王铁成
- 作品数：145 被引量：318H指数：8
- 供职机构：中国人民解放军更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学经济管理更多>>
- 抗流感病毒药物研究进展被引量：5
- 2011年
- 流感病毒属于正粘病毒科流感病毒属，根据病毒核蛋白分A、B和C三型。A型流感病毒能感染多种动物包括家禽、马、猪和人，B型和C型则主要感染人。当前致死率最高的高致病性禽流感H5N1病毒和2009年暴发的H1N1甲型流感病毒均为A型流感病毒。
- 张涛王承宇高玉伟杨松涛王铁成夏咸柱
- 关键词：抗流感病毒A型流感病毒药物H5N1病毒正粘病毒科核蛋白
- 麻疹病毒属病毒检测基因芯片的建立被引量：7
- 2010年
- 目的建立主要麻疹病毒属病毒(麻疹病毒、犬瘟热病毒、小反刍兽疫病毒、牛瘟病毒、海豹瘟热病毒、海豚瘟热病毒等)种特异性检测基因芯片。方法应用生物信息学方法从GenBank获得麻疹病毒属病毒的全部基因组序列,以Primer Premier5.0软件设计针对上述病毒的寡核苷酸探针并制备基因芯片,以上述6种病毒及犬副流感病毒、VERO细胞及健康犬组织等验证寡核苷酸芯片的特异性,以细胞毒和临床病料检测基因芯片的灵敏度、特异性和重复性,芯片制备后低温放置3、6、12个月后检验其检测稳定性。结果基因芯片检测到麻疹病毒属病毒种特异性信号,无杂信号及交叉信号,芯片方法的灵敏度为10-2TCID50,是PCR的100倍,病料检测与PCR相符率为100%。结论初步建立了麻疹病毒属病毒种特异性基因芯片,该方法灵敏度高,特异性强,适用于麻疹病毒属的流行病学调查和种特异性鉴定。
- 朱晓光李斌刘冰杨松涛高玉伟王铁成夏咸柱王承宇
- 关键词：基因芯片种特异性
- 水貂犬瘟热动物模型的建立被引量：3
- 2012年
- 目的建立水貂犬瘟热动物模型,并利用水貂犬瘟热模型评价不同犬瘟热强毒株的毒力,为水貂犬瘟热病毒疫苗的研究奠定基础。方法从猴、藏獒、犬的病料中分离犬瘟热病毒,测定犬瘟热病毒的毒力,并进行传代培养。利用犬的犬瘟热动物模型筛选稳定的犬瘟热强毒株,进行水貂犬瘟热动物模型的建立及其毒力评估。结果筛选出了稳定的犬瘟热强毒株并进行了家犬动物实验,同时表现出了强烈的临床症状,并利用不同的代次毒进行了犬瘟热动物模型的建立。结论成功建立了犬瘟热动物模型并对不同来源的犬瘟热病毒毒力进行了评估。
- 王胜乐王铁成冯娜李元果于志君丁洁许薇薇忻悦岳秀芳王铮郑学星杨松涛黄耕赵永坤高玉伟夏咸柱
- 关键词：水貂
- 马抗H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白的制备及其治疗效果评价被引量：2
- 2016年
- 目的制备马抗H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白,并评价其对BALB/c小鼠的治疗效果。方法应用昆虫细胞-杆状病毒表达系统分别构建的表达H7N9亚型流感病毒HA、NA及M1蛋白的病毒样颗粒制备抗原,免疫健康马匹,当抗体效价达1∶10 000以上时,采血,对血清进行粗处理;采用亲和层析的方法获得纯化的马抗H7N9免疫球蛋白F(ab’)_2。对纯化的免疫球蛋白进行蛋白含量测定和质量检测。用H7N9亚型流感病毒BALB/c小鼠感染模型评价F(ab’)_2的治疗效果。结果免疫马匹血清中产生高滴度的中和抗体,获得的纯化马抗H7N9免疫球蛋白F(ab’)_2中和抗体效价达1∶5 120,质量检测合格。攻毒4 h后给药0.4和0.2 mg,小鼠存活率均达100%。结论获得了安全、高效的马抗H7N9亚型流感病毒精制免疫球蛋白F(ab’)_2,为人禽流感治疗用制剂的研发提供了参考。
- 赵永坤张国利褚迪王承宇罗琴芳王化磊田园孙伟洋王铁成高玉伟万忠海黄耕冯娜杨松涛夏咸柱
- 关键词：免疫球蛋白疗效
- AIV高免血清对H5N1亚型高致病性禽流感的紧急预防效果研究
- 应用马抗流感病毒高免血清,以不同剂量(0.2mL,0.1mL,0.05mL)和不同时间(攻毒前8天、4天、1天)给小鼠进行腹腔注射,探讨其对抗高致病性禽流感病毒感染的紧急预防效果.结果表明:在以30个LD50病毒对小鼠进...
- 王承宇王化磊杨松涛高玉伟冯娜王铁成邹啸环王定坤夏咸柱
- 关键词：致病性禽流感高免血清H5N1亚型
- 文献传递
- 裂谷热病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：3
- 2014年
- 目的建立一种快速、敏感、特异的Real-time PCR(实时荧光定量PCR)方法,用于裂谷热病毒(RVFV)的检测。方法根据裂谷热病毒N蛋白基因的保守序列设计并合成一对引物及特异性TaqMan探针。通过条件优化,以10倍系列稀释重组质粒为标准品,进行Real-time PCR扩增,绘制标准曲线,并进行重复性、准确性、特异性及敏感性检测。结果建立的Real-time PCR方法检测裂谷热病毒所绘制标准曲线的相关系数大于0.99,灵敏度为1.0×101拷贝,高于常规PCR方法(1.0×103拷贝);除裂谷热病毒外的其他7种对照烈性病病原体基因检测均呈阴性;批内重复和批间重复的变异系数均小于1%。结论建立的裂谷热病毒Real-time PCR检测方法敏感性和特异性较高,可用于裂谷热病毒感染快速诊断及流行病学调查。
- 盖微微迟航迟航薛向红郑学星王化磊薛向红赵永坤高玉伟黄耕王化磊夏咸柱
- 关键词：PCRTAQMAN探针
- 犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：7
- 2014年
- 用纯化后的犬瘟热病毒免疫Balb/c小鼠,采用间接ELISA方法筛选分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,并挑选阳性孔进行亚克隆,用Vero细胞交叉反应试验及间接免疫荧光检测单克隆抗体的特异性。结果获得2株能稳定分泌抗犬瘟热病毒单克隆抗体细胞株,分别命名为062-1、062-2。实验室已有的一株单克隆抗体为6H8。交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,3株单克隆抗体的特异性较好;经过体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳定分泌特异性单克隆抗体。培养上清液及小鼠腹水间接ELISA效价分别为1∶105和1∶108。相加试验表明,单克隆抗体062-1、062-2具有共同的表位,而单克隆抗体6H8识别的位点与其他两株不同。
- 王铮王铁成冯娜虞一聪高玉伟杨松涛夏咸柱
- 关键词：犬瘟热病毒单克隆抗体间接酶联免疫吸附试验
- 特异性干扰PB-1基因对H5N1高致病性禽流感病毒复制的影响被引量：1
- 2013年
- 针对H5N1高致病性禽流感病毒PB-1基因,通过RNA干扰技术,设计siRNA,研究其抑制病毒复制的效果.siRNA转染MDCK细胞并接毒后,病毒滴度测定、Real-time PCR和间接免疫荧光试验结果显示,所设计的siRNA(ps-PB1-777)具有明显的抑制病毒复制的效果,PB-1基因的拷贝数和病毒蛋白表达都下降.设计的siRNA可显著抑制高致病性禽流感病毒的复制.因此,本研究中PB-1基因的有效siRNA可为预防和治疗H5N1高致病性禽流感提供合理的技术支持和物质储备.
- 张伟王铁成王承宇杨松涛高玉伟夏咸柱
- 关键词：禽流感干扰RNA
- A型流感病毒跨种传播和致病性相关蛋白研究进展被引量：4
- 2011年
- A型流感病毒是重要的人和动物病原体,每年都会在人群中引发季节性流感流行,偶尔还会引发全球流感大流行,对公共卫生安全构成严重威胁。研究发现,A型流感病毒的跨种传播与该病毒的多个蛋白有关,其中血凝素是该病毒宿主范围的主要限制因素,但聚合酶蛋白和非结构蛋白1(NS1)的作用也不容忽视。A型流感病毒通过不断地适应各类宿主和长期地进化,每年都能够产生大量致病性未知且具有潜在流行性的新毒株,人们经过长期地研究发现,A型流感病毒的致病性主要受该病毒的聚合酶蛋白、血凝素蛋白和非结构蛋白1(NS1)上某些特定氨基酸的影响。论文从以上几方面对A型流感病毒跨种传播和致病性分子机制的研究进展进行综述。
- 于志君朱晓文刘红李硕范宝静王世申吴静武艳丽王铁成杨松涛黄耕高玉伟夏咸柱
- 关键词：A型流感病毒分子机制
- H9N2亚型AIV鼠肺适应株的获得及其氨基酸变异分析被引量：2
- 2015年
- 【目的】将H9N2亚型禽流感病毒在豚鼠体内连续性传播9代后,能够稳定的在豚鼠间传播,可见H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物的感染能力以及在哺乳动物间传播的能力还是很强的。因此,使用此株病毒A/Chicken/Jinan/Li-2/2010(H9N2)简称JN,应用小鼠动物模型,研究H9N2亚型流感病毒在小鼠肺内适应性传代后对小鼠的致病力,以及传代过程中流感病毒的变异。检测和筛选流感病毒致病性变异的关键氨基酸位点,探索H9N2亚型流感病毒变异的分子机制。【方法】将一株H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Jinan/Li-2/2010(H9N2)在小鼠的肺脏进行传代,将小鼠解剖、摘除肺部、研磨离心后经滴鼻接种下一代小鼠,传播九代后,用MDCK细胞扩繁病毒,得到鼠肺适应株JN-P9-2-M1;扩增、克隆传代病毒JN-P5-2-M1和JN-P9-2-M1的全基因测序,推断各基因编码的氨基酸,与JN原代病毒(P0)的核苷酸和氨基酸相比对,得到各代次病毒核苷酸与氨基酸变化的位点;解剖小鼠,获得小鼠的肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、脑和肠,滴定各组织中的病毒滴度,检测病毒的组织噬性;乙醚麻醉小鼠后,每个病毒稀释度鼻内接种3只小鼠,检测小鼠的幸存率和发病率;采集攻毒小鼠的肺部,固定后进行病理切片和免疫组化,比较JN原代病毒与JN-P9-2-M1对小鼠肺部的损害。【结果】JN-P9-2-M1对小鼠的致病性明显提高,其MLD50为103.5EID50,106EID50、105EID50、104EID50攻毒剂量的小鼠幸存率是0,而原毒JN对小鼠不致死,JN-P9-2-M1对小鼠的致病性比原毒提高了至少1 000倍;攻入JN-P9-2-M1病毒剂量为106—103EID50的小鼠,体重明显减少,临床症状也很明显,攻毒后3—8 d,小鼠表现精神萎靡、被毛零乱、呼吸急促、弓背等症状,而原毒JN在106EID50时,小鼠的体重变化率都跟阴性对照组相似;JN-P5-2-M1和JN-P9-2-M1同原毒JN的受体结合特性相同,都是只能特异性结合SAa-2,6Gal受体,具有人样流感病毒
- 丁洁高玉伟桑晓宇程凯慧于志君张坤柴洪亮王铁成夏咸柱华育平
- 关键词：禽流感H9N2致病力
