国家自然科学基金(31171659)
- 作品数：11 被引量：46H指数：4
- 相关作者：王转花李玉英崔晓东张立伟白崇智更多>>
- 相关机构：山西大学山西省中医院山西省科学技术情报研究所更多>>
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- 相关领域：生物学医药卫生理学轻工技术与工程更多>>
- 双抗夹心酶联免疫吸附法检测荞麦过敏蛋白被引量：2
- 2015年
- 提取制备荞麦过敏原蛋白（TBt）并免疫动物,分别制备鼠多克隆抗体和兔多克隆抗体,建立了双抗夹心酶联免疫吸附检测法（ELISA）用于检测食品中的荞麦过敏原。SDS-PAGE结果表明,纯化的TBt纯度达到98%以上,鼠抗血清效价为1∶6400。建立的双抗夹心ELISA法对荞麦过敏原蛋白的最低检测限为0.16μg/m L,线性范围为0.16~16μg/m L。并采用建立的双抗夹心ELISA法对市场出售的15种食品中荞麦过敏成分进行了检测。结果显示,该方法对绝大多数食品中的荞麦过敏原都有很好的特异性及灵敏性,说明该法可用于食物过敏原的诊断及食品中微量荞麦过敏成分的检测。
- 张新瑀崔晓东杨欢葛川王转花
- 关键词：荞麦多克隆抗体酶联免疫吸附法
- 槲皮素对人胃癌SGC7901细胞增殖、迁移及细胞周期的影响
- 槲皮素是黄酮类化合物家族中的重要成分,存在于许多水果、蔬菜中,对多种恶性肿瘤细胞具有增殖抑制效应。荞麦是一种药食同源植物,含有丰富的矿质营养元素和生物黄酮类物质。本研究利用先前从养麦中提取的槲皮素,在体外作用人胃癌SGC...
- 赵淑娟李玉英王转花
- 关键词：槲皮素SGC7901细胞增殖迁移细胞周期
- 苦荞凝集素的纯化及性质鉴定被引量：7
- 2015年
- 目的:从苦荞麦种子中提取、纯化苦荞凝集素,对其凝血及酶学活性等性质进行初步研究。方法:采用缓冲液抽提、硫酸铵沉淀、透析及DEAE-纤维素阴离子交换层析(DEAE fast flow,DEAE FF纯化凝集素;高碘酸希夫(periodic acid-Schiff,PAS染色鉴定其蛋白种类,硫酸-苯酚法测定糖含量;凝血实验和糖抑制实验检测其凝血活性和结合糖特异性;以对硝基苯磷酸二钠为底物,测定磷酸酯酶活性。结果:从苦荞麦种子中获得了一种具有凝血功能的蛋白质——苦荞凝集素(tartary buckwheat lectin,TBL)。纯化的TBL在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE图谱上显示单一条带,根据SDS-PAGE计算其分子质量约为62 kD。PAS染色证明TBL为糖蛋白,糖含量为5.8%。凝血实验表明TBL对人的O型血红细胞具有特异性凝集作用,效价为15μmL对其他血型的红细胞没有凝血效应。血凝活性被D甘露糖和D-葡萄糖抑制,推测其是一种甘露糖结合凝集素。酶学性质鉴定显示,TBL具有磷酸酯酶活性,米氏常数Km=9.86×10-3 mol/L。结论:TBL可能是苦荞麦种子中的一种具有多种酶学功能的甘露糖凝集素。
- 申剑崔晓东李玉英王转花
- 关键词：苦荞凝集素糖蛋白磷酸酯酶
- 苦荞异槲皮苷对人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响被引量：13
- 2014年
- 从苦荞中提取制备异槲皮苷,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。将异槲皮苷作用于人胃癌SGC-7901细胞和人肾上皮细胞系293T,通过噻唑蓝法检测异槲皮苷对其增殖的影响;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamino-2-phenyl indole,DAPI)荧光染色法观察细胞核的形态学变化;划痕擦伤迁移实验检测异槲皮苷对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测异槲皮苷对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响。结果表明:苦荞异槲皮苷可以抑制SGC-7901细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性,当用100μmol/L异槲皮苷作用细胞48 h后,对SGC-7901细胞的增殖抑制率达到35.92%,而对人肾上皮细胞系293T的增殖抑制率仅为3.15%;DAPI荧光染色法观察异槲皮苷处理细胞后,染色体凝聚,有凋亡小体产生;划痕擦伤实验显示,异槲皮苷能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,异槲皮苷可使G1和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加。综上所述,苦荞麦异槲皮苷能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。
- 李玉英赵淑娟白崇智张立伟王转花
- 关键词：异槲皮苷人胃癌细胞SGC-7901细胞周期细胞迁移
- rBTI联合紫杉醇通过激活NFκB/p65促进MCF-7细胞凋亡
- 2014年
- rBTI、紫杉醇均有抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡等作用,但两者联合用药对肿瘤细胞的影响尚不明确.本文通过MTT比色法检测rBTI与紫杉醇联合作用对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术分析,对MCF-7细胞凋亡以及ROS水平进行检测;利用qRT-PCR和Western印迹方法,检测rBTI与紫杉醇联合作用后凋亡因子表达情况.结果表明,rBTI（2.5μmol/L）与紫杉醇（0.05~0.5μmol/L）联合作用于MCF-7细胞后,能显著抑制其增殖.将rBTI与紫杉醇进行联合协同用药,诱导了MCF-7细胞凋亡及ROS的产生;同时与rBTI单独作用时相比,联合作用明显上调了p53、Bax的表达,促进了IκBα蛋白的磷酸化以及NFκB/p65的核转位;与rBTI组和紫杉醇单独作用组相比,两者联合用药明显下调了Bcl-2和CyclinD1的表达.本研究证实,rBTI联合紫杉醇通过诱导ROS的产生,激活NFκB/p65信号转导途径,协同促进MCF-7细胞的凋亡.
- 李玉英吴燕子白崇智崔晓东王转花
- 关键词：紫杉醇核转录因子MCF-7细胞活性氧凋亡
- 新的蒽醌类衍生物1-硝基-2-酰基蒽醌-苯丙氨酸通过抑制NF-κB/p65信号通路降低乳腺癌MCF-7细胞的迁移能力被引量：5
- 2017年
- 肿瘤细胞的侵袭和转移与大多数癌症患者的死亡率密切相关。了解肿瘤细胞的迁移机制可为阻断肿瘤细胞的转移提供一个关键的策略。蒽醌衍生物具有一定的抗肿瘤作用,我们结合抗肿瘤药物的作用机制以及蒽醌类衍生物的构效关系,设计合成了一类新的酰胺蒽醌衍生物1-硝基-2-酰基蒽醌-苯丙氨酸(简称C7),发现其具有很好的抗肿瘤活性。为了探究蒽醌类衍生物C7对人乳腺癌MCF-7细胞迁移的作用及其机制,本文首先采用MTT比色法检测蒽醌类衍生物C7对人乳腺癌细胞MCF-7生长活力的影响,结果证明较高浓度(60~100μg/m L)的蒽醌类衍生物C7对乳腺癌MCF-7细胞的增殖具有明显的抑制作用。其次,采用细胞划痕实验检测C7对MCF-7细胞迁移的影响,发现较低浓度(20~40μg/m L)的蒽醌类衍生物C7可以显著降低MCF-7细胞的迁移率。为进一步探究C7抑制MCF-7细胞迁移的分子机制,通过免疫荧光技术检测NF-κB/p65蛋白的核转位情况;同时利用qRT-PCR及Western印迹实验检测C7对MCF-7细胞中NF-κB/p65通路及迁移相关基因和蛋白质表达的影响。结果表明C7可以下调细胞质中IκBα的磷酸化,降低NF-κB/p65蛋白的核转位,减小MMP-2和MMP-9蛋白的表达。因此,C7可能是通过抑制NF-κB/p65信号通路的活化,抑制MMP-2和MMP-9蛋白的表达,进而抑制MCF-7细胞的迁移。
- 李玉英牛敏张立伟王转花
- 关键词：蒽醌类衍生物基质金属蛋白酶2基质金属蛋白酶9NF-ΚB/P65
- 苦荞麦槲皮素对人胃癌细胞SGC-7901增殖及细胞周期的影响被引量：7
- 2013年
- 从苦荞中提取出槲皮素,研究其对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡、迁移和细胞周期的影响。MTT法检测槲皮素作用于293T、SGC-7901、HepG2和HeLa细胞后,对其生长的影响;划痕擦伤迁移实验检测槲皮素对SGC-7901细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测槲皮素对SGC-7901细胞凋亡及细胞周期的影响;RT-PCR技术检测细胞周期调控因子的表达情况。结果显示,苦荞麦槲皮素对几种肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用,其中对胃癌细胞SGC-7901的作用最为显著,而对正常细胞293T作用很小;划痕擦伤实验显示,槲皮素能抑制SGC-7901细胞的迁移;流式细胞术检测结果表明,槲皮素可使G1期和S期细胞减少,G2/M期细胞增多,且细胞凋亡率明显增加;RT-PCR结果表明,p53转录增加,CyclinD1、CDK2、CDK7转录减少。综上所述,苦荞麦槲皮素能够诱导SGC-7901细胞发生凋亡,阻断细胞周期并抑制细胞增殖和迁移。
- 李玉英赵淑娟白崇智崔晓东王转花
- 关键词：槲皮素SGC-7901细胞周期
- 黑豆脂氧合酶的制备及其酶学活性的鉴定被引量：4
- 2016年
- 从黑豆种子中分离纯化1种黑豆脂氧合酶——bs LOX,对其酶学活性及降解花色苷等性质进行初步研究。采用缓冲液抽提、硫酸铵沉淀、透析、阳离子交换层析及凝胶层析等方法纯化出具有β-葡萄糖苷酶活性的bs LOX;分别以亚油酸钠和对硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(p-nitrophenylβ-D-glucopyranoside,p NPG)为反应底物鉴定bs LOX的脂氧合酶活性和β-葡萄糖苷酶活性。从黑豆种子中纯化获得的bs LOX在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electropheresis,SDS-PAGE)图谱显示单一条带,分子质量约为95 k D。酶活性分析表明,纯化的bs LOX以亚油酸钠为底物时,酶活力为13 U/m L;当以p NPG为底物在405 nm波长处检测到了对硝基苯酚的生成,从而推测bs LOX具有β-葡萄糖苷酶活性。高效液相色谱实验结果表明bs LOX可以降解花色苷(矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-O-葡萄糖苷)为花色素(矢车菊素、矮牵牛素)。由于降解作用不完全,继而发现花色素能抑制bs LOX的酶活性。bs LOX是黑豆中的一种兼具β-葡萄糖苷酶功能的蛋白质,而花色素可能是天然的bs LOX抑制剂。
- 李茹崔晓东李玉英李晨王转花
- 关键词：黑豆脂氧合酶花色苷花色素
- Effects on Cell Viability and Apoptosis of C3 in HCT116 Cells
- Anthraquinone compounds are the largest number of the various natural quinone,which exists in kind of traditio...
- Yuying LiJie ZhengZhuanhua Wang
- 关键词：ANTHRAQUINONEC3HCT116APOPTOSIS
- 文献传递
- 重组荞麦胰蛋白酶抑制剂延长C.elegans寿命的作用机制被引量：3
- 2016年
- 重组荞麦胰蛋白酶抑制剂（recombinant buckwheat trypsin inhibitor,r BTI）是一种来源于荞麦PotatoⅠ抑制剂家族的丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有很好的生物活性及功能。先前的研究表明,r BTI在秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）中具有很好的延长寿命的性质,但其具体的作用机制还不太清楚。本文的研究证明,r BTI能够调节转录因子DAF-16的转录活性,进而影响线虫的寿命,且该性质与其胰蛋白酶抑制活性密切相关。通过定点突变技术,分别对r BTI的45位、53位和44位氨基酸活性位点进行突变,获得了4种不同胰蛋白酶抑制活性的r BTI突变体,分别命名为r BTI-R45A,r BTI-R45F,r BTI-W53R和r BTI-P44T。经典模式生物秀丽隐杆线虫寿命检测实验显示,野生型r BTI可以明显延长C.elegans的寿命,且在0-10μmol/L范围内具有浓度依赖性。和未处理对照组相比,10μmol/L野生型r BTI延长寿命幅度可达到14.5%,但是突变体r BTI-R45 A,r BTI-R45 F和r BTI-W53 R均不同程度失去了延长寿命的功能。利用荧光显微观察及qRT-PCR等方法进一步研究发现,野生型r BTI可增强寿命调控转录因子DAF-16的转录活性。与寿命检测实验结果一致,4种r BTI突变体均不能使DAF-16转录活性增强。上述结果表明,在C.elegans中,r BTI可增强长寿因子DAF-16的转录活性,进而延长虫体寿命,且该功能的发挥依赖于其适当的胰蛋白酶抑制活性。本文的结果为进一步研究开发r BTI的功能提供了实验支持和理论基础。
- 李娇崔晓东马晓丽王转花
- 关键词：突变体秀丽隐杆线虫
