黄金宇
- 作品数：1 被引量：2H指数：1
- 供职机构：武汉科技大学医学院公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 精子相关抗原6(SPAG6)与TCTE3蛋白间相互作用探讨被引量：2
- 2017年
- 目的:探讨精子相关抗原6(sperm associated antigen 6,Spag6)和T复合体相关睾丸表达3(T-complex associated testis expressed 3,TCTE3)之间的相互作用。方法:PCR法观察Tcte3在雄性小鼠各组织中的表达;以小鼠睾丸c DNA为模板,扩增Tcte3序列,构建Tcte3/p GADT7、Tcte3/p EGFPN2重组质粒;以Tcte3/p EGFPN2转染CHO细胞和COS-1细胞,免疫荧光染色及Western blot检测TCTE3在细胞中的定位和表达;以Spag6/p GBKT7和Tcte3/p GADT7进行酵母双杂交实验,提取酵母蛋白后采用Western blot检测TCTE3与SPAG6之间是否存在直接的相互作用。结果:Tcte3在睾丸、脑、肝、肾、肺、脾、肌肉中均有表达;酶切和测序鉴定证实Tcte3/p GADT7和Tcte3/p EGFPN2重组质粒均构建成功;体外实验发现TCTE3主要在CHO和COS-1细胞质中表达,当与SPAG6质粒共转染后,TCTE3被募集至细胞微管中表达;酵母双杂交实验显示TCTE3/SPAG6组合后,在缺少SD/-Leu/-Trp/-His的培养板上有菌落生成,Western blot显示菌落中TCTE3、SPAG6蛋白表达显著,分子量正确。结论:精子相关抗原SPAG6与TCTE3之间存在直接的相互作用,SPAG6可募集TCTE3至细胞微管中表达。
- 双超凡柳赟昊刘晙玭闵洁李梦颖桂媛黄金宇张玲张志兵
- 关键词：男性不育酵母双杂交蛋白表达
