席秀丽
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 供职机构：广州中医药大学中药学院更多>>
- 发文基金：公益性行业科研专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 毛冬青基因组DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系的优化被引量：1
- 2016年
- 目的:优化毛冬青基因组DNA提取方法,建立稳定性高、重现性好、适合其遗传差异分析的ISSRPCR反应体系。方法:对比CTAB法、mCTAB法、SDS法、蛋白酶K法及植物基因组提取试剂盒的提取效果后,选择mCTAB法结合蛋白酶K法提取毛冬青基因组DNA,并优化了蛋白酶K用量。利用正交试验设计,对毛冬青ISSR-PCR反应的5个因素(Mg^(2+)、dNTPs、Primer、DNA、Taq酶)进行优化,PCR结果使用SPSS16.0软件进行分析,基于优化后体系对哥伦比亚大学公布的100条ISSR引物进行筛选,确定退火温度。结果:采用蛋白酶K-mCTAB法实现了4 h内提取高纯度毛冬青基因组DNA,蛋白酶K用量为20 ng·mL^(-1)时DNA平均提取量较传统CTAB法提升9.5倍;毛冬青ISSR-PCR最终反应体系为Mg^(2+)2.5 mmol·L^(-1),dNTPs 0.15 mmol·L^(-1),Primer 0.4μmol·L^(-1),DNA 70 ng,Taq酶0.5 U。实验从100条引物中筛选出16条引物并确定退火温度,绘制出毛冬青ISSR指纹图谱。结论:蛋白酶K-mCTAB法适合毛冬青基因组DNA的提取,筛选出的反应体系、引物及退火温度能够满足毛冬青ISSR-PCR实验的要求。
- 付铨盛卫滢席秀丽黄海波
- 关键词：DNA提取反应体系优化引物筛选
