孙蕾清
- 作品数：18 被引量：38H指数：3
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- 阿司匹林对人γδT细胞和消化系统肿瘤细胞的作用比较
- 2009年
- 目的:比较阿司匹林对人γδT细胞和5株消化系统肿瘤细胞株的作用。方法:用不同浓度的阿司匹林诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测阿司匹林对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡率。结果:培养前γδT细胞数为5.12%,CD44表达5.13%;培养10d时γδT细胞数为91.27%,CD44为94.00%。阿司匹林在3.2mmol·L-1时对γδT细胞的生长抑制率达41.3%,明显高于对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株抑制率(分别为19.6%,11.8%,9.2%,6.4%和1.6%)。0.4～1.6mmol·L-1阿司匹林诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过3.2mmol·L-1时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的阿司匹林诱导24h后γδT细胞对其杀伤活性除SW-1116和LOVO细胞株略有增强外,其他组与对照组比较无明显变化。3.2mmol·L-1阿司匹林对γδT细胞诱导24h的凋亡率(52.7%)显著高于SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株(分别为7.9%,8.9%,6.2%,4.5%和3.7%)。结论:阿司匹林在临床常规使用的药物浓度时对5种肿瘤细胞株和γδT细胞无抑制作用,但能增强γδT细胞杀伤5种肿瘤细胞株活性,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加γδT细胞的凋亡率,而对5种肿瘤细胞株作用不明显。这一结果为临床阿司匹林预防消化道肿瘤的用量提供了一定的参考价值。
- 刘军权陈复兴朱斌张颂张娟孙蕾清陈桂林冯霞
- 关键词：ΓΔT细胞阿司匹林SW-480
- TWS119通过抑制STAT3磷酸化促进γδT细胞CCR5的表达
- 2016年
- 目的：研究糖原合酶激酶-3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶（TWS119）促进γδT细胞趋化因子受体CCR5表达的分子机制。方法：用TWS119诱导从健康人外周血中分离培养获得γδT细胞48 h后,用流式细胞仪检测γδT细胞CCR5的表达;Western blot检测GAPDH和p-STAT3的表达。结果：培养10 d后的γδT细胞纯度达到85.79%±5.01%。TWS119浓度在0～8.0μmol/L范围内能显著促进趋化因子受体CCR5的表达,且剂量依赖性抑制STAT3的磷酸化。同时,用STAT3磷酸化抑制剂Stattic（0.5μmol/L）预处理γδT细胞也可以促进CCR5的表达,并能协同增强TWS119促进趋化因子受体CCR5的表达。结论：TWS119通过抑制STAT3磷酸化促进γδT细胞CCR5的表达。
- 徐晶孙蕾清陈永强郑璐吕小婷陈复兴刘军权周忠海
- 关键词：CCR5ΓΔT细胞STAT3
- AR-A014418对γδT细胞增殖、凋亡及杀伤功能的影响被引量：4
- 2019年
- 目的:观察糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)选择性抑制剂AR-A014418对体外扩增的γδT细胞的细胞活性包括增殖、凋亡和杀伤功能的影响。方法:采用人淋巴细胞分离液分离健康人外周血中单个核细胞,在γδT细胞完全培养基中培养获得γδT细胞。用不同浓度的AR-A014418诱导培养γδT细胞72 h后,用流式细胞术检测各诱导处理组γδT细胞的增殖、凋亡和杀伤能力;用Western blot检测γδT细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况。结果:AR-A014418浓度在0. 3～10μmol/L时能促进γδT细胞的增殖并抑制其凋亡。同时促凋亡蛋白Cleaved caspase-3和Bax表达逐渐减弱,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达逐渐增强。尤其是在3μmol/L时,γδT细胞增殖活性最强,而且体外杀伤人肝癌HepG2细胞和人胃癌SGC-7901细胞活性也显著提高。结论:GSK-3β抑制剂AR-A014418在3μmol/L浓度时,可以抑制体外扩增γδT细胞的凋亡,并能增强其体外增殖和杀伤肿瘤活性,提示AR-A014418具有一定的免疫调节功能,为今后用于体外扩增γδT细胞提供实验依据。
- 郑璐孙蕾清陈复兴周遹吕小婷陈玲李莹周忠海陈永强
- 关键词：ΓΔT细胞凋亡杀伤功能
- 自然杀伤细胞对小鼠HepS肝癌移植瘤的抑制作用研究被引量：2
- 2011年
- 目的 研究自然杀伤（NK）细胞对原发性肝癌Heps移植瘤小鼠的治疗作用和机理.方法 建立小鼠移植性肝癌（Heps）实体瘤模型,随机分为生理盐水（NS）组、治疗1组（输注的NK细胞数为1×104/只）、治疗2组（输注的NK细胞数为1×105/只）和治疗3组（输注的NK细胞数为1×106/只）,每组15只.接种肝癌细胞当天,分别于尾静脉注射不同数量的NK细胞,对照组注射NS.观测小鼠移植瘤体积及各组小鼠平均生存时间.各组于输注NK细胞后第15天分别处死2只小鼠,对移植瘤组织切片进行HE染色,用流式细胞术（FCM）检测脾细胞NK的含量;乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测脾细胞杀伤活性.结果 接种移植瘤后第8天,治疗3组移植瘤的生长速度较其他组小鼠显著减慢（P＜0.05）.第20天时治疗1组移植瘤体积明显小于对照组（P＜0.05）,治疗2组和3组移植瘤体积非常显著小于对照组（P＜0.01）.治疗1组小鼠平均生存期明显长于对照组和治疗2、3组（P＜0.01）.治疗1-3组脾细胞杀伤活性以及NK细胞的含量高于对照组（P＜0.01）.结论 适量输注NK细胞可以有效抑制HepS肝癌移植瘤的生长,延长小鼠的生存期,为临床应用NK细胞治疗时数量的选择提供了实验依据.
- 王艳辉张南征陈复兴刘军权周忠海孙蕾清
- 关键词：NK细胞小鼠
- 光动力疗法联合瘤体输注树突状细胞对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应的研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)联合瘤体内输注树突状细胞(dendritic cell,DC)的光免疫疗法(photody-namic immuno-therapy,PIT)对小鼠Heps肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应。方法体外培养昆明小鼠骨髓源性DC,4,'6-二脒基-2-苯基吲哚(4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)荧光染色液标记DC备用。128只昆明小鼠皮下接种Heps肝癌细胞建立肿瘤模型,随机分为对照组、PDT组、DC组和PIT组。对照组小鼠瘤体内注射生理盐水,PDT组单纯PDT治疗,DC组小鼠瘤体内注射DAPI标记的DC,PIT组PDT联合瘤体内注射DAPI标记的DC细胞。治疗后定期测量各组肿瘤体积,记录各组小鼠生存时间,荧光显微镜下计数DC组及PIT组小鼠淋巴结中荧光细胞数目,流式细胞仪测定各组小鼠外周血T细胞亚群,LDH释放法测定各组小鼠脾细胞杀伤活性。结果 (1)与对照组相比,PDT组与PIT组治疗后肿瘤生长明显受抑;(2)PDT组与PIT组小鼠生存时间延长;(3)高倍镜视野下DC组较PIT组荧光细胞数增多(P<0.05);(4)治疗后72 h,PDT及PIT组小鼠外周血CD8+T细胞百分率均明显高于对照组和DC组(P<0.01、P<0.01),其中PIT组较PDT组增高明显(P<0.01),(5)PDT组与PIT组小鼠脾脏细胞杀伤活性较对照组和DC组明显增强(P<0.01,P<0.01)。结论 PDT疗法能够抑制肿瘤生长并激发宿主免疫应答,联合输注DC可增强PDT对小鼠Heps肝癌移植瘤的抑制作用及免疫效应。
- 白爽张南征杨宛莹刘军权周忠海孙蕾清陈复兴
- 关键词：光动力疗法树突状细胞
- Gardiquimod增强人γδT细胞杀伤肿瘤细胞的研究被引量：2
- 2011年
- 目的研究Toll样受体7激动剂（Gardiquimod）对人γδT细胞杀伤肿瘤作用的影响。方法以异戊烯焦磷酸法扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的Gardiquimod处理γδT细胞和肺癌细胞A549,MTT法检测细胞增殖情况。LDH法检测Gardiquimod处理后γδT细胞对A549的杀伤活性;流式细胞术检测处理前后γδT细胞上CD107a、穿孔素和颗粒酶的表达情况。结果 Gardiquimod在5.0~0.31μg/ml浓度可明显促进γδT细胞增殖,同时抑制A549增殖。Gardiquimod处理γδT细胞后,杀伤A549能力明显增强,且CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达显著升高,与对照组相比,有统计学差异（P〈0.05）。结论 Gardiquimod通过增高γδT细胞上的CD107a、颗粒酶及穿孔素的表达来增强其杀伤肿瘤作用。
- 周燏刘军权周忠海吕小婷陈玲孙蕾清李昳陈复兴
- 关键词：ΓΔT细胞肺癌细胞A549杀伤肿瘤
- 糖原合酶激酶3β抑制剂TWS119激活NK细胞Wnt/β-catenin信号通路促进CD62L表达被引量：3
- 2015年
- 目的探讨糖原合酶激酶3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶（TWS119）调控Wnt/β-catenin信号通路对NK细胞增殖和表型的影响。方法分离健康人外周血单个核细胞（PBMC）,加入到含重组人IL-2和人AB血清的NK细胞完全培养基中诱导培养,获得NK细胞。（0~8.0）μmol/L TWS119处理NK细胞72 h,Western blot法检测NK细胞β-catenin的表达、CCK-8法测定NK细胞增殖能力;流式细胞术检测各组NK细胞CD107a和CD62L（L-选择素）的表达。结果培养10 d后的NK细胞纯度达到（61.76±3.74）%;TWS119能够活化NK细胞Wnt/β-catenin信号通路。（0~2.0）μmol/L TWS119处理NK细胞,能显著促进NK细胞增殖,浓度大于2.0μmol/L时增殖率逐渐降低。（0~8.0）μmol/L TWS119处理NK细胞,CD62L的阳性表达率逐渐升高,且呈剂量依赖性;与之相反,CD107a阳性表达率逐渐下降。结论 TWS119活化NK细胞Wnt/β-catenin信号通路可获得早期成熟的CD62L＋NK细胞。
- 陈永强郑璐刘军权周忠海吕小婷张娟张颂孙蕾清陈复兴
- 关键词：NK细胞表型
- TWS119对人胃癌SGC-7901细胞和γδT细胞活性影响及机制研究被引量：2
- 2016年
- 目的研究糖原合酶激酶-3β抑制剂4,6-二取代吡咯并嘧啶(TWS119)体外抗肿瘤活性和对人γδT细胞活性的影响。方法用不同浓度的4,6-二取代吡咯并嘧啶分别作用于人胃癌SGC-7901细胞和γδT细胞24、48和72 h后,用CCK-8法测定4,6-二取代吡咯并嘧啶对人胃癌SGC-7901细胞和γδT细胞增殖的影响及γδT细胞对SGC-7901细胞杀伤能力;流式细胞术分析4,6-二取代吡咯并嘧啶对SGC-7901细胞凋亡的影响,Western blot检测4,6-二取代吡咯并嘧啶对Bcl-2、p-STAT3和p-ERK1/2表达的影响。结果 0~8.0μmol·L^(-1)4,6-二取代吡咯并嘧啶能抑制人胃癌SGC-7901细胞的生长并诱导其凋亡,抑制Bcl-2的表达,促进p-ERK1/2和p-STAT3的表达。而在γδT细胞中,4,6-二取代吡咯并嘧啶在0~4.0μmol·L^(-1)时能促进其增殖和对SGC-7901细胞的体外杀伤活性,促进Bcl-2的表达,抑制pERK1/2和p-STAT3的表达。结论一定浓度的4,6-二取代吡咯并嘧啶能抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖并诱导其凋亡,同时能促进γδT细胞增殖和对SGC-7901细胞的杀伤活性,其机制可能与4,6-二取代吡咯并嘧啶激活Wnt信号传导通路及其对p-ERK1/2、Bcl-2和p-STAT3表达的影响有关。
- 陈永强郑璐刘军权吕小婷孙蕾清徐晶周忠海陈复兴
- 关键词：ΓΔT细胞SGC-7901细胞增殖
- 人外周血γδT细胞CD107a的表达变化与细胞毒活性的关系被引量：9
- 2011年
- 目的：探讨人外周血γδT细胞体外诱导过程中CD107a的表达变化及其与γδT细胞细胞毒活性的关系。方法：分离健康人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）,加入含有IL-2和异戊烯焦磷酸（isopentenyl pyro-phosphate,IPP）的培养基,体外诱导γδT细胞。分别在第7、10、14天以流式细胞仪对培养的γδT细胞进行鉴定,并同时检测其CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达。CCK-8试剂盒检测γδT细胞对胰腺癌细胞SW-1990的杀伤效应。采用SPSS13.0软件进行spearman相关分析。结果：在培养的第7、10、14天,γδTCR阳性细胞分别为（60.31±3.84）%、（66.45±4.25）%、（70.99±4.66）%。CD107a、穿孔素和颗粒酶B的表达在γδT细胞培养第710天达到峰值后呈下降趋势,第7天与第0天相比差异有统计学意义[（80.66±4.42）%、（70.11±3.34）%、（94.26±4.25）%vs（69.02±5.04）%、（62.31±4.66）%、（53.62±3.69）%,P〈0.05]。培养第7天、第10天的γδT细胞对SW-1990细胞杀伤率显著高于第14天的γδT细胞[（58.86±5.12）%、（61.53±4.69）%vs（40.31±4.83）%,P〈0.05]。γδT细胞CD107a表达与穿孔素、颗粒酶B、其对SW-1990细胞杀伤效应显著相关（r=0.853,r=0.785,r=0.839,均P〈0.01）。结论：人外周血γδT细胞CD107a的表达与其抗肿瘤能力正相关,可能是γδT细胞细胞毒活性的一个标志。
- 周忠海陈复兴吕小婷张娟孙蕾清张磊黄菲
- 关键词：ΓΔT细胞细胞毒作用穿孔素颗粒酶B
- 汉黄芩素诱导肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究被引量：4
- 2021年
- 目的研究汉黄芩素对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及可能机制。方法常规培养HepG2细胞。MTT法检测汉黄芩素对HepG2细胞增殖的影响。流式细胞术检测经汉黄芩素处理后HepG2细胞周期、凋亡及活细胞内Caspase-3的表达。免疫印迹法检测Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果汉黄芩素6.25~50μg·mL^(-1)浓度能明显抑制HepG2细胞增殖,促进凋亡及活细胞内Caspase-3活性的表达,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。汉黄芩素能改变HepG2细胞周期,使S期比例逐渐减少。汉黄芩素能显著抑制Bcl-2和Caspase-3蛋白表达量。结论汉黄芩素能抑制HepG2细胞增殖,改变细胞周期,促进凋亡,其凋亡机制可能与改变Caspase-3和Bcl-2表达有关。
- 周燏孙蕾清吕小婷杨阳朱斌周忠海
- 关键词：汉黄芩素HEPG2细胞凋亡
