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伪狂犬病病毒野毒感染快速检测方法的比较: 引言猪的伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种严重危害养猪业的传染病,接种PRV-gE基因缺失疫苗和淘汰PRV野毒感染猪是防控该病的主要手段.可用于PRV野毒感染的快速检测方法主要有抗体检测与PCR技术,活体检测组...; 王俊李雪明周双海

猪细环病毒1型衣壳蛋白的原核表达: 以猪细环病毒1型ORF1全长质粒为模板,克隆衣壳蛋白部分基因,并转化至原核表达载体pET-32a中,构建重组原核表达载体pET-32a-Cap,转入大肠埃希菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE...; 王俊周双海

伪狂犬病病毒gE基因荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用: 为建立一种快速检测伪狂犬病病毒(PRV)野毒的荧光定量PCR方法.根据PRV-gE基因序列设计1对特异性引物,构建含有PRV-gE基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板来建立定量检测PRV-gE的SYBR G...; 于红欣李雪明杨红杰王俊周双海; 关键词：伪狂犬病病毒 GE基因荧光定量聚合酶链反应; 文献传递

猪流行性腹泻病毒Real-timePCR检测方法的建立被引量：6: 2014年; 为定量检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)载量,建立PEDV的Real-time PCR方法。用RT-PCR方法扩增PEDV的M基因片段,构建含有M基因片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR Green I Real-time PCR,来建立检测PEDV的荧光定量PCR方法。结果显示:在(5.56×102～5.56×107)拷贝/μL范围内,所建立方法具有优良的线性关系,其决定系数为0.9996,扩增效率为99.5%,扩增产物的熔解曲线只有一个特异性峰,无引物二聚体峰,熔解温度为(81.18±0.21)℃。该方法对猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒II型等猪源病毒均检测不到扩增产物,重复性试验的变异系数小于3%,对临床样品的检出率高于常规PCR方法。研究结果表明:建立的Real-time PCR检测方法特异性强、重复性好、灵敏性高,可用于PEDV的定量检测及其早期感染的快速诊断。; 孟凡伟张雪王俊单晶晶王鹏周双海王志军; 关键词：猪流行性腹泻病毒 SYBR I REAL-TIME PCR

猪细环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5: 2014年; 根据猪细环病毒2型(TTSuV2)基因非编码区保守序列设计了1对特异性引物,构建含有TTSuV2基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板来建立定量检测TTSuV2的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数达0.999,显示出优良的线性关系;最低可检测50copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3%;用该方法对TTSuV1、猪圆环病毒、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法的检出率。结果表明,建立的real-time PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于TTSuV2的检测与定量分析。; 单晶晶王俊孟凡伟于红欣周双海; 关键词：SYBR

猪圆环病毒Ⅱ型ORF4真核表达载体构建及其抗体制备被引量：1: 2014年; 为构建猪圆环病毒II型(PCV2)ORF4基因的真核表达载体,并制备ORF4抗体。用PCR方法扩增PCV2 ORF4基因,将其克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+)或pEGFP-C1,成功构建出重组质粒pCDNA-ORF4、pEGFP-ORF4。重组质粒pEGFP-ORF4转染PK15细胞后,pEGFP-ORF4蛋白在细胞中明显表达,荧光信号主要定位于细胞核内。重组质粒pCDNA-ORF4接种BALB/c小鼠后,接种小鼠血清能与PCV2发生特异性免疫反应,经4次接种后抗体效价均达到1:26以上,表明诱导产生了PCV2 ORF4抗体。研究结果表明,构建了2种PCV2 ORF4真核表达载体,并制备了PCV2 ORF4抗体,为PCV2ORF4基因功能研究奠定了基础。; 孟凡伟王俊单晶晶周双海李雅慧高晓波; 关键词：猪圆环病毒II型真核表达载体

猪圆环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：6: 2014年; 为了建立一种定量检测猪圆环病毒1型(PCV1)的实时荧光定量PCR方法,根据PCV1基因序列设计了1对特异性引物,并构建含有PCV1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测PCV1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法的标准曲线的决定系数为0.999,显示出优良的线性关系;最低可准确检测320copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于2%;该方法对PCV2、猪细小病毒、伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等的检测结果均为阴性;对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于PCV1的检测与定量分析。; 于红欣王立娇孟凡伟王俊周双海; 关键词：猪圆环病毒1型 SYBR REAL-TIME PCR

猪细环病毒1型real-time PCR检测方法的建立被引量：4: 2014年; 参考猪细环病毒1型(TTSuV 1)基因非编码区保守序列设计了1对特异性引物,构建含有TTSuV 1基因片段的重组质粒,以系列稀释后的重组质粒作为模板建立了定量检测TTSuV 1的SYBR GreenⅠreal-time PCR方法,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,该方法标准曲线的决定系数为0.999 5,表明具有优良的线性关系;最低可精确检测63copies/μL的核酸模板;重复性试验的变异系数小于2%;对TTSuV 2、猪圆环病毒1型、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪瘟病毒等均检测不到荧光信号。对临床样品的检出率高于常规PCR方法。结果表明,建立的real-time PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于TTSuV 1的检测与定量分析。; 王俊单晶晶孟凡伟于红欣黎阳周双海; 关键词：实时定量PCR SYBR

猪细环病毒1型实时定量PCR检测方法的建立: 为定量检测猪细环病毒1型(TTSuV1),建立了检测TTSuV1核酸的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法。构建含有TTSuV1基因249 bp片段的重组质粒,用该重组质粒进行SYBR GreenⅠreal-time...; 王俊单晶晶孟凡伟周双海黎阳; 关键词：基因检测聚合酶链式反应; 文献传递

猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用被引量：11: 2015年; 为了建立一种定量检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的实时荧光定量PCR方法,用RT-PCR扩增TGEV的M基因片段,构建含有TGEV M基因片段的重组质粒。用系列稀释后的重组质粒为模板,基于SYBR GreenⅠ来进行检测TGEV的实时荧光定量PCR扩增。结果显示,扩增效率为103.0%,相邻扩增曲线之间间距均匀,所有产物的熔解曲线具有单一整齐的峰,标准曲线具有优良的线性关系,最低可准确检测63copies/μL的核酸模板,重复性试验的变异系数小于3%。用建立的PCR对3种常见猪源RNA病毒的检测结果均为阴性,对65份临床样品的检出率高于常规PCR。结果表明,建立了一种灵敏度高、特异性强、重复性好的检测TGEV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,可用于TGEV的定量检测和猪传染性胃肠炎的早期快速诊断。; 张雪杨倩于红欣王俊孟凡伟周双海; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒 SYBR 荧光定量PCR 早期快速诊断

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王俊