王晓霞
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：国家人类基因组北方研究中心更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 重组人瘦素融合蛋白在大肠杆菌中的低温自诱导表达、纯化和活性鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的:建立低温自诱导表达重组人瘦素(leptin)融合蛋白的系统方法,经体外纯化获得大量具有生物活性的瘦素蛋白。方法:从cDNA文库中扩增瘦素编码区,克隆到pGEM-Teasy载体,测序正确后亚克隆到A1.3表达载体,转入BL21(DE3),低温自诱导表达。用SDS-PAGE及Western印迹分析鉴定表达产物。对低温自诱导表达产物rMBP-10His-Leptin进行纯化和酶切,获得可与瘦素单抗发生特异性反应的瘦素蛋白。用Km小鼠减肥实验检验其生物学活性。结果:在22×103处有明显的新增蛋白带,含量超过总蛋白的40%,Western印迹证实为瘦素蛋白。Km小鼠减肥实验证实其具有生物学活性。结论:成功建立了低温诱导表达rMBP-10His-Leptin的系统方法,获得大量瘦素蛋白,经验证表达产物具有免疫活性和生物学活性,可供进一步基础及临床研究应用。
- 曾沃坦单永强王晓霞黄炜陈小军周骋
- 关键词：瘦素重组融合蛋白质类大肠杆菌免疫活性蛋白纯化
