杨建朋
- 作品数：10 被引量：41H指数：2
- 供职机构：山东农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目山东省科技攻关计划山东省科技发展计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 新城疫不同宿主源分离株的生物学特性被引量：2
- 2011年
- 选择6株(鹅DCO1、鸡WJ10001、鸽DZ01、鸽DZ02、鸭NJ10、鸭SD09)分离自鸡、番鸭、鹅、鸽的新城疫病毒,接种于10日龄无特定病原体(SPF)鸡胚中,通过测定鸡胚平均死亡时间(MDT)、雏鸡脑内致病指数(ICPI)及融合蛋白(F)裂解位点氨基酸序列,研究其生物学特性和分子流行病学特征。结果显示,6个分离毒株均为新城疫病毒(NDV)强毒株。对F基因的序列测定和遗传关系分析表明,2株鸭源NDV强毒株(鸭NJ10、鸭SD09)与1株鸭源NDV山东流行毒株(鸭SDWF2005)高度同源;2株鸽源NDV强毒株(鸽DZ01、鸽DZ02)与1株鸽源DNA强毒株(鸽JS2000)高度同源。6株不同宿主源毒株的基因型分别为VI型和VII型,是中国目前流行的NDV毒株型。
- 潘群兴王永山杨建朋王晓丽诸玉梅欧阳伟李银何孔旺
- 关键词：新城疫病毒生物学特性
- 免疫鸭体内副黏病毒的分离及其F基因的分子特征
- 2013年
- 为分析当地鸭副黏病毒流行状况及其融合蛋白(F)基因的序列特征,从江苏省某新城疫疫苗免疫过的鸭群中分离到1株病毒,经血清学试验和中和试验鉴定为鸭副黏病毒,命名为JS0920株。生物学特性分析,9日龄SPF鸡胚的半数致死量(ELD50)为10-5.3;9日龄SPF鸡胚的最小致死量平均死亡时间(MDT)为47.7h,1日龄SPF鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.875,6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)测定为2.7。用该病毒的培养物(鸡胚尿囊液)经肌肉注射攻毒,鸭的发病率为70%,死亡率为40%;鸡的发病率和死亡率均为100%。用RT-PCR方法扩增该分离毒株的F基因,序列分析表明,JS0920株与标准强毒株F48E9的核苷酸序列和氨基酸序列同源性最高,分别为99.2%和99.5%,与免疫预防用的LaSota株的同源性分别为89.0%和92.2%;其多肽裂解位点为112R-R-Q-R-R-F117,具有高致病性鸭副黏病毒毒株的分子特征;系统发育进化树分析,JS0920株与LaSota株的基因型不同,JS0920株为基因IX型,与F48E9株的亲缘关系最近。试验结果对认识当前DPMV的流行和变异现状以及疫苗研制具有重要的参考价值。
- 杨建朋毕振威欧阳伟王永山刁有祥
- 关键词：F基因分子特征
- 10株鸭源新城疫病毒的分离鉴定及F基因遗传进化分析
- (目的)为探明山东省鸭群中新城疫病毒的流行情况，对2007～2008年山东不同地区发病鸭群进行了NDV的分离鉴定。(方法)对分离的10株鸭源NDV进行了生物学特性和遗传特性研究。(结果)致病指数MLDT和ICPI测定结果...
- 孙杰刁有祥李建侠吴焕荣颜贇杨建朋李瑶瑶
- 关键词：鸭源新城疫副粘病毒F基因遗传进化
- 鸭疫里氏杆菌地区流行株的分离与外膜蛋白A的变异性分析被引量：2
- 2011年
- 2010年从安徽省和江苏省境内发病鸭的病理组织中分离到8株鸭疫里氏杆菌(RA),分别被命名为AH1、AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3、JS4,其中AH1、JS4为血清1型,AH2、AH3、AH4、JS1、JS2、JS3为血清2型。8株RA的菌体形态、生化特性、PCR鉴定结果相同,但致病力不同,AH1毒力最弱,对鸭的发病致死率仅为16.7%。序列分析结果显示,8株分离菌的外膜蛋白A(OmpA)基因的核苷酸序列同源性为96.9%～100%,氨基酸序列同源性为98.2%～100%。将8株RA与GenBank中登录的其他55株RA的OmpA进行变异性分析,结果其核苷酸序列同源性为89.6%～100%,氨基酸序列同源性为90.2%～100%。从系统发育进化树中可将这63株RA分为4个亚群,不同国家和地区的RA株在亚群中没有显示地域或时间特征,而是呈现出了互相交叉的现象,RA的OmpA差异与血清型、分离时间和分离地点没有必然的联系,本试验近期分离的8个RA株分布在2个亚群中。
- 毕振威王永山杨建朋欧阳伟张炜范红结
- 关键词：鸭疫里氏杆菌外膜蛋白A
- 10株鸭源新城疫病毒的分离鉴定及F基因遗传进化分析被引量：25
- 2010年
- 为调查山东省鸭群中新城疫病毒(NDV)的流行情况,对2007—2009年山东不同地区发病鸭群进行了NDV的分离鉴定,并对分离的10株鸭源NDV进行了生物学特性和遗传特性研究。结果显示:10株鸭源NDV的致病指数MDT和ICPI测定结果分别为50.4～60.0和1.66～1.78,表明10株分离株均属强毒株。致病性试验显示,3株代表毒株对不同日龄雏鸭均具有较强的致病性,发病率和死亡率分别达70%～100%和20%～70%。对F基因序列分析表明,相对于基因Ⅰ～Ⅵ型NDV,10株鸭源NDVF蛋白存在较大变异,这些变异主要集中在1—30、101—124、479—494和509—516 aa处,且在52、71、176、272、314、402和489位出现了与近几年流行毒株一致的氨基酸替代。核苷酸同源性分析结果表明,10株鸭源NDV之间同源性在95.8%～99.9%,与2000年以来国内外分离的基因Ⅶ型NDV同源性较高,在95.7%～99.8%,与传统LaSota、F48E9同源性较低,为83.8%～90.9%。遗传进化分析结果显示分离毒株均属于基因Ⅶd型。此外,10株鸭源NDV还具有大多数鹅源NDV所特有的973位和1 249位RsaⅠ位点。上述结果表明基因Ⅶd型NDV是造成我国鸭群近年来发生新城疫的主要病原,鸭源NDV很可能源于早期的鹅源NDV。
- 孙杰刁有祥李建侠吴焕荣颜贇杨建朋李瑶瑶
- 关键词：新城疫F基因
- 鼻气管鸟杆菌对SPF雏鸡的致病性
- 2012年
- 通过气管、消化道和肌肉注射接种鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale,ORT)人工感染SPF雏鸡,观察试验鸡的发病情况及症状,并检测各试验组和对照组的体质量;利用建立的PCR检测方法对试验组和对照组的排菌情况进行动态观察;于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组鸡只,采集心脏、肝脏、肺脏和气管等组织固定、切片、H.E.染色,观察各器官病理组织学变化,利用建立的IFA方法对ORT在雏鸡体内的分布进行研究,并进行血常规和血液生化指标检测。结果表明,ORT接种后,主要引起雏鸡的呼吸困难、咳嗽等症状,增重明显降低;病理组织学变化以肝脏、心脏组织细胞变性,气管和肺脏广泛性出血和炎性细胞浸润为特征;IFA阳性信号主要分布于肺脏和气管;从感染后2～8d一直可持续排菌;HGB、WBC、RBC、BUN和AST发生显著变化。这表明ORT感染主要引起雏鸡的呼吸系统病变,气管接种比消化道和肌肉注射接种对雏鸡致病性强,肺脏和气管是ORT侵害的主要靶器官。
- 吴海洋刁有祥刘霞杨建朋肖坡
- 关键词：血液生化指标组织病理学间接免疫荧光
- 鸭源新城疫病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2013年
- 为制备鸭源新城疫病毒(NDV)的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的鸭源NDV的核衣壳蛋白(NP)为免疫原,免疫6周龄～8周龄的BALB/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术,经以重组蛋白为包被抗原的间接ELISA方法筛选,获得了2株能稳定分泌抗重组蛋白MAb的杂交瘤细胞株A1和B2,经ELISA检测A1株和B2株细胞上清效价均为212,诱生的腹水的效价分别为107和106。Western blot和IFA检测显示,仅A1株能与鸭源NDV NP蛋白发生特异性反应。抗鸭源NDV NP蛋白MAb的研制,为鸭源NDV的免疫学诊断及致病机理的研究奠定基础。
- 程彦丽刁有祥欧全宾杨建朋张坤国纪垒肖坡
- 关键词：鸭源新城疫病毒核衣壳蛋白单克隆抗体
- Ⅰ群禽腺病毒血清10型的致病性被引量：11
- 2013年
- 将Ⅰ群禽腺病毒血清10型山东分离株(SDXT株)通过皮下注射接种途径人工感染1日龄SPF雏鸡,观察试验鸡的发病情况及临床症状;于感染后不同时间随机剖杀试验组和对照组鸡只,采集心脏、肝脏、肺脏和肠道等组织固定、切片、H.E.染色,观察各器官病理组织学变化,并进行血常规和血液生化指标检测。同时,应用IFA对SDXT株人工感染雏鸡的各组织器官进行检测。结果表明,SDXT株接种后,引起雏鸡精神沉郁、食欲不振、嗜睡等症状。病理组织学变化以肝脏脂肪变性、肝脏结构紊乱、肝窦间出血和炎性细胞浸润,在肝细胞核内可见嗜碱性包涵体为主;肠道内肠绒毛脱落;肺脏广泛性出血和炎性细胞浸润为特征。IFA检测结果显示,肝脏、脾脏、肠道、肺脏均可检测到SDXT株,其中肝脏和肠道检出率最高,表明这2个器官是其主要靶器官。HGB、WBC、RBC、ALT和ALP发生显著变化。结果表明,Ⅰ群禽腺病毒血清10型对雏鸡有较强的致病性。
- 国纪垒刁有祥程彦丽宋晓娜张坤肖坡杨建朋孙晓艳
- 关键词：SPF雏鸡SPF雏鸡
- 鸭新城疫病毒的分离鉴定及单克隆抗体的制备与应用
- 鸭新城疫，也称为鸭副粘病毒病(Duckparamyxovirusdisease，DPMV)是由禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-Ⅰ)引起的以腹泻、瘫痪、神经症状和消化道、呼吸道粘膜充血、出血或溃疡等为主要特征的一种急性、高度接触...
- 杨建朋
- 关键词：单克隆抗体F基因病毒检测
- 鸭源新城疫病毒NP蛋白的原核表达与间接ELISA方法的建立
- 2013年
- 根据GenBank发表的鸭源新城疫病毒SDWF02株NP基因序列,设计并合成1对特异性引物,扩增出鸭源新城疫病毒的NP基因,与原核表达载体pET-28a构建重组质粒pET28a-NP,经鉴定后转化Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot分析表明,54 000的融合蛋白得以表达,该蛋白能与鸭源新城疫的阳性血清发生特异性的反应。以纯化的重组蛋白为包被抗原,建立检测鸭源新城疫抗体的间接ELISA方法,经方阵滴定确定最佳包被质量液为pH9.6的碳酸盐缓冲液,最佳包被质量浓度为10ng/孔,血清最佳稀释度为1∶1 000。经应用试验表明该方法具有良好的特异性、可重复性和敏感性,为临床检测鸭源新城疫抗体水平提供了一种简单、准确、快速的诊断方法。
- 程彦丽刁有祥张坤杨建朋国纪垒肖坡
- 关键词：NP蛋白原核表达
