牛泽杉
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目黑龙江省博士后科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 编码重组新城疫病毒的cDNA、由该cDNA拯救的病毒及其在治疗恶性肿瘤中的应用
- 本发明公开了一种重组病毒，即表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的重组新城疫病毒核苷酸序列及其在肿瘤抑制方面的应用。本发明提供的肿瘤治疗药物，具有良好的肿瘤抑制效果，同时本发明为重组新城疫病毒治疗肿瘤的提供了依据。
- 吴云舟白福良李德山牛泽杉何金娇
- 文献传递
- 重组新城疫病毒rNDV-IL15在黑色素瘤治疗中的效果被引量：2
- 2014年
- 为了提高重组新城疫病毒抑制肿瘤的效果,本实验拯救获得了重组新城疫病毒rNDV-IL15。构建prNDV-IL15重组质粒,转染BHK21细胞后,拯救重组病毒rNDV-IL15,并测定病毒生长曲线;rNDV-IL15以0.1 MOI感染B16F10细胞,ELISA法检测细胞上清液中IL15的表达量;MTT法比较rNDV-IL15和rNDV在体外抑制B16F10细胞的效果,并比较了两者在黑色素瘤肿瘤模型中对荷瘤小鼠的治疗效果。结果表明,rNDV-IL15构建并成功拯救;病毒生长曲线表明,插入IL15后对病毒的生长无影响;IL15在细胞上清液中有较高的表达,达到(1 044.3±27.7)ng·mL-1;rNDV-IL15和rNDV对B16F10细胞的抑制率呈时间依赖性,但两者的抑制率无显著差异;与rNDV相比,rNDV-IL15在体内能较明显地抑制肿瘤生长。结果提示,rNDV-IL15是一种更有效的抗肿瘤制剂。
- 牛泽杉白福良孙田田辉尹杰超曹宏伟于丹田贵游吴云舟李德山任桂萍
- 关键词：重组新城疫病毒黑色素瘤B16F10抗肿瘤制剂
- 利用SUMO表达系统高效可溶表达人白细胞介素15及其活性研究被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨重组人白细胞介素15(rhIL-15)的表达条件、纯化工艺并进行生物活性鉴定。方法:采用RT-PCR方法从正常成人外周血淋巴细胞中扩增出人白细胞介素15(hIL-15)cDNA,克隆到pSUMO Vector中,构建rpSUMOhIL-15重组质粒。将转化重组质粒的工程菌诱导表达,超声破碎后取菌液上清,经过亲和层析、酶切、亲和层析得到成熟蛋白。高效液相色谱进行纯度分析;利用rhIL-15促进T细胞增殖、rhIL-15诱生的NK细胞杀伤肿瘤细胞的能力鉴定其生物活性;荷瘤鼠实验研究rhIL-15抗肿瘤作用。结果:经纯化后得到rhIL-15,其分子量大小为14.4 kD,蛋白纯度在95%以上,具有显著刺激T细胞增殖和NK细胞杀伤肿瘤细胞效果。动物实验结果显示其具有明显的抗肿瘤作用。结论:经过纯化获得高纯度和高生物学活性的rhIL-15,且具有明显增强NK细胞杀伤、刺激T细胞增殖和抗肿瘤的活性,为细胞因子联合其他方法治疗肿瘤等疾病提供了实验基础。
- 白福良田辉牛泽杉于引航王文飞周兵李德山
- 关键词：融合蛋白T细胞增殖NK细胞杀伤活性抑制肿瘤作用
- 编码重组新城疫病毒的cDNA、由该cDNA拯救的病毒及其在治疗恶性肿瘤中的应用
- 本发明公开了一种重组病毒，即表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的重组新城疫病毒核苷酸序列及其在肿瘤抑制方面的应用。本发明提供的肿瘤治疗药物，具有良好的肿瘤抑制效果，同时本发明为重组新城疫病毒治疗肿瘤的提供了依据。
- 吴云舟白福良李德山牛泽杉何金娇
- 文献传递
- 提高成纤维细胞生长因子-21产率和纯度被引量：2
- 2014年
- 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)作为近期发现的新型代谢调节因子,因其具有独立于胰岛素调节糖脂代谢、增加胰岛素敏感性等作用,有望成为治疗糖尿病的新型药物。包涵体形式表达外源蛋白表达量及纯度高,但是以pET载体表达时,FGF-21以包涵体形式表达,且复性率及产率低,蛋白活性降低[1]。针对这一瓶颈问题,用SUMO载体首次以包涵体形式表达带有SUMO标签的hFGF-21,通过优化培养条件,并应用中空纤维柱膜过滤技术对菌体进行富集,对包涵体进行洗涤、变性及复性,经过亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法,得到了成熟的hFGF-21,在保证蛋白活性的同时增加了蛋白的产量及纯度。通过检测HepG2细胞葡萄糖吸收及2型糖尿病db/db小鼠短期及长期血糖变化鉴定其降糖生物学活性。结果表明,以包涵体形式表达hFGF-21(ihFGF-21)的表达量是可溶形式表达的hFGF-21(shFGF-21)的3倍,最终ihFGF-21的收率为20 mg/L,而shFGF-21的收率仅为6 mg/L。ihFGF-21的纯度可达到95%以上,而shFGF-21仅能达到90%左右;在细胞水平和动物水平上两者的降糖生物学活性一致。在保证hFGF-21生物学活性的前提下,与传统包涵体途径提取目的蛋白的方法相比,应用中空纤维柱膜过滤技术使hFGF-21的生产周期缩短了约1/3左右。综上所述,此法为FGF-21中试及工业化生产提供了高效、经济的策略。
- 于丹叶贤龙任桂萍徐鹏飞厉书杰牛泽杉李德山
- 关键词：蛋白表达糖尿病
- FGF-21与胰岛素在调节糖代谢过程中的协同作用及其机制被引量：6
- 2014年
- 本研究旨在阐明FGF-21与胰岛素在调节糖代谢过程中的协同作用机制。通过检测FGF-21或(和)胰岛素作用后,HepG2胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖的吸收率以及2型糖尿病db/db小鼠血糖变化,证明FGF-21和胰岛素具有协同作用;采用real-time PCR方法检测肝脏中GLUT1和GLUT4转录水平,揭示两者在调节糖代谢过程中协同作用的机制。实验结果表明,两者在调节糖代谢过程中具有协同作用。Real-time PCR结果表明,FGF-21单独作用可上调GLUT1转录水平,且呈剂量依赖性,而对GLUT4转录水平没有作用;胰岛素(4 u)单独作用组仅上调GLUT4转录水平,而对GLUT1转录水平无影响;FGF-21 0.1 mg·kg-1(无效剂量组)单独作用,GLUT1和GLUT4转录水平均没有改变。但是,当FGF-21 0.1 mg·kg-1(无效剂量)与胰岛素(4 u)共同作用时,GLUT1和GLUT4的转录水平均显著增加,且GLUT1转录水平与5倍浓度的FGF-21单独作用相似,GLUT4转录水平显著高于胰岛素单独作用的效果,说明在FGF-21存在的情况下,胰岛素具有增加FGF-21敏感性的作用;在胰岛素存在的情况下,FGF-21同样具有增加胰岛素敏感性的作用。综上所述,FGF-21与胰岛素在糖代谢过程中的协同作用机制是通过彼此增敏来实现的。
- 于丹孙翠羽孙国鹏任桂萍叶贤龙朱升龙王文飞徐鹏飞厉书杰吴强牛泽杉孙田刘铭瑶李德山
- 关键词：糖尿病FGF-21胰岛素
- 重组新城疫病毒rClone30-hDR5联合TRAIL对人肝癌细胞的协同作用及其机制探讨被引量：2
- 2014年
- 为研究重组新城疫病毒rClone30-hDR5联合TRAIL蛋白对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用及其机制,首先将pee12.4-hDR5转染HepG2细胞,利用流式细胞仪筛选,建立了细胞表面稳定高效表达DR5的HepG2细胞系。利用MTT法检测TRAIL对该细胞和对照HepG2细胞的抑制率,表明TRAIL对该细胞的抑制率显著高于对照HepG2细胞(P<0.01),证明了克隆的hDR5具有生物学活性;与rClone30-hDR5组和TRAIL组相比,rClone30-hDR5联合TRAIL在体外能更好地抑制HepG2细胞的生长。Annexin V-FITC/PI染色和Quantitative Real-time PCR结果表明,与其他组相比,rClone30-hDR5联合TRAIL显著提高caspase 3和caspase 8的mRNA表达水平并协同诱导细胞凋亡。以1 MOI感染HepG2细胞,流式细胞仪检测证明,与rClone30相比,rClone30-hDR5能显著诱导hDR5的表达上调,从而增加肿瘤细胞对TRAIL的敏感性。综上所述,rClone30-hDR5联合TRAIL在肿瘤治疗方面存在潜在的应用价值。
- 孙田牛泽杉刘雪莹田贵游白银白福良尹杰超于丹吴云舟李德山于庆忠李思明任桂萍
- 关键词：DR5TRAIL重组新城疫病毒肿瘤治疗
- 错配PCR技术提高抗hIL17A单链抗体亲和力的研究被引量：5
- 2012年
- 目的:通过错配PCR技术提高1株人源化抗hIL17A单链抗体(scFv)的亲和力,为进一步开发治疗类风湿性关节炎(RA)的人源化抗体药物奠定基础。方法:本研究采用错配PCR和重叠PCR的方法,对抗体的重链、轻链可变区分别随机引入突变,并将细菌内膜展示技术和流式细胞技术(FCM)相结合进行高通量筛选,获得高亲和力突变株。由于hIL17A能刺激HeLa细胞产生白细胞介素IL-6和IL-8,因此scFv突变株经表达纯化后,利用real-time PCR技术在mRNA转录水平上检测其阻断hIL17A刺激HeLa细胞产生IL-6和IL-8的能力。结果:筛选出5株突变株,经流式细胞仪检测其中有3株亲和力与亲本相比有很大程度的提高,2株与亲本相当,而且所有突变株均保留了亲本与hIL17A的结合能力,经real-time PCR检测证明这5株突变株均有阻断hIL17A刺激HeLa细胞产生IL-6和IL-8的能力,突变株的亲和力与中和效果成正比。结论:错配PCR技术是抗体体外亲和力提高的一种可行性方法,在保证与抗原结合能力的基础上提高了其亲和力和中和活性。该实验结果为RA的靶向治疗提供了候选药物,而且也为抗体的体外亲和力的提高提供了参考方法。
- 田辉白福良徐黎明王文飞牛泽杉任桂萍李德山
- 关键词：FCMREAL-TIMEPCR单链抗体
- 新城疫病毒疫苗株F蛋白裂解位点改造对诱导HepG2细胞发生自噬的影响被引量：1
- 2013年
- 新城疫病毒(NDV)通过启动不依赖p53的内源性凋亡通路特异性诱导肿瘤细胞凋亡。最新研究表明NDV可以引起U251肿瘤细胞发生自噬,并在后期导致细胞凋亡,但其机理尚不清楚。本研究通过反向遗传操作技术对NDV Clone30疫苗株F蛋白的碱性裂解位点进行突变,将F蛋白的裂解位点由弱毒株的GGRQGR↓L突变为强毒株的GRRQRR↓F基序,并成功拯救出突变改造病毒rC30-FmF。分别将Clone30野生型病毒株rC30-wt与rC30-FmF感染HepG2肝癌细胞,通过透射电镜检测细胞超微结构显示,rC30-FmF感染4 h后细胞内出现大量自噬小体及自噬溶酶体。通过western blot检测自噬标志蛋白LC-3 II表明,rC30-FmF感染4 h后LC3II表达量显著上调,与rC30-wt对照组相比差异极显著(p<0.01)。研究表明,rC30-FmF可以在感染早期增加HepG2细胞自噬程度。从而初步证明F蛋白的裂解位点在诱导HepG2细胞自噬过程中具有关键作用。
- 吴云舟安莹孙田何金娇王卉朱升龙田贵游尹杰超张天援牛泽杉倪霁曲素素刘畅李德山
- 关键词：重组新城疫病毒F蛋白自噬
