陈宗香
- 作品数：13 被引量：5H指数：2
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立
- 2019年
- 目的建立腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1(JL1)反向遗传系统,获得单一成分的拯救病毒JL1R。方法将JL1全长cDNA基因序列分为7个片段(F1~F7),在F7片段的3′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRZ),分段合成后分别插入载体pT7-MCS3中,根据每段重叠区域的酶切位点拼接,构建全长表达质粒pT7-MCS3-MUVJL1(HdvRz);同时构建表达腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒;将全长表达质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒pCDIBP-T7RNAP共同电转染Vero细胞。对获得的病毒JL1R进行测序、病毒滴度及中和抗体测定。结果拯救病毒JL1R基因组SH及HN片段与疫苗株JL1对应片段的理论序列一致;JL1R经Vero细胞连续传代培养2~10代病毒滴度均在6 lgCCID50/mL以上;JL1R与疫苗株S79诱发抗MuV抗体滴度接近。结论成功构建了MuV疫苗株JL1的反向遗传操作系统,获得的单一成分拯救病毒JL1R可作为腮腺炎疫苗株的备选株,解决了S79疫苗生产中毒种及疫苗株的成分、纯度和批间一致性等问题,进一步提高了国内腮腺炎疫苗的免疫效果。
- 高雅丽张勇侠陈宗香康庄罗心梅丛聪李立刘兰军
- 关键词：腮腺炎病毒疫苗株反向遗传系统
- 一种副粘病毒的拯救系统和副粘病毒拯救方法
- 本发明提供了一种副粘病毒拯救方法，包括以下步骤：(1)将副粘病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pT7‑T7RNAP质粒、pCDIBP‑T7RNAP质粒和动物细胞混合；(2)使用物理或化学方法介导多质粒共转染；(3)...
- 刘兰军张勇侠高雅丽陈宗香
- 文献传递
- 一种拯救腮腺炎病毒的系统和方法
- 本发明提供了一种制备腮腺炎病毒的系统及方法，它是通过构建带有T7启动子的腮腺炎病毒全长质粒，以及辅助质粒，通过反向遗传学的方法制备腮腺炎病毒。所述辅助质粒有4种：NP质粒、P质粒、L质粒和T7RNAP质粒。其中T7RNA...
- 刘兰军张勇侠高雅丽陈宗香康庄
- 文献传递
- 一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺
- 本发明提供了一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺，属于病毒载体疫苗制备领域。所述方法包括以下步骤：(1)细胞培养：在装载有细胞微载体的生物反应器内加入无血清细胞生长液，培养Vero细胞至密度为2～5...
- 刘兰军容新宗武志强张勇侠李春阳陈宗香高雅丽牟建超杜天飞杨硕杨盛理李佳林
- 麻疹病毒沪191株反向遗传系统的建立被引量：4
- 2017年
- 建立麻疹病毒沪191株(MV-_(S191))反向遗传系统。提取MV-_(S191)的RNA,RT-PCR分7段扩增出麻疹病毒反基因组cDNA,通过酶切、连接,拼接出MV-_(S191)全长反基因组,并分别在其3′端和5′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(HdvRZ)和锤头核酸酶序列(HamRZ),克隆到pT7-MCS载体,获得pT7MV_(S191)。在MV-_(S191)的P-M基因间区域插入绿色荧光蛋白(GFP),获得pT7MV_(S191)-ATU-GFP,同时构建表达麻疹病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的3个辅助质粒。将pT7MV_(S191)、pT7MV_(S191)-ATU-GFP分别与辅助质粒通过脂质体介导共转染BSRT7细胞,热休克3h。转染3d后,取上清,感染Vero-SLAM细胞。经RT-PCR、显微镜检测绿色荧光蛋白表达及合胞体形成,在该系统中成功拯救到两种有感染活性的病毒。成功建立了MV-_(S191)的反向遗传系统,为以麻疹病毒为载体进行新疫苗的研发奠定了基础。
- 张勇侠李玫颖陈宗香李竹石杨小勇范凤鸣刘兰军
- 麻疹疫苗株Schwarz反向遗传系统的建立被引量：1
- 2021年
- 目的建立麻疹疫苗株Schwarz(MVSW)反向遗传系统。方法将MVSW全长cDNA分为F1~F7共7个片段,在F1片段的5′端插入T7启动子及锤头核酸酶序列(hammerhead ribozyme,HamRz),F7片段的3′端插入T7终止子及丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRz),分别将F1~F7片段克隆至pT7-MCS2载体上,7个重组质粒经酶切按顺序拼接MVSW全长cDNA,获得全长质粒pT7MVSW。同时构建表达MVSW核蛋白(N)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)的3个辅助质粒。将全长质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒(pT7-T7RNAP及pCDIBP-T7RNAP)共同电转染Vero细胞,拯救获得病毒rMV_(SW)。收获的rMV_(SW)在Vero及CEC细胞中进行传代培养,观察细胞病变、检测病毒滴度并进行病毒测序,同时免疫小鼠检测抗r MVSW中和抗体。结果经酶切鉴定,全长质粒及辅助质粒均构建正确。拯救病毒rMV_(SW)在Vero及CEC细胞培养的病变典型特征类似;P2代病毒rMV_(SW)扩增片段与疫苗株MVSW理论序列一致;rMV_(SW)经Vero细胞连续培养P2~P10代病毒滴度稳定在5.5~6.5 lgCCID_(50)/mL之间;rMV_(SW)及疫苗株MVS191诱导的抗rMV_(SW)抗体滴度接近。结论成功建立了麻疹疫苗株MVSW的反向遗传系统,获得的具有良好遗传稳定性及免疫原性的拯救病毒rMV_(SW)有作为疫苗生产用毒种的潜力。
- 陈宗香张勇侠高雅丽康庄罗心梅丛聪李立刘兰军
- 关键词：麻疹病毒病毒拯救反向遗传系统
