曾磊
- 作品数：17 被引量：6H指数：2
- 供职机构：河南农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体制备及其抗原表位鉴定被引量：1
- 2023年
- 为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)p30蛋白的单克隆抗体,以原核表达的重组p30蛋白为免疫原免疫6~8周龄雌性BALB/c小鼠,3次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛选。结果获得2株能稳定分泌抗ASFV p30蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2G10-2和6D2-1。抗体效价分别为1∶12800和1∶3200。亚型鉴定结果显示,2株单克隆抗体的重链均属于IgG,轻链均为κ型。Western blot和间接免疫荧光试验结果显示,2株单克隆抗体与p30蛋白均具有良好的结合活性。通过Western blot检测,2株单克隆抗体能有效结合截短重组p30蛋白的170~194位氨基酸,证明其抗原识别区域为第170~194位氨基酸。本研究制备了p30蛋白的2株单克隆抗体,并对其抗原表位进行鉴定,为ASFV p30蛋白结构和功能的研究及血清学诊断试剂的研发奠定基础。
- 刘桃雪苏冰倩齐艳丽郭江涛刘忠虎褚贝贝王江曾磊
- 关键词：非洲猪瘟病毒原核表达单克隆抗体抗原表位
- LJ002基于单线态氧介导脂质氧化的抗病毒机制研究
- 新出现的病毒病原体导致大量疾病发生，给全球造成巨大的经济损失。此外，携带病毒的动物是人畜共患病的主要传染源，新出现的传染病中约有75％是由动物病毒引起。免疫接种是预防新发病毒性疾病感染的有效方法，因此新型灭活剂的研发将是...
- 曾磊
- 关键词：猪伪狂犬病毒单线态氧脂质氧化膜融合
- 文献传递
- A型FMDV 1D蛋白-铁蛋白融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法
- 本发明公开了A型FMDV 1D蛋白‑铁蛋白融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法。本发明将含有A型FMDV优势表位与铁蛋白片段的核苷酸序列串联，设计并合成了A型FMDV 1D蛋白表位‑铁蛋白片段；然后与促溶标签和亲和标签E...
- 郭玉堃于朋伟郭豫杰曾磊杨国宇
- 文献传递
- 干扰素调节因子敲减细胞系的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响
- 2024年
- 旨在揭示干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRFs)对猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)增殖的影响,本研究通过shRNA技术构建敲减IRF 1-9的PK15细胞系,并检测其敲减效率。采用流式细胞术以及滴度测定检测敲减IRF 1-9后PRV的增殖情况;利用RT-qPCR技术检测PRV感染细胞后PRV-gB、IFN-β、ISG-15和IL-6的mRNA表达水平;Western blot技术检测PRV感染细胞后gB蛋白的表达水平。敲减效率测定结果显示,PK15细胞中的IRF 1-9 mRNA表达水平均有显著降低;流式细胞术及滴度测定结果表明,敲减IRF 1-9基因后有助于PRV的增殖;RT-qPCR及Western blot结果证明,敲减IRF 1-9基因后,PRV-gB mRNA及蛋白表达水平均有显著提高;细胞炎性因子的mRNA表达水平检测结果发现,敲减IRF 1-9抑制PRV诱导的IFN-β、ISG-15以及IL-6 mRNA表达。综上所述,IRF 1-9是PRV在PK-15细胞内复制的宿主限制因子。
- 付艺乾梁东阁王铭洋潘佳佳杨彦宾曾磊康相涛
- 关键词：SHRNA干扰素调节因子猪伪狂犬病病毒细胞炎性因子
- 胆固醇25羟化酶抑制猪伪狂犬病毒复制的研究
- 胆固醇25羟化酶(CH25H)是一种干扰素(Interferon、IFN)刺激因子，且CH25H基因受干扰素调控。CH25H通过在胆固醇的第25位碳原子上加入第二个羟基，将胆固醇催化产生25-羟基胆固醇(25hydrox...
- 曾磊
- 关键词：猪伪狂犬病病毒复制
- 干扰素基因刺激因子基因敲除对猪伪狂犬病病毒复制的影响被引量：4
- 2019年
- 研究干扰素基因刺激因子(STING)基因敲除对猪伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响。用CRISPR/Cas9技术敲除猪肺巨噬细胞系(3D4/21)的STING基因,用T7核酸酶检测靶基因敲除效率,用细胞计数试剂盒检测基因敲除细胞的活力,用表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组病毒PRV-GFP感染基因敲除细胞,用流式细胞术检测感染细胞的荧光强度,用定量RT-PCR检测PRV的gB、TK基因表达及其感染细胞的IL-1β、IFN-β、ISG15基因转录,用Western blot检测PRV gE蛋白表达水平,用病毒滴定法测定子代病毒滴度。结果显示:设计的3个STING基因外显子2特异sgRNA均能切割3D4/21细胞的靶序列,其中sgRNA3的基因编辑效率最高;对sgRNA1介导STING基因敲除系进行克隆化,获得基因敲除细胞系3株,基因敲除对细胞活力无影响;亲本细胞培养的PRV-GFP感染阳性细胞占80.77%,STING基因敲除细胞培养的PRV-GFP感染阳性细胞占95.55%;STING基因敲除对PRV基因表达具有促进作用,亲本3D4/21细胞的病毒滴度为106.2 TCID50·0.1 mL^-1,STING基因敲除细胞的病毒滴度为108.3TCID50·0.1 mL^-1,病毒感染细胞的IL-1β、IFN-β和ISG15转录下调明显。STING基因敲除能促进PRV在3D4/21细胞中复制,可能与感染细胞的IL-β、IFN-β和ISG15表达抑制有关。
- 侯璐王一张爽李国利曾磊郭玉堃翟云云于朋伟王棋王春凤杜永坤万博
- 关键词：伪狂犬病病毒
- O型FMDV衣壳蛋白-铁蛋白融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法
- 本发明公开了O型FMDV衣壳蛋白‑铁蛋白融合蛋白、蛋白笼纳米颗粒及其制备方法。本发明将含有O型FMDV优势表位与铁蛋白片段的核苷酸序列串联，合成O型FMDV衣壳蛋白表位‑铁蛋白片段；然后与促溶标签和亲和标签EW29相连，...
- 杨国宇郭玉堃王梦珂郭豫杰明胜利张爽曾磊
- 文献传递
- 猪伪狂犬病病毒变异株HN1201 gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2023年
- 旨在获得用于伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)实验室检测和临床诊断所需的PRV gE单克隆抗体,用灭活的PRV变异株PRV HN1201免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术将免疫小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,经免疫过氧化物酶单层细胞试验(immune peroxidase monolayer assay,IPMA)和免疫印迹试验(Western blot)筛选,获得2株分泌PRV gE抗体的杂交瘤细胞(1-F11-3、3-E11-3),抗体亚类分别为IgG2a和IgM,轻链均为Kappa链。间接免疫荧光试验(IFA)检测结果显示单克隆抗体可与不同PRV毒株反应,而不与PRV Bartha K61反应;Western blot、IPMA、IFA试验结果显示2株单克隆抗体均能特异性识别PRV gE蛋白,与其他病毒无交叉反应。Western blot试验鉴定2株抗体的抗原识别序列分别为^(64)GDDRRAGFGSALASLR^(79)和^(156)PPEVPRLRRGPPIVTPERWS^(175)。腹水纯化后的1-F11-3、3-E11-3抗体用于Western blot检测的最高稀释比分别为1∶14000和1∶12000,1-F11-3的IFA效价为2^(-14),3-E11-3不可用于IFA检测。结果表明,本研究制备的PRV gE抗体特异性强、灵敏度高,为建立快速、高效的PRV免疫学检测方法奠定了基础。
- 牛欣蕊付朋飞鲁维飞张超褚贝贝王江曾磊
- 关键词：单克隆抗体IGG2AIGM
- 猪TRIM11基因克隆及其促进猪伪狂犬病毒在体外增殖的研究
- 2016年
- 为初步研究猪TRIM11的免疫学功能,以猪颌下淋巴结cDNA为模板扩增TRIM11基因cDNA并对该基因进行了蛋白质结构预测和组织表达谱分析,将该基因与PiggyBac载体相连获得真核表达载体PB-TRIM11,之后转染PK15细胞获得稳定表达细胞系。用猪伪狂犬病毒(PRV)刺激过表达TRIM11PK15细胞和对照组细胞后,于不同时间收获细胞上清,比较两组细胞上清中病毒滴度变化。结果表明,猪TRIM11的ORF长度为1 407bp,编码468个氨基酸,该氨基酸序列含有3个TRIM家族保守的结构域。组织表达谱分析显示,猪TRIM11在脂肪组织、肺的表达量较高,而在心、回肠、十二指肠、直肠中的转录量较低。成功克隆了猪TRIM11cDNA序列并构建了真核转录载体PB-TRIM11,qRT-PCR检测结果表明TRIM11在PK15细胞系中成功表达。检测感染PRV后过表达TRIM11PK15细胞和对照组细胞上清液病毒的TCID50发现过表达TRIM11组的病毒滴度始终高于对照组。过表达TRIM11有一定的促进PRV增殖的作用,为进一步研究猪TRIM11在天然免疫中的作用奠定了基础。
- 宋爽曾磊鲁绍芳郭珍珍鲁维飞韩立强王江王月影褚贝贝杨国宇
- 关键词：猪伪狂犬病毒病毒增殖稳定细胞系
- 猪cripto促进C2C12细胞分化
- 2018年
- 应用分子生物学方法、荧光显微镜和实时荧光定量PCR技术，对cripto基因进行克隆、真核表达载体的构建，探讨cripto对C2C12细胞生长增殖的影响和肌细胞分化相关基因MyoD、MyoG、P21、MHC的表达变化。结果显示，phiC31cripto真核表达载体构建成功，荧光显微镜下可见转染phiC31载体和（ripto基因共转染的C2C12细胞表达强烈的绿色荧光，且对细胞的生长增殖无显著性影响；Q_PCR检测MyoD、MyoG、P21、MHC结果证实，猪cripto可以促进细胞分化因子MyoD、MyoG、P21、MHC的表达。结果表明，本试验成功地构建了C2C12-phiC31fripto过表达细胞系，Q—PCR结果分析发现cripto基因可以促进肌肉分化，为进一步探索cripto基因在肌肉分化中的分子机制提供理论依据。
- 樊爽爽张雪梅郭珍珍曾磊鲁绍芳鲁维飞韩立强褚贝贝杨国宇王江
- 关键词：基因克隆C2C12细胞真核表达细胞分化
