江苏省自然科学基金(BK2003078)
- 作品数：6 被引量：57H指数：4
- 相关作者：徐幸莲周光宏黄明赵莲王俊更多>>
- 相关机构：南京农业大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学农业科学更多>>
- 牛肉宰后嫩化机制的研究被引量：23
- 2004年
- 为了阐明牛肉的成熟机理,本试验模拟尸僵后牛肉的内在环境和成熟温度,将纯化后的钙激活酶 (μ-Calpain)、内源性钙激活酶 专一抑制剂(Calpastatin)、肌原纤维和钙激活酶 外源性抑制剂抑亮酶肽(Leupeptin)用于6个不同的处理组合,反应不同时间后,分别做变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析(Western-blotting)。结果表明,Ca2+(100μM)对肌原纤维没有降解作用,而在含Ca2+(100μM)的反应体系中,μ-Calpain对肌间线蛋白(Desmin)和肌钙蛋白T(Troponin-T)都有明显的降解作用,且降解产物和宰后牛肉自然成熟条件下的降解产物类似;Calpastatin不能完全抑制μ-Calpain的活性;离体反应和自然成熟的牛肉中的肌动蛋白都没有发生变化。以上结论表明Ca2+很可能是通过激活μ-Calpain而间接发挥对肌原纤维的降解作用,而溶酶体组织蛋白酶在牛肉成熟的早期对嫩度的改善贡献不大。
- 黄明周光宏徐幸莲王俊
- 关键词：牛肉嫩化钙离子
- m-钙激活酶的分离纯化方法研究被引量：3
- 2006年
- 本试验对牛脾脏中的m-钙激活酶进行了分离纯化,以便进一步研究其动力学特性和在牛肉成熟中的作用。对宰后30min牛肉匀浆后利用超高速冷冻离心、离子交换层析、疏水层析等技术,从中分离纯化出了m-钙激活酶,测得其比活力为39.7U/mg。利用变性电泳对纯化后的样品进行了验证。
- 黄明徐幸莲马汉军赵莲周光宏
- 关键词：纯化
- 不同注射处理对牛肉剪切力和肌原纤维小片化指数的影响被引量：19
- 2005年
- 本文研究了不同注射处理对牛肉在成熟过程中剪切力,肌原纤维小片化指数(MFI)的影响。3头改良黄牛(鲁西黄牛×犁木赞)在屠宰厂按照标准的屠宰工艺屠宰并预冷20h后取样,将样品给予7个不同的处理,每个处理分别按样品重10%注射蒸馏水(作为对照)、200mmol/L CaCl2、200mmol/L EGTA、200mmool/L ZnCl2、0.2mg/ml亮肽素、0.2mg/ml亮肽素+1%Triton X-100、1%Triton X-100,处理后将样品分别成熟3、8、16d后测一些指标变化。结果发现注射外源性钙激活酶抑制剂(亮肽素,ZnCl2)显著降低了牛肉的成熟速度,使牛肉剪切力增加,MFI降低;而注射CaCl2则相反,且注射CaCl2后牛肉成熟4d时的剪切力和对照组成熟16d时的差异不显著(p>0.05)。
- 黄明周光宏徐幸莲赵莲
- 关键词：牛肉剪切力
- 钙离子溶液浸泡处理对牛肉肌原纤维的影响被引量：16
- 2004年
- 用 0、 0 1、 1、 10、 10 0、 2 0 0和 30 0mmol·L-1CaCl2 溶液对宰后牛肉进行浸泡处理 ,测定肉样的肌原纤维小片化指数 ,观察肌原纤维超微结构变化 ,并对全肌肉蛋白进行了SDS PAGE电泳分析。结果表明 ,10 0、 2 0 0和 30 0mmol·L-1CaCl2 溶液处理组的肌原纤维小片化指数随着时间显著增加 ,且随着浓度增大 ,上升幅度增加。 30 0mmol·L-1CaCl2溶液处理后 ,肌原纤维结构裂解先发生在Z线附近 ,然后Z线和M线发生降解。SDS PAGE电泳结果显示 ,2 0 0和 30 0mmol·L-1CaCl2 溶液处理组全肌肉蛋白中的肌动。
- 汤晓艳周光宏徐幸莲张迎阳
- 关键词：牛肉钙离子肌原纤维蛋白降解
- 牛脾脏中μ-钙激活酶的分离纯化方法研究被引量：4
- 2006年
- 本试验旨在通过采用多种生物学分离手段和多个分离步骤从牛脾脏中分离纯化μ-钙激活酶。对宰后30min黄牛脾脏通过匀浆后利用超高速冷冻离心、离子交换层析、疏水层析、分子筛等技术,从中分离纯化出了μ-钙激活酶,最后得到的μ-钙激活酶的比活力为38.4U/mg。并对分离纯化过程中各主要步骤μ-钙激活酶的总活性、比活力等参数变化进行了测定,同时采用不连续十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和活性电泳(caseinzymography)对纯化过程中的样品进行了鉴定。
- 黄明藏大存徐幸莲赵莲周光宏
- 关键词：纯化柱层析活性电泳
- Calpain3的初步提取和对其自动降解性的研究被引量：1
- 2006年
- 骨骼肌特异性的Calpain3(又称Ncl-1、p94、CAPN3)是除μ-Calpain和m-Calpain以外,另一个可能与肉类嫩化有关的Calpains成员。由于Calpain3具有很强的自动降解性,使得对其的提取纯化和依钙性的研究很难进行。本实验从牛肉背最长肌中提取到了具有一定活性的Calpain3粗酶液,通过蛋白质免疫印迹法,对Calpain3的随时间的降解变化进行了研究,并对不同Ca2+浓度下Calpain3自动降解的变化进行了比较系统的探讨,研究发现Calpian3的自动降解分为四个连续性的过程:首先降解为89、68和58kDa的中间片断,然后进一步降解为55kDa的片断并在一定时间内保持不变,其降解的速度与Ca2+浓度和反应时间成正比。
- 童敏徐幸莲周光宏
- 关键词：钙离子
