国家自然科学基金(81072483)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
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- 人高迁移率族蛋白B1,高迁移率族蛋白B1 A box和B box的原核表达、纯化及高迁移率族蛋白B1多克隆抗血清的制备
- 2011年
- 目的:获取重组人高迁移率族蛋白B1(HMGB1),HMGB1Abox和Bbox的纯化蛋白,制备HMGB1的多克隆抗血清。方法:采用PCR方法扩增人HMGB1,HMGB1的Abox和Bbox目的基因片段,构建原核表达载体,进行原核表达与蛋白纯化,然后用HMGB1免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗血清。采用ELISA检测抗血清效价,用免疫组化检测HMGB1在小鼠肝损伤组织中的表达。结果:成功构建了人HMGB1,HMGB1的Abox和Bbox原核表达载体pET28-HMGB1、pET28-Abox、pET28-Bbox,在E.coli BL21中表达,镍亲和层析柱提纯,获取纯净目的蛋白。HMGB1免疫新西兰大白兔后,抗血清效价为1:2,000,000,具有高度特异性。免疫组化显示小鼠坏死肝组织HMGB1表达增加。结论:本研究获得了人HMGB1以及HMGB1的Abox和Bbox的纯化蛋白,制备了人HMGB1的多克隆抗血清,为HMGB1的结构、组织表达谱及其功能的研究奠定了基础。
- 周红颜任向荣苏绍波
- 关键词：HMGB1BOXBOX蛋白表达纯化
- 大鼠视神经损伤后Toll样受体4在视网膜中的表达被引量：1
- 2013年
- 背景Toll样受体4（TLR4）是一种重要的免疫相关受体，在多种疾病的发生中起致炎作用。研究发现，视神经损伤后继发的炎症反应可进一步引起视网膜损伤，因此视神经损伤后TLR4的表达及其效应值得研究。目的研究大鼠视神经损伤后视网膜TLR4的表达情况。方法选取成年健康SPF级SD大鼠24只，按随机数字表法随机分为视神经损伤3d组和视神经损伤7d组。取大鼠右眼用视神经钳夹法制备视神经损伤模型，左眼不予处理为对照组。分别于视神经损伤后3d和7d用过量麻醉法处死大鼠并分离视网膜，采用免疫荧光法检测各组大鼠视网膜中TLR4的表达；分别采用逆转录PCR法（RT—PCR）和Westernblot法检测大鼠视网膜中TLR4mRNA及其蛋白的表达；采用TUNEL染色法观察各组大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的凋亡情况。结果视网膜免疫荧光法检测结果显示，TLR4在大鼠视网膜中呈绿色荧光，视神经损伤3d组和视神经损伤7d组造模眼视网膜中的荧光强度较对照组左眼均明显增强，绿色荧光主要分布在视网膜内层。RT—PCR法检测表明，模型眼视网膜损伤后3d和7d视网膜中TLR4mRNA相对表达量分别为2．92±0．06和3．92±0．12，对照眼TLR4mRNA的相对表达量分别为2．87±0．12和3．44±0．17，大鼠模型眼TLR4mRNA表达的灰度值较对照眼明显增加，差异均有统计学意义（t3d=-12．888，P〈0．001；t7d=-4．669，P=0．010）。Westernblot法检测显示，大鼠模型眼视网膜损伤3d和7d视网膜中TLR4蛋白的相对表达量分别为1．14±0．05和1．49±0．03，对照眼TLR4蛋白的相对表达量分别为0．99±0．09和1．38±0．07，模型眼视网膜中TLR4蛋白表达量明显高于对照眼，差异均有统计学意义（t3d=-11．324，P〈0．001；t7d=-5．638，P=0．005）。TUNEL染色显示，模型眼RGCs凋亡数较对照眼增多。结论TLR4在视神经损伤大鼠视网膜内层的表达�
- 王璐苏绍波柳夏林
- 关键词：TOLL样受体4视神经炎症视网膜神经节细胞
