方金勇 作品数:6 被引量:10 H指数:2 供职机构: 浙江师范大学化学与生命科学学院 更多>> 发文基金: 浙江省公益性技术应用研究计划项目 国家自然科学基金 浙江省教育厅科研计划 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 更多>>
金丝桃素介导的光动力疗法在抑制白血病细胞株增殖中的机制研究 被引量:2 2018年 目的研究光活化后金丝桃素对白血病细胞增殖、凋亡的影响及其可能作用机制。方法荧光显微镜确定金丝桃素的入胞时间,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)技术检测金丝桃素对多种白血病细胞的增殖抑制作用,并计算其半抑制浓度(IC50);采用Annexin V-FITC/PI双标记法检测金丝桃素作用后白血病细胞的凋亡情况,Western blot方法检测Bax,Bcl-2以及caspase-3,8,9蛋白的含量变化。结果本实验探索了光活化后金丝桃素的最佳入胞时间为16 h。光活化后金丝桃素对多种白血病细胞的增殖具有抑制作用,且这种抑制作用具有明显的量效关系(r=0.990 5,P<0.01)。经金丝桃素作用后,白血病细胞发生了明显凋亡,Bax/Bcl-2蛋白比率明显升高,凋亡蛋白caspase-3,8,9被切割活化。结论金丝桃素通过caspase途径诱导细胞凋亡,从而有效抑制了多种白血病细胞株的增殖。 张雪青 方金勇 姚佳 陈梦云 宋早文 徐玲玲 赵铁军关键词:金丝桃素 光动力疗法 抑制增殖 慢病毒介导的RNA干扰抑制白血病细胞增殖的应用 2019年 通过慢病毒载体介导的RNA干扰(RNAi)技术,沉默成人T细胞白血病(ATL)中关键的病毒基因HBZ,并研究RNA干扰后对白血病细胞增殖的影响.首先根据HBZ基因序列设计RNA干扰片段,构建其慢病毒载体,并将其包装成病毒.然后用HBZ siRNA慢病毒感染白血病细胞株TL-Om1,通过RT-PCR和Western blot检测HBZ基因和蛋白表达情况,MTT技术检测沉默HBZ后TL-Om1细胞的增殖情况,利用RT-PCR检测病毒感染后下游生长相关基因的表达.实验结果表明:利用慢病毒介导的RNA干扰技术能有效降低HBZ的表达,进而抑制了白血病细胞的增殖;沉默HBZ后,细胞内E2F1,PCNA和Myc等下游生长相关基因的表达受到了明显抑制.这将为慢病毒介导的RNA干扰技术应用于临床治疗成人T细胞白血病提供重要的实验依据. 方金勇 王雍 张熠玲 王志龙 徐玲玲 赵铁军关键词:慢病毒载体 RNA干扰 成人T细胞白血病 细胞增殖 雷公藤红素抑制成人T细胞白血病细胞增殖及机制 被引量:6 2018年 本研究旨在分析雷公藤红素对成人T细胞白血病细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其分子机制。使用不同浓度的雷公藤红素溶液处理多种成人T细胞白血病细胞株,通过四唑盐比色法(MTT)、克隆形成实验检测细胞的增殖情况;Annexin V/PI双染检测细胞凋亡情况;最后通过Western blotting及双荧光素酶报告基因技术探究雷公藤红素抑制成人T细胞白血病细胞生长的调控机制。结果表明雷公藤红素能显著抑制成人T细胞白血病细胞增殖并诱导其凋亡,随着雷公藤红素浓度的增加Bax/Bcl-2蛋白比率明显升高,凋亡途径中Caspase-3/7蛋白也随之被切割活化,同时病毒编码的癌蛋白Tax的表达也明显受到抑制。以上结果表明,雷公藤红素通过调控Bcl-2家族蛋白,激活了Caspase途径诱导细胞凋亡,并通过抑制病毒关键蛋白Tax的表达,从而有效抑制了成人T细胞白血病细胞的增殖。该研究为临床应用雷公藤红素治疗成人T细胞白血病提供了实验依据。 方金勇 衣凯宁 宋早文 陈梦云 徐玲玲 赵铁军关键词:雷公藤红素 成人T细胞白血病 增殖 凋亡 TAX蛋白 靶向多肽R8-HBAP抑制成人T细胞白血病细胞恶性增殖 2018年 成人T细胞白血病(Adult T-cell leukemia,ATL)是与人类T淋巴细胞白血病1型病毒(Human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)感染密切相关的恶性淋巴细胞白血病.HTLV-1反义编码的HBZ(HTLV-1 b ZIP factor)蛋白在ATL发生过程中扮演极为重要的角色.为了寻找治疗成人T细胞白血病的方法,设计了能与HBZ蛋白形成二聚体,从而封闭HBZ蛋白功能的靶向多肽R8-HBAP.通过免疫共沉淀实验,发现R8-HBAP可以有效抑制HBZ蛋白与下游靶蛋白c-Jun的结合,报告基因实验显示,R8-HBAP能阻遏HBZ蛋白对AP-1信号通路的调控作用.MTT和流式细胞术实验发现,R8-HBAP能抑制ATL细胞的恶性增殖并促进细胞凋亡.因此,靶向多肽R8-HBAP通过阻遏HBZ蛋白的功能从而抑制白血病细胞的恶性增殖,为R8-HBAP的开发利用及成人T细胞白血病的治疗提供一定的实验依据. 宋早文 张裕丰 方金勇 郭一孚 刘越丹 徐玲玲 赵铁军关键词:成人T细胞白血病 细胞增殖 人类T淋巴细胞白血病1型病毒的感染复制及致病机制研究进展 被引量:2 2017年 主要针对人类T淋巴细胞白血病1型病毒(human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)及其与成人T淋巴细胞白血病(adult T-cell leukemia,ATL)的关系,尤其是人类T淋巴细胞白血病1型病毒的感染、复制及致病机制进行了综述.HTLV-1属于逆转录病毒,它的感染可导致成人T细胞白血病.HTLV-1病毒主要通过细胞与细胞间接触进行传播,并通过促进其感染细胞的增殖增加病毒拷贝数.病毒基因的调控及宿主免疫系统共同决定了体内HTLV-1病毒的载量.病毒编码的HBZ和Tax蛋白在ATL发生过程中发挥着至关重要的作用,它们在功能上相互配合,共同调节病毒的复制,诱导感染细胞增殖及病毒传播.对于HTLV-1病毒与ATL关系的深入研究,将对认识病毒和宿主的相互作用及相关传染性疾病的防治带来新的启示. 陈梦云 宋早文 方金勇 徐玲玲 赵铁军关键词:TAX蛋白 抗肿瘤药物联合磁场在抑制肿瘤细胞增殖中的应用研究 2018年 在针对目前临床治疗恶性肿瘤存在种种不足的基础上,介绍了抗肿瘤药物联合磁场后在肿瘤治疗研究中的应用.通过查阅国内外相关抗肿瘤药物联合磁场的相关文献,并分析、归纳后,综述了抗肿瘤药物的分类及其优缺点,以及近年来磁场作用于肿瘤细胞的各种生物学效应等,详细阐述了抗肿瘤药物联合磁场在肿瘤治疗中的应用.随着生物磁学的发展,抗肿瘤药物联合磁场的方法在肿瘤治疗研究中因其独特的高效性和靶向性等优势,将为今后临床治疗肿瘤提供新的治疗手段. 徐玲玲 黄林洁 洪文婷 赵铁军 方金勇关键词:磁场 抗肿瘤药物 肿瘤细胞 肿瘤治疗