温州医学院药学院浙江省生物技术制药工程重点实验室
- 作品数：25 被引量：47H指数：4
- 相关作者：王彩虹田自有叶财学陈惜倩崔宇琼更多>>
- 相关机构：吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发重点实验室吉林农业大学生命科学学院吉林大学公共卫生学院卫生部放射生物学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 制备可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ-脂联素球部融合蛋白的两种细胞培养工艺比较
- 2013年
- 利用7．5L生物反应器篮式贴壁培养和全悬浮批式培养CHO工程细胞株表达可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ-脂联素球部（sTNFRII-gAD）融合蛋白，比较这两种培养方法的产率，以便优化高效表达sTNFRII—gAD融合蛋白的制备工艺。篮式贴壁培养首先小规模培养CHO工程细胞株，待细胞增殖到一定密度后以3×105-4×10^5cells／mL密度接种生物反应器贴壁培养3d，调换成不含血清的LK021培养基继续培养4d。而全悬浮无血清批式培养则以3×10^5-4×10^5cells／mL密度的CHO工程细胞株接种于生物反应器，连续培养7d。培养过程实时监测培养条件，维持pH和DO的稳定。分别收集细胞上清，离心去细胞后用Pellicon切相流超滤系统对蛋白进行浓缩，并通过DEAE离子交换柱进行纯化。结果显示，篮式贴壁培养和全悬浮批式培养均成功表达了sTNFRII-gAD融合蛋白，产量分别为8．0mg／L和7．5mg／L、纯度分别为95％和98％，从而为sTNFRII-gAD融合蛋白的中试工艺研究提供了一定的基础。
- 黄世高尹玉婷熊春晖王彩虹吕建新高基民
- 关键词：CHO细胞真核表达
- SA/hIL24双功能融合蛋白的制备及其生物学活性的鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的:制备链亲和素标记的人白细胞介素24融合蛋白(SA/hIL24),并鉴定其生物学活性。方法:通过RT-RCR扩增hIL-24基因序列,构建pET24a-SA-hIL24和pET21a-hIL24-SA重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达的融合蛋白采用镍金属螯合(Ni-NTA)层析和凝胶过滤层析纯化、透析复性。MTT法检测融合蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析融合蛋白对已生物素化的小鼠膀胱癌MB49细胞的锚定修饰效率。结果:成功构建两种融合蛋白的重组表达质粒,在大肠杆菌中实现高效表达,表达量分别占菌体总蛋白的20%和35%,二次纯化后SA/hIL24融合蛋白纯度可达95%以上。SA/hIL24融合蛋白可高效结合至已生物素化的MB49肿瘤细胞表面(表面锚定修饰率大于90%),hIL24-SA融合蛋白可以剂量依赖的方式抑制Hela细胞的生长,而SA-hIL24融合蛋白对Hela细胞没有明显的抑制生长作用。结论:SA/hIL24融合蛋白的制备为hIL-24表面锚定修饰的新型肿瘤细胞疫苗提供了基础。
- 陈惜倩高基民
- 关键词：白细胞介素24链亲和素融合蛋白原核表达
- 新型染色技术在生物大分子检测中的开发与应用
- 目的：研究不同种新型染色技术在高通量生物大分子检测中的应用。
方法：遁过比较不同新型染色方法在生物大分子检测中的应用，并讨论其检测机理，以确定不同方法的适用范围及特性，为操作者在具体实验过程中提供指导依据。
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- 朱忠欣何宏章叶财学丛维涛金利泰李校堃
- 关键词：生物大分子蛋白质组学荧光染色法
- 文献传递
- 1型糖尿病大鼠肾脏皮质的蛋白质组学研究
- 2010年
- 通过研究1型糖尿病(T1DM)大鼠肾皮质和正常大鼠肾皮质蛋白质表达的差异,进一步探讨T1DM引起肾脏病变的可能机制。实验采用链脲佐菌素(STZ)诱发SD大鼠产生高血糖,建立T1DM模型,应用双向凝胶电泳技术分离大鼠肾皮质蛋白。电泳图谱结果:正常组分辨出蛋白斑点468±34个;DM组分辨出蛋白斑点423±23个,其中差异显著的蛋白斑点43个,与正常组比较,DM组有15个蛋白斑点表达上调,24个表达下调,2个失表达,2个蛋白斑点只在DM组表达。本实验证明了T1DM大鼠肾皮质蛋白质表达发生了显著变化,差异蛋白质点的进一步鉴别研究将有助于探讨T1DM肾病的发病机制。
- 叶财学田自有朱忠欣金利泰丛维涛李校堃
- 关键词：肾皮质链脲佐菌素蛋白质组学双向凝胶电泳
- 重组人角质细胞生长因子-2对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用被引量：7
- 2010年
- 目的:研究外用旋滴重组人角质细胞生长因子-2(KGF-2)对兔碱烧伤模型角膜上皮损伤的治疗作用,为角膜上皮损伤的早期治疗探索新方法。方法:制备兔角膜碱烧伤模型,60只日本大耳白兔随机分为碱烧伤对照组和KGF-2组(25mg·mL-1)(n=30);各组日本大耳白兔于造模后以50μL药物滴眼,每日3次。7和14d裂隙灯观察角膜烧伤面积以及角膜新生血管的形成,MTT法检测角膜上皮细胞活性,免疫组化方法进行病理组织学检查。结果:碱烧伤后7和14d,KGF-2组角膜烧伤面积小于碱烧伤对照组,差异有显著性(P<0.01)。碱烧伤对照组7d角膜新生血管发生率为17.50%,KGF-2组为7.32%;碱烧伤对照组14d角膜新生血管发生率为41.67%,KGF-2组为32.50%。MTT检测结果显示:碱烧伤后7和14d,KGF-2组492nm吸光度与碱烧伤对照组比较差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。碱烧伤后7和14d,病理切片HE染色显示:对照组角膜基质水肿,板层纤维排列松散、紊乱,炎症反应反复出现,角膜上皮层变薄,部分脱落,角膜内皮层内侧有大量成纤维细胞增生;KGF-2组碱烧伤后7d,角膜上皮细胞生长良好,基质轻度增厚,无明显的炎症反应;碱烧伤后14d,未出现炎症复发,角膜上皮细胞生长良好,排列整齐,角膜基质仅有轻度增厚。结论:外用旋滴25mg·mL-1KGF-2可加速角膜上皮损伤的恢复,减轻角膜烧伤的各种炎症反应症状;减轻角膜基质水肿和纤维化,同时KGF-2亦表现出显著的抑制角膜新生血管形成的作用;KGF-2有可能成为另一个对角膜上皮损伤具有重要调控作用的生长因子。
- 王晓杰周鑫田海山马吉胜焦悦张睿蔡敏倩钱焕文李校堃
- 关键词：角质细胞生长因子-2角膜上皮
- 重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化被引量：3
- 2010年
- 目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1(rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据。方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23、pET22b-sumo-rhKGF1dest23、pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3)plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3)StarplysS、origima(DE3)和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合。CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Westernblotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白。结果:pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Westernblotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白。结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白。
- 邓林刘孝菊龚守良王会岩田海山王晓杰马吉胜李校堃
- 关键词：纯化
- 一个新的代谢调节因子——成纤维细胞生长因子21被引量：2
- 2011年
- 成纤维细胞生长因子21(FGF21)与其传统的FGFs家族不同,是一个新的代谢调节因子,虽然发现时间不长,但在代谢性疾病中的调控机制研究开展十分迅速。FGF21是2型糖尿病的潜在治疗剂,其具有持续控制脂质和糖代谢,逆转胰岛素的耐受性,改善胰岛β细胞等功能。另外,在特定靶组织/器官,很多与代谢相关的关键因子和途径,与FGF21调控机制相关。进一步研究这些作用机制不仅能更好的理解FGF21的生物学特性,还能为研究新的治疗方案奠定基础。文中叙述了糖尿病、肥胖症、肝癌、慢性肾病等疾病与FGF21的调控关系,以及目前FGF21调控机制的研究进展。
- 张谢王周光李晓霞时洪雪朱小静李校堃肖健
- 关键词：成纤维细胞生长因子21糖尿病肥胖症代谢调节
- 正常心肌缺血与糖尿病心肌缺血大鼠蛋白质组的差异被引量：1
- 2009年
- 目的:运用蛋白质组学方法比较正常与糖尿病性大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌蛋白质组表达图谱的差异。方法:将SD大鼠随机分为心肌缺血再灌注组(IR组)和糖尿病心肌缺血再灌注组(DMIR组)。分别取各组左心室心肌蛋白进行二维电泳及凝胶染色后,用ImageMaster 2D Platinum软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异蛋白点。结果:二维电泳结果显示,IR组心肌蛋白二维电泳图谱与DMIR组相比共有29个显著差异点,其中6个点表达上调,6个表达下调,17个表达不匹配。结论:IR组与DMIR组大鼠心肌的二维电泳结果显示蛋白表达图谱有明显差异,但其差异蛋白为何种蛋白、起何种功能需要进一步的质谱数据进行分析。
- 雷培培叶财学杨徐一金利泰李校堃
- 关键词：心肌缺血再灌注损伤糖尿病蛋白质组
- 基因工程药物开发热点——成纤维细胞生长因子家族被引量：8
- 2010年
- 成纤维细胞生长因子（f1ibroblast growth factor,FGF）是一类具有广泛生物学活性的肽类物质,是多能信号分子,具有参与细胞增殖、分化和游走等功能。FGF具有很强的促细胞生长作用和广泛的生物学作用,
- 李校堃肖倩韩静肖健
- 关键词：基因工程药物生物学活性生物学作用肽类物质信号分子细胞增殖
- 角质细胞生长因子对放化疗引起胸腺萎缩的增殖作用被引量：1
- 2010年
- 观察角质细胞生长因子对放疗和环磷酰胺引起胸腺萎缩的增殖作用。取正常BALB/C雄性小鼠,随机分为KGF处理组和对照组。KGF处理组和对照组均先给予4.5Gy钴射线照射,24h后分别连续皮下注射KGF(5mg/kg.d)和生理盐水7d。4周检测小鼠胸腺和脾脏组织的总细胞数和各T细胞亚群的细胞数;取正常BALB/C雄性小鼠,随机分为KGF处理组和对照组。KGF处理组和对照组均先连续腹腔注射环磷酰胺(300mg/kg)3d,注射完毕24h后再分别连续皮下注射KGF(5mg/kg·d)和生理盐水7d。2周后检测小鼠胸腺和脾脏组织的总细胞数和各T细胞亚群的细胞数。结果:细胞计数和流式细胞仪检测显示,分别经放疗和环磷酰胺处理的小鼠,与对照组相比,KGF处理组平均胸腺细胞总数和CD4SP、CD8SP、DP、DN各T细胞亚群的平均细胞数以及KGF处理组平均脾脏细胞总数和CD4SP、CD8SP各T细胞亚群的平均细胞数均有明显增加(P<0.05)。角质细胞生长因子对放疗和环磷酰胺引起的胸腺萎缩均具有增殖作用,同时可以增加成熟T细胞向脾脏的输出而增强机体的免疫功能。
- 刘彦隆张翼韩静彭红卫张宝华李校堃
- 关键词：角质细胞生长因子胸腺环磷酰胺
