吉林农业大学生命科学学院生物反应器与药物开发重点实验室
- 作品数：237 被引量：701H指数：12
- 相关作者：李天航孟璐璐王艳萍邵明龙强卫东更多>>
- 相关机构：温州医学院药学院吉林大学公共卫生学院长春工程学院机电工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>
- 成纤维细胞生长因子-8研究进展
- 成纤维细胞生长因子-8(fibroblast growth factor 8,FGF8)是成纤维细胞生长因子(FGFs)家族的成员之一.FGF8也被称为雄激素诱导的生长因子(androgen-induced growth...
- 王一田海山李校堃
- 重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性被引量：2
- 2011年
- 从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物.结果表明:目的蛋白占菌体总蛋白的30.0%以上;经阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获得的rhKGF-2纯度高于99.0%.建立了利用转受体FGFR2-Ⅲb的BaF3细胞株进行rhKGF-2促增殖作用的活性测定方法,活性测定结果呈典型的S型曲线,并在一定范围内具有剂量依赖性.
- 田海山唐禄王晓杰王艳芳官丽莉李校堃
- 关键词：柱层析生物活性
- 烟草瞬时表达人表皮细胞生长因子(hEGF)
- 2016年
- 构建人表皮细胞生长因子(hEGF)病毒表达载体,为实现h EGF在烟草中瞬时表达提供理论和实验依据。PCR扩增获得hEGF基因,将其连接到马铃薯病毒表达载体pGR107上,利用农杆菌介导法感染烟草叶片,对其进行转录水平和翻译水平检测。根据GFP的表达确定收获hEGF时间为病毒侵染叶片后第7天;RT-PCR检测的结果表明hEGF基因在转录水平有表达;Western blotting、ELISA和MTT结果表明感染烟草叶片中有hEGF蛋白表达,表达量为总可溶蛋白的0.0103%,且具有生物活性。
- 薛萍柳月英付宏岐于欣董健伟刘秀明官丽莉
- 关键词：烟草
- KGF-2单克隆抗体间接ELISA筛选方法的建立被引量：3
- 2010年
- 目的建立KGF-2单克隆抗体间接ELISA的筛选方法 ,制备KGF-2单克隆抗体.方法以KGF-2为抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗血清.通过棋盘滴定方法确定间接ELISA的抗原包被浓度及一抗、二抗最佳工作浓度;利用建立特异性好的间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞株.结果通过棋盘滴定最终确定了500μg/L的抗原包被浓度、1∶1 000的一抗血清稀释倍数及1∶2 000的二抗血清稀释倍数;筛选到两株可稳定分泌抗体、效价较高的杂交瘤细胞株.结论该研究建立了灵敏度高、特异性好的间接ELISA筛选体系,可用于KGF-2单克隆抗体的制备及检测.
- 朱佳男姚娜官丽莉车莹李校堃
- 关键词：杂交瘤细胞
- 成纤维细胞生长因子17研究进展被引量：2
- 2016年
- 成纤维细胞生长因子17(FGF17)是成纤维细胞生长因子(FGF)家族的成员之一,并与FGF8、FGF18组成FGF8亚家族。在胚胎时期FGF17扮演重要角色,对多种组织器官起着重要作用。研究发现,FGF17不仅参与了脑部发育和神经形成,而且参与骨骼、动脉的发育和肿瘤等生物过程。现针对FGF17的特点,及其在胚胎发育、神经系统、癌症等方面的作用进行综述。
- 吴美玉王海军程继亮翟凤李校堃姜潮
- 关键词：胚胎发育神经系统癌症
- 大豆干旱胁迫下miRNA与mRNA荧光定量PCR内参基因的筛选被引量：14
- 2016年
- 【目的】通过分析大豆中候选内参基因的稳定性,筛选大豆干旱胁迫处理条件下适合成熟miRNA、前体miRNA及靶基因mRNA荧光定量PCR的内参基因。【方法】以干旱胁迫处理后的大豆根和叶片为材料,选择了5个成熟miRNAs和5个传统的看家基因作为候选内参基因,利用GeNorm和NormFinder程序对10个候选内参基因的稳定性进行评价。【结果】在干旱胁迫下,大豆根、叶片中,成熟miRNA定量最合适的单个内参基因分别为miR156a、miR167a,最合适的内参基因组合分别为miR1520d与miR156a、miR1520d与miR167a。前体miRNA和靶基因mRNA定量最合适的单个内参基因分别为Fbox、Act11,最合适的内参基因组合分别为Act11与Fbox、Act11与EF1A。【结论】筛选出大豆干旱胁迫条件下成熟miRNA、前体miRNA及其对应靶基因mRNA的荧光定量PCR的内参基因,最稳定内参基因数目为2个。
- 刘伟灿王骐周永刚邓宇赵利旦王兴超靳京董园园王南王法微陈欢李晓薇李海燕
- 关键词：大豆干旱胁迫内参基因
- 重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用被引量：9
- 2011年
- 目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。
- 车莹李校堃胡培声颜江华姚娜蔡琳林绍强王生育朱佳男
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体夹心ELISA
- 酸菜水对蛋鸡生产性能的影响被引量：2
- 2011年
- [目的]研究酸菜水对蛋鸡产蛋性能的影响。[方法]将2 520只同日龄、同品种、同饲养条件的蛋鸡随机分成4组,分别饲喂酸菜水、恩诺沙星、蜡样芽孢杆菌和正常水4种不同的饮水剂。试验期为8周,记录各组蛋鸡的死亡情况、产蛋数及淘汰只数。[结果]通过4种不同饮水剂的对比研究发现,饲喂酸菜水组蛋鸡的死亡率和淘汰率均降低,且产蛋率得到显著提高,与饲喂常水组存在显著差异(P<0.05)。而饲喂恩诺沙星和蜡样芽孢杆菌饮水剂对蛋鸡的生产性能有一定影响,但与饲喂常水差异不显著。[结论]酸菜水能较好的调节蛋鸡的肠道微生态环境,对蛋鸡的成活率、产蛋率和抗病能力都有显著的促进作用。
- 赵珺秦玉侠
- 关键词：微生态制剂蛋鸡
- 成纤维细胞生长因子23蛋白原核表达及条件优化
- 2013年
- 目的制备具有生物学活性的可溶性重组人成纤维细胞生长因子23(FGF23),并探讨其最佳诱导表达条件。方法克隆FGF23和SUMO-FGF23两个cDNA序列,分别与原核表达载体pET3c与pET22b相连,转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)和BL21(DE3)宿主菌中,对FGF23表达的最佳质粒和宿主菌组合进行筛选,并对Rosetta(DE3)/pET22b-SUMO-FGF23重组菌株的最佳诱导表达条件进行优化。结果只有pET-SUMO-FGF23的质粒和Rosetta(DE3)的组合有FGF23蛋白质表达;融合蛋白在16℃、0.4 mmol/L IPTG诱导19 h以可溶形式表达,且上清表达量占菌体总蛋白的28%。结论本研究成功获得了高表达量及可溶性的重组FGF23,最佳表达条件是16℃、0.4 mmol/L IPTG诱导表达19 h。
- 倪培刘孝菊腾春燕王春娥肖贺欣李校堃于庭
- 利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21)被引量：5
- 2011年
- 【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。
- 付宏岐李海燕庞实锋杨晶李洪志薛萍刘秀明李营王艳芳李校堃
- 关键词：农杆菌生物反应器番茄
