王俊
- 作品数：16 被引量：38H指数：5
- 供职机构：北京农学院动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：北京市属高等学校高层次人才引进与培养计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 伪狂犬病病毒野毒感染快速检测方法的比较
- 引言猪的伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种严重危害养猪业的传染病,接种PRV-gE基因缺失疫苗和淘汰PRV野毒感染猪是防控该病的主要手段.可用于PRV野毒感染的快速检测方法主要有抗体检测与PCR技术,活体检测组...
- 王俊李雪明周双海
- 猪细环病毒1型衣壳蛋白的原核表达
- 以猪细环病毒1型ORF1全长质粒为模板,克隆衣壳蛋白部分基因,并转化至原核表达载体pET-32a中,构建重组原核表达载体pET-32a-Cap,转入大肠埃希菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE...
- 王俊周双海
- 伪狂犬病病毒gE基因荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2015年
- 伪狂犬病病毒(PRV)野毒有gE基因,而其疫苗毒株无gE基因,这为检测有无PRV野毒感染提供参考。用PCR方法扩增PRV的gE基因片段,构建含有PRV gE基因片段的重组质粒。以系列稀释后的重组质粒作为模板,应用SYBR GreenⅠ来进行检测PRV gE基因的实时荧光定量PCR扩增。结果显示:在(6.9×107~6.9×101)copies/μL范围内,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物具有单一整齐的熔解曲线峰,标准曲线具有优良的线性关系。该方法最低可准确检测69copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%,对PRV-gE基因缺失疫苗毒株和常见猪源DNA病毒的检测结果均为阴性,对临床样品的检出率高于常规PCR方法。研究结果表明,建立了1种特异性强、灵敏度高、重复性好的检测PRV gE基因的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,可用于PRV野毒感染的定量检测。
- 李雪明于红欣杨红杰王俊王俊
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因荧光定量PCR
- 猪细环病毒1型衣壳蛋白的原核表达及鉴定被引量：1
- 2015年
- 为了制备猪细环病毒1型(TTSuV1)抗体,并为建立TTSuV1免疫学检测方法奠定基础。用PCR技术扩增TTSuV1衣壳蛋白(Cap)基因片段,与载体pET-32a定向连接,构建重组原核表达质粒pET-32a-Cap,转化入大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导重组阳性菌表达,SDS-PAGE研究融合蛋白表达情况。对重组融合蛋白进行纯化、复性后,免疫BALB/c小鼠4次来制备鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体。分别以鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体和TTSuV1猪阳性血清为一抗,对重组融合蛋白进行免疫印迹检测。结果显示,成功表达了TTSuV1Cap截短体融合蛋白,表达产物以包涵体形式存在,重组蛋白可与鼠抗TTSuV1-Cap蛋白抗体及TTSuV1猪阳性血清发生特异性结合,表明表达的TTSuV1-Cap融合蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。
- 王俊陈丙生杨倩于红欣刘芊麟周双海
- 关键词：衣壳蛋白原核表达
- 猪细环病毒1型实时定量PCR检测方法的建立
- 为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time ...
- 王俊单晶晶孟凡伟周双海黎阳
- 关键词：实时定量PCR
- 文献传递
- 猪细环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2014年
- 根据猪细环病毒2型(TTSuV2)基因非编码区保守序列设计了1对特异性引物,构建含有TTSuV2基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板来建立定量检测TTSuV2的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数达0.999,显示出优良的线性关系;最低可检测50copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3%;用该方法对TTSuV1、猪圆环病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法的检出率。结果表明,建立的real-time PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于TTSuV2的检测与定量分析。
- 单晶晶王俊孟凡伟于红欣周双海
- 关键词：PCRSYBR
- 猪圆环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 为了建立一种定量检测猪圆环病毒1型(PCV1)的实时荧光定量PCR方法,根据PCV1基因序列设计了1对特异性引物,并构建含有PCV1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测PCV1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数为0.999,显示出优良的线性关系;最低可准确检测320copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%;该方法对PCV2、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于PCV1的检测与定量分析。
- 于红欣王立娇孟凡伟王俊周双海
- 关键词：猪圆环病毒1型SYBRREAL-TIMEPCR
- 猪细环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：4
- 2014年
- 参考猪细环病毒1型(TTSuV 1)基因非编码区保守序列设计了1对特异性引物,构建含有TTSuV 1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测TTSuV 1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法标准曲线的决定系数为0.999 5,表明具有优良的线性关系;最低可精确检测63copies/μL的核酸模板;重复性试验的变异系数小于2%;对TTSuV 2、猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等均检测不到荧光信号。对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于TTSuV 1的检测与定量分析。
- 王俊单晶晶孟凡伟于红欣黎阳周双海
- 关键词：实时定量PCRSYBR
- 猪细环病毒1型实时定量PCR检测方法的建立
- 为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249 bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time...
- 王俊单晶晶孟凡伟周双海黎阳
- 关键词：基因检测聚合酶链式反应
- 文献传递
- 伪狂犬病病毒gE基因荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用
- 为建立一种快速检测伪狂犬病病毒(PRV)野毒的荧光定量PCR方法.根据PRV-gE基因序列设计1对特异性引物,构建含有PRV-gE基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板来建立定量检测PRV-gE的SYBR G...
- 于红欣李雪明杨红杰王俊周双海
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因荧光定量聚合酶链反应
- 文献传递
