刘慧鑫
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中国B.afzelii基因型莱姆病螺旋体GDsh1表面蛋白VlsE保守区段的克隆表达及抗原性分析
- 2016年
- 目的克隆表达中国莱姆病螺旋体B.afzelii基因型菌株GDsh1的表面蛋白VlsE保守区段,并对其抗原性进行分析,为制备中国莱姆病重组抗原ELISA检测试剂盒提供依据。方法结合文献,下载并比对PubMed上所有莱姆病螺旋体B.a型菌株的VlsE基因序列,确定保守区段,设计引物,扩增GDsh1的VlsE基因片段。将扩增产物与载体PET-32a连接,转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达。对重组载体进行序列测定,表达产物用SDS-PAGE和Western blot分析。利用重组VlsE蛋白制备ELISA试剂盒,检测83份莱姆病阳性血清,90份阴性血清以及90份梅毒血清,计算重组试剂盒的灵敏度和特异性。并与科室已有的全菌蛋白ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果成功克隆表达了B.afzelii型VlsE保守区蛋白,Western blot结果显示VlsE保守区蛋白与免疫兔血清有较强的抗原抗体反应。ELISA结果表明:重组VlsE蛋白的灵敏度60.2%低于全菌蛋白的灵敏度92.8%(P<0.001);特异性分别为73.3%、68.9%,差异无统计学意义(P=0.511)。在检测梅毒血清上特异性分别为83.3%、18.9%,重组蛋白的特异性远远高于全菌蛋白(P<0.001)。结论重组VlsE基因保守区段蛋白在莱姆病的检测中具有一定的灵敏度和特异性,且在区分梅毒血清与莱姆病血清上,其特异性远远高于全菌蛋白,在莱姆病血清学检测中具有不容忽视的重要意义。
- 刘炜张琳侯学霞刘慧鑫郝琴万康林
- 关键词：莱姆病螺旋体克隆表达抗原性分析
- 中国莱姆病螺旋体菌株bmpA基因中人B细胞表位多态性分析被引量：1
- 2016年
- 目的研究我国伯氏疏螺旋体(Borrelia burgdorferi sensu lato),即莱姆病螺旋体菌株中bmpA基因及其人B细胞表位区的序列多态性。方法选取61株莱姆病螺旋体分离株,PCR扩增其bmpA基因并测序后,结合4种基因型参考菌株序列,与从免疫表位数据库(Immune Epitope Database,IEDB)中查询到的B细胞表位序列进行比对分析。结果中国B.garinii基因型菌株的cluster2、cluster3以及B.afzelii和B.valaisiana基因型所有菌株与参考序列比对后发现分别有3、9、5和18个异义突变。B细胞表位改变主要发生在B.afzelii基因型全部分离株和B.garinii基因型的cluster3及5株非成簇菌株。B.afzelii基因型菌株在B细胞表位区的异义突变A125S影响了2个B细胞表位;B.garinii基因型的cluster3和5株非成簇菌株B细胞表位区的3个异义突变导致5个B细胞表位均发生改变。结论中国莱姆病螺旋体bmpA基因在4种基因型间和B.garinii基因型内存在较大多态性。
- 刘慧鑫郝琴刘炜侯学霞张琳万康林
- 关键词：莱姆病螺旋体B细胞表位多态性
- 中国莱姆病螺旋体FP1外膜蛋白C克隆表达及免疫保护性初步研究被引量：1
- 2015年
- 目的：克隆并表达中国莱姆病螺旋体（ Borrelia afzelli）基因型代表菌株FP1的外膜蛋白C（ OspC）,并对其免疫保护性进行初步研究。方法聚合酶链反应（ PCR）扩增莱姆病螺旋体FP1的ospC基因,克隆至原核表达载体pET-30a上,构建pET-30a-OspC重组质粒,转入大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中,利用IPTG诱导表达。表达产物用Ni-IDA树脂层析纯化,SDS-PAGE电泳、Western blot分析。将rOspC免疫新西兰白兔,间接免疫荧光方法（ IFA）检测免疫前、后兔血清中特异性抗体IgG的滴度,进行体外中和试验,从而对OspC的免疫保护性有初步的了解。结果重组质粒pET-30a-OspC构建成功并在宿主菌内高效表达；Western blot表明rOspC与莱姆病螺旋体FP1的多抗有明显的抗原抗体反应；rOspC免疫兔血清IgG效价显著升高（1∶3200或1∶6400）；体外中和试验表明实验组的免疫兔血清均能中和106个/ml的莱姆病螺旋体。结论莱姆病螺旋体的rOspC蛋白具有一定的免疫保护性,可作为研制莱姆病多价亚单位疫苗的一个成分。
- 刘慧鑫郝琴侯学霞张琳刘炜楼永良吕建新万康林
- 关键词：莱姆病螺旋体克隆表达
- 基于最大熵模型预测青海省莱姆病的地理盼布被引量：1
- 2016年
- 目的应用最大熵模型（MaxEnt）预测青海省莱姆病的分布。方法查阅1990年以来青海省人群莱姆病的血清检测数据，共收集到6个县（互助、泽库、同德、大通、祁连、循化）的血清学结果，将互助、泽库、同德县的血清学检测结果以及青海省环境和人为活动数据[包括海拔、人口足迹、归一化植被指数（NDVI）、温度等]导入MaxEnt软件，分析环境以及人为条件适宜的莱姆病潜在地理分布，然后以大通县、祁连县、循化县血清学数据作为验证数据，与模型预测结果进行比较。结果MaxEnt预测结果显示，青海省存在3个莱姆病的热点区域，主要分布在青海省东部林区。在相关影响因子当中，NDVI对于模型的贡献最大；其次是人口足迹。用于验证模型的大通县、祁连县和循化县均分布于青海省东部。其中，循化县位于热点区域Ⅱ中，而大通县紧邻热点区域Ⅲ，位于热点区域Ⅲ的北部地区，祁连县不在预测的热点区域中，且莱姆病血清阳性率在3个调查县中为最低。模型运行良好[曲线下面积（AUC）=0．980]。结论实际的人群莱姆病血清学数据与模型预测结果基本吻合。MaxEnt模型可用于莱姆病风险分布的预测。植被和人为活动可能与莱姆病传播有关。
- 张琳侯学霞刘慧鑫刘炜万康林郝琴
- 关键词：莱姆病最大熵模型
- 莱姆病螺旋体人B细胞抗原表位多态性和OspC免疫学特性
- 莱姆病(Lyme disease，LD)，也称莱姆疏螺旋体病(Lyme Borreliosis)，是一种蜱传感染性人兽共患病。莱姆病螺旋体可引起人体多系统、器官的损害，典型症状为游走性红斑(erythema migran...
- 刘慧鑫
- 关键词：莱姆病螺旋体序列多态性免疫保护性
- 文献传递
