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水稻甲基转移酶家族成员OsMT1突变体的创建及功能分析: 2022年; 为了探究SABATH甲基转移酶家族成员在水稻中的功能,以粳稻品种中花11为实验材料,采用CRISPR-Cas9基因编辑技术对该家族成员OsMT1进行基因编辑,通过测序分析获得了5种编辑类型的突变体,包括3种纯合编辑突变体和2种杂合编辑突变体.分别用50、100和150 mmol/L的NaCl溶液对获得的OsMT1纯合突变体进行盐胁迫处理实验,结果表明,OsMT1突变体的苗长及根长明显长于野生型的苗长及根长,说明OsMT1突变体降低了水稻对盐胁迫的敏感性,增强了水稻对盐胁迫的抗性.; 田瑶王馨翊王鑫王鑫周诗晨杨晓颖胡又川梁闪闪梁闪闪张泗举; 关键词：水稻突变体盐胁迫

水稻顺式还原酮加双氧酶基因的表达及功能分析: 2017年; 【目的】农作物对逆境胁迫的耐受能力与产量息息相关,是作物育种要考虑的重要因素。文中对水稻顺式还原酮加双氧酶基因Os ARD1进行研究,分析其表达模式,明确其在水稻应对非生物胁迫中的功能,为水稻耐旱品种的分子设计及育种提供参考依据。【方法】提取不同组织器官的总RNA,利用RT-PCR方法分析Os ARD1表达的组织特异性。利用不同的非生物胁迫处理14 d大小的野生型(中花11)植株,在不同时间点提取总RNA,利用RT-PCR方法分析Os ARD1表达的受诱导情况。通过农杆菌遗传转化法转化水稻愈伤组织,经过一系列分子检测后获得稳定遗传的T1代Os ARD1的过量表达转基因植株,以转入空载体的野生型植株作为对照。将在营养液中正常培养的12 d大小的野生型和过表达幼苗移出营养液进行缺水处理并进行恢复试验。将催芽后的野生型和过表达转基因植株种子种在含有5%PEG6000的agar培养基中进行渗透胁迫处理,以不含PEG6000的agar培养基作为对照,观察二者的表型。【结果】组织特异性表达分析表明Os ARD1主要在根及成熟的组织中表达,尤其在衰老的组织中有较高表达。非生物胁迫处理表明Os ARD1的表达明显受机械损伤、高盐和渗透胁迫的诱导。获得6个独立株系的可稳定遗传的Os ARD1过量表达转基因植株。对过量表达转基因植株及空载体野生型对照进行干旱胁迫处理,缺水处理5 h后,野生型植株叶片卷曲皱缩成针状表现出严重的缺水症状,但此时过表达转基因植株叶片仍处于舒展状态;缺水处理8 h后开始复水培养3 d,野生型植株的存活率仅为10%,而过表达植株存活率为80%,远远高于野生型,说明过量表达Os ARD1提高了水稻对缺水的耐受能力。用PEG渗透胁迫模拟干旱胁迫处理6 d后发现,不含PEG6000对照组中野生型和过表达植株的幼苗生长情况没有明显的差别;在PEG处理组中,野生型幼苗; 熊炜杨波刘薇茵王荃孔晓聪靳亚军梁闪闪栾维江张泗举; 关键词：水稻 OS 干旱胁迫乙烯

过量表达OsDTH11基因对水稻穗发育和花粉育性的影响被引量：2: 2019年; 为了探究水稻成花转变基因家族成员OsDTH11的功能,采用反向遗传学方法,构建OsDTH11的过表达载体并通过农杆菌介导转化水稻,获得了水稻OsDTH11过量表达转基因植株.分子检测结果表明:OsDTH11在转基因植株中的表达明显上升,说明过量表达载体正常工作,起到了过量表达作用.表型分析发现,过量表达OsDTH11不影响水稻成花转变的时间,但转基因植株表现出穗发育不良、结实率降低(只有野生型的46%).通过碘染法进行花粉育性鉴定,与对照植株相比,过量表达OsDTH11的转基因植株花粉育性明显降低,从而降低了水稻结实率,表明OsDTH11可能在水稻穗及花的发育方面发挥作用.组织特异性表达分析结果表明:OsDTH11在水稻各个组织中均有表达,在穗中表达量很高,在分生组织、叶片和根中表达较弱.这一结果也说明OsDTH11有可能在水稻穗的生长发育过程中发挥重要作用.; 靳亚军石雨鹭邳瑞雪王荃王荃梁闪闪张泗举梁闪闪; 关键词：水稻过表达穗发育花粉育性

水稻赤霉素类受体基因OsGRL1调控水稻穗外露及籽粒大小的功能分析: 2023年; 穗的外露(穗颈长度)对水稻的产量有重要影响.穗颈过短,会造成包颈穗,影响水稻的结实率;穗颈过长,容易造成倒伏或穗颈折断,从而影响水稻的生产和产量.赤霉素(gibberellin,GA)在植物茎的伸长调控中起着重要作用.本研究对水稻赤霉素类受体家族基因OsGRL1(Gibberellin receptor like 1)的功能进行了探究,发现该基因在水稻穗颈长度和产量性状方面具有重要的调控作用.表达分析表明,OsGRL1在茎、叶鞘及茎顶端组织中高表达,不受外源GA的诱导.亚细胞定位分析表明,与已知的水稻GA受体蛋白OsGID1定位于细胞核中不同,OsGRL1蛋白定位在细胞膜上,且不随外源GA的诱导而改变.与野生型相比,OsGRL1敲除突变体表现出穗颈伸长、籽粒变小和千粒重降低的表型,而过表达转基因株系穗颈缩短、籽粒变大且千粒重增加.进一步研究发现,OsGRL1基因突变使GA信号转导通路中抑制基因SLR1的表达下调,提高了突变体对GA敏感性.因此,OsGRL1通过调控GA信号转导通路基因的表达而调节水稻穗颈伸长和产量,在育种中具有潜在的应用价值.; 杨晓颖胡又川杨淇孙丽娜徐汉琴庞梦真宁晓彤黄诗雨梁闪闪张泗举栾维江; 关键词：水稻赤霉素

水稻中5个FT-Like家族成员的基因编辑突变体的创建与分析: 2022年; 为了揭示水稻中FT-like亚家族成员的生物学功能,采用CRISPR/Cas9技术对其中的OsFTL4、OsFTL5、OsFTL6、OsFTL7和OsFTL11进行基因编辑.在5个基因的编码区各选择1个靶点构建1个融合的sgRNA表达框,将表达框装载到CRISPR/Cas9表达载体中,通过农杆菌介导的遗传转化法侵染水稻品种中花11的愈伤组织,得到转基因植株.利用靶点区域的特异性引物进行测序分析,得到3种不同类型的突变,分别为osftl4osftl5osflt6三突变体、osftl4osftl5osflt6osftl11四突变体和osftl4osftl5osflt6osftl7osftl11五突变体.这些突变均导致目标基因序列发生移码突变,进而影响氨基酸序列.观察突变体表型,发现3种类型的突变体均出现了叶片早衰的表型.; 王鑫王鑫田瑶周诗晨兰志鹏王馨翊胡又川梁闪闪梁闪闪张泗举; 关键词：水稻叶片早衰

水稻染色质重塑因子OsSWIB1的表达分析及其突变体的创建: 2023年; SWI/SNF家族是ATP依赖的染色质重塑复合物,对基因的表达调控具有重要作用.为了探究水稻中染色质重塑因子OsSWIB1的功能,对OsSWIB1基因表达模式进行分析.结果表明:OsSWIB1在水稻的叶、叶鞘及穗中表达量较高,而在茎、茎顶端分生组织及根中表达量较低;在水稻不同的生长发育时期,除在苗期表达量较低外,OsSWIB1在分蘖期、孕穗期、抽穗期及灌浆期均有较高表达.此外,OsSWIB1在短日照条件下的表达明显高于在长日照条件下的表达.利用CRISPR-Cas9技术对OsSWIB1基因进行靶向编辑,共获得20株T0代转基因植株,通过测序分析,鉴定出3个纯合编辑的突变体.对1个杂合编辑突变体的后代进行分离,获得了1个缺失200 bp的纯合突变体.; 王馨翊庞梦真徐汉琴杨淇胡又川宁晓彤孙丽娜梁闪闪张泗举栾维江; 关键词：水稻染色质重塑

水稻OsFTL12和OsFTL13基因双突变体的创建及新型编辑类型的鉴定: 2021年; 为了研究水稻成花素家族基因的功能,在OsFTL12基因的编码区选择2个靶点,OsFTL13基因的编码区选择1个靶点,构建各个靶点的融合表达盒,将其连接到CRISPR-Cas9载体中,获得包含OsFTL12和OsFTL13基因靶点的CRISPR-Cas9重组载体.以粳稻品种中花11为材料,利用农杆菌介导的遗传转化法,创建水稻OsFTL12和OsFTL13两个基因的双突变体,对获得的阳性转基因植株进行测序鉴定.结果显示:阳性转基因植株中包括3种不同类型的编辑突变体,其中,OsFTL13基因仅有1种编辑类型,为1 bp缺失;而OsFTL12基因有3种编辑类型,分别为纯合1 bp缺失、纯合19 bp缺失和双等位突变.进一步分析双等位突变,发现该突变体的一条同源染色体含有1 bp缺失,而另一条同源染色体上有376 bp的CRISPR-Cas9载体序列插入,这在CRISPR-Cas9编辑系统中鲜见.通过自交获得了纯合的CRISPR-Cas9载体序列插入突变体.; 郑瑞周诗晨孙丽娜田瑶王鑫王鑫王馨翊杨晓颖梁闪闪梁闪闪; 关键词：水稻成花素突变体

高粱双粒突变体Dgs的遗传分析与基因定位: 2022年; 穗粒数对作物产量至关重要,对高粱双粒突变体基因进行定位,为下一步的基因克隆和功能分析奠定基础,为高粱产量性状的调控和解析提供依据。利用体视镜观察野生型和双粒突变体花器官表型,通过构建单粒材料晋粱5号和双粒突变体杂交的F群体,分析突变体的遗传规律,采用BSA-seq测序与图位克隆相结合的方法进行连锁分析及基因定位。结果表明,与野生型相比,双粒突变体雌蕊和雄蕊数目增加,最终结一壳双粒;遗传分析表明双粒性状受1对显性基因控制;基因定位显示目的基因位于高粱第6染色体Indel2930和SSR7060标记之间,物理距离为404 kb。Dgs是一个全新的高粱双粒突变基因。; 周诗晨仪治本王馨翊杨晓颖孙丽娜栾维江梁闪闪; 关键词：高粱花器官基因定位

水稻类成花素家族成员OsFTL5和OsFTL6双突变体的创建与分析被引量：1: 2021年; 为了揭示水稻中类成花素家族(FT-like)成员的生物学功能,利用CRISPR-Cas9技术对OsFTL5和OsFTL62个成员进行基因编辑,以期得到编辑突变体.在OsFTL5基因的编码区选择了2个靶位点5T1和5T2,与OsFTL6基因的编码区选择的靶位点6T1分别组合后,构建了2个融合sgRNA表达框(U6a::6T1-sgRNA-U6b::5T1-sgRNA和U6a::6T1-sgRNA-U6c::5T2-sgRNA).将这2个表达框分别装载到CRISRP-Cas9表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化法导入水稻品种中花11中,共获得了97株T0代转基因植株,其中68株转基因植株发生了编辑,产生了不同类型的突变.通过鉴定获得了OsFTL5和OsFTL6同时发生编辑的3个纯合双突变体(ftl5ftl6-1、ftl5ftl6-2、ftl5ftl6-3)和2个纯合OsFTL6单独编辑的突变体(ftl6-1、ftl6-2).在3个双突变体中,OsFTL5基因有单碱基缺失和单碱基插入2种编辑类型;OsFTL6基因有单碱基插入、小片段缺失和大片段缺失3种编辑类型.这些突变均造成了氨基酸阅读框移码,导致蛋白质翻译的提前终止.总之,本研究成功地利用CRISPR-Cas9技术同时实现了对OsFTL5及OsFTL6基因的定向编辑,得到了ftl5ftl6双突变体和ftl6单突变体,并且获得了纯合突变植株,为OsFTL5和OsFTL6功能的研究提供了材料.; 刘晓男宇文铭玥郝宏姣田瑶王鑫王鑫张泗举张泗举梁闪闪栾维江; 关键词：水稻

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