抗病毒基因—酵母pac1基因对葡萄B病毒（Grapevine virus B,GVB）的抗性效果,通过农杆菌介导的遗传转化,将pac1基因导入西方烟37B,对转基因植株进行PCR鉴定及Southern blot分析,通过病毒摩擦接种观察症状以及实时荧光定量RT-PCR检测植株体内病毒含量,并对转基因植株抗病性进行初步鉴定。结果表明,目的基因pac1成功导入并整合至西方烟37B基因组,共获得10个转基因株系。不同株系的T1代烟草中阳性植株比例为16.7%~72.7%,表明目的基因可成功遗传到子代。接种病毒后转基因植株普遍延迟发病,但后期症状与非转基因对照相似,其中仅1个转基因株系B6具有不表现典型症状等抗性反应。接种植株病毒含量检测中,所有转基因植株均检测到病毒存在,但表现为抗病的B6株系中病毒含量显著低于非转基因对照,表明该转基因植株虽不能完全抵抗GVB侵染,但对GVB具有耐病性。
- 任芳董雅凤张尊平范旭东胡国君周俊
- 关键词：抗性
- 沙地葡萄茎痘伴随病毒双重巢式RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2022年
- 根据GenBank数据库中的沙地葡萄茎痘伴随病毒(grapevine rupestris stem pitting-associated virus,GRSPaV)全基因组序列设计了2组巢式RT-PCR检测引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2,扩增片段分别为902 bp和438 bp。通过对第1轮PCR扩增中引物组合repF1/R1-cpF1/R1、dNTPs、Taq DNA聚合酶和cDNA用量的优化,以及第2轮PCR扩增中引物组合repF2/R2-cpF2/R2、dNTPs和Taq DNA聚合酶用量的优化,建立了GRSPaV双重巢式RT-PCR检测方法。采用该方法对109份葡萄样品进行检测,结果显示,2对普通PCR引物RSP 52/53和RSP 9F/9R的合计检出率为65.1%,2组单一巢式PCR引物repF1/R1→repF2/R2和cpF1/R1→cpF2/R2的检出率总和为93.6%,而双重巢式PCR引物组合repF1/R1-cpF1/R1→repF2/R2-cpF2/R2的检出率也达到93.6%。该技术在保证检测效率的基础上降低了检测成本,适用于大量田间样品的检测。
- 胡国君张尊平范旭东任芳翟秀丽时晓燕董雅凤
- 关键词：葡萄巢式RT-PCR
- 果品生产中农药合理使用的要求被引量：5
- 2003年
- 根据国家先后发布实施的 7项有关农药合理使用的国家标准 ,简要总结了苹果、梨、桃、葡萄等果树生产中一些农药的剂型及含量、防治对象、稀释倍数、每季最多使用次数和安全间隔期。
- 聂继云董雅凤
- 关键词：果树农药农药剂型安全间隔期
