国家教育部博士点基金(200807120017)
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 相关作者：樊明涛焦凌霞何鸿举吕丽娟刘晓娇更多>>
- 相关机构：西北农林科技大学河南科技学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金陕西省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 应用PCR技术快速检测腐烂苹果中扩展青霉菌被引量：5
- 2011年
- 利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶基因序列,设计一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chainreaction,PCR)反应快速检测腐烂苹果中的扩展青霉。反应的特异性和敏感性以及反应的最适条件等试验的结果表明:该引物具有很高的特异性和灵敏性,只扩增扩展青霉DNA,而不扩增其他真菌DNA;菌体的检测限为1.34×103个孢子/mL,DNA的检测限为2.40×10-2μg/mL;反应的最适退火温度范围为54～59℃,最适模板浓度范围为2.40～5.28μmol/L。该方法具有简单、快速、特异性好和灵敏性高等特点,可为快速检测腐烂苹果中扩展青霉的实际应用提供借鉴。
- 何鸿举焦凌霞樊明涛张建兵吕丽娟刘晓娇李亚菲
- 关键词：扩展青霉DNA模板
- 基于PCR法快速检测扩展青霉被引量：1
- 2009年
- 对PCR快速检测扩展青霉的方法进行了研究,重点考察了退火温度对检测结果的影响,评价了该方法的灵敏度,并考察了该法在苹果样品检测中的应用效果。结果表明,退火温度为51~61℃,扩展青霉3.5425 DNA扩增效果良好,纯菌培养所得菌体的DNA质量浓度的检测限为2.9×10^-3μg/mL,菌液的检测限低于15 cfu/mL,苹果样品对菌体DNA检测结果无影响。
- 袁晖樊明涛刘玉波杨永恒李瑜焦凌霞
- 关键词：苹果扩展青霉PCR
- 扩展青霉DNA提取及PCR检测条件的优化被引量：1
- 2011年
- 研究扩展青霉DNA的提取及其聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测条件的优化。分别采用玻璃珠法、氯化苄法、玻璃珠+氯化苄法提取扩展青霉菌及对照菌株的基因组DNA,经紫外测定和电泳检测实验,分析提取DNA的质量浓度和纯度;同时,根据扩展青霉多聚半乳糖醛酸酶基因内一段保守序列设计合成一对288bp的扩增引物,并对PCR检测条件进行优化。结果表明:玻璃珠+氯化苄法提取到的DNA质量浓度和纯度较理想,扩展青霉DNA可获得良好的特异性扩增,PCR扩增的最适退火温度为53～59℃,最适引物浓度为0.04～0.16μmol/L,最适模板质量浓度为2.40～5.28μg/mL,dNTPs浓度对PCR扩增影响不大。运用实验所得优化参数检测扩展青霉菌,整个过程仅需3～4h,和传统的培养检测法相比,该方法可有效提高检测效率,可进一步将该方法应用于实践。
- 何鸿举樊明涛刘晓娇吕丽娟焦凌霞
- 关键词：扩展青霉基因组DNA
- 微波提取苹果汁中脂环酸芽孢杆菌DNA的PCR检测方法研究被引量：2
- 2012年
- 根据Genbank公布的酸土脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus acidoterrestris DSM 3922T)鲨烯环化酶序列自行设计一对引物,利用微波技术直接从果汁样品中提取目标菌DNA,对引物特异性、微波法提取DNA的扩增效果及检测灵敏度进行探讨。结果表明:微波功率1000W、处理时间30s、经5000r/min离心2min即可获得酸土脂环酸芽孢杆菌基因组DNA,所得模板质量符合聚合酶链式反应检测要求,目的条带清晰,检测时间仅为2h,检测限为200CFU/mL,有望真正应用于苹果汁生产的在线检测。
- 焦凌霞华承伟樊明涛魏新元
- 关键词：脂环酸芽孢杆菌苹果汁聚合酶链式反应检测限
- 用于PCR检测的扩展青霉基因组DNA提取方法比较被引量：4
- 2011年
- 为寻找一种经济、简便、高效的基因组DNA提取方法,进一步开展扩展青霉的分子生物学研究,采用氯化苄法、玻璃珠法、玻璃珠+氯化苄法、试剂盒法4种方法提取扩展青霉的基因组DNA,并测定DNA质量浓度以及进行PCR和电泳分析,比较不同提取方法的效果。结果表明,4种方法均可提取到基因组DNA,其抽提质量优劣依次为试剂盒法、玻璃珠+氯化苄法、玻璃珠法、氯化苄法。其中玻璃珠+氯化苄法提取效率接近试剂盒法,效果良好,并且此法成本低廉、操作简单、结果稳定,可代替昂贵的试剂盒法用于扩展青霉基因组DNA的提取。
- 何鸿举焦凌霞樊明涛刘晓娇吕丽娟魏新元
- 关键词：DNA提取PCR
- 扩展青霉基因组DNA五种提取方法比较被引量：2
- 2011年
- 为寻找一种适合于扩展青霉基因组DNA的提取方法,比较了固体培养、液体静置培养和液体振荡培养3种培养方式的提取效果,分别采用氯化苄法、蜗牛酶法、CTAB法、SDS法及异硫氰酸胍法提取扩展青霉菌基因组DNA,经DNA质量浓度测定及电泳分析,比较5种方法的差异,并利用扩展青霉的多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase)基因内一段保守序列,设计PCR引物,扩增大小为288bp的特异目的基因,检测其灵敏性。结果表明:固体培养的方式较适合扩展青霉基因组DNA的提取,另外5种提取方法均能提取出扩展青霉菌基因组DNA,扩增出目的条带,其中氯化苄法和蜗牛酶法所提DNA的纯度均较好,但蜗牛酶法所提DNA量较少。因此,氯化苄法是5种提取方法中最可靠的DNA提取方法,所提DNA浓度高、纯度好、结果稳定,可作为PCR反应的模板进行特异性扩增,且该方法的最低检测限大约为1.01×10-1μg/mL。
- 李亚菲何鸿举吕茜樊明涛
- 关键词：DNA提取SDS法异硫氰酸胍法
