王麒
- 作品数：7 被引量：29H指数：4
- 供职机构：河北农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 山羊DCT基因启动子活性区及其转录因子调控探究被引量：5
- 2018年
- 旨在探究山羊DCT基因启动子活性区及相关转录因子对该基因的调控作用,为山羊DCT基因的表达调控提供理论依据。通过对山羊DCT基因5′侧翼区序列及第一外显子区序列进行生物信息学分析,并与人和小鼠DCT基因启动子序列进行比对,同时结合在线启动子预测结果,采用快速克隆的方法构建5个5′系列缺失序列的启动子报告基因载体,以此为基础构建3′缺失序列的6个报告基因载体,并构建SOX10、MITF和OTX2转录因子结合位点点突变的6个报告基因载体,以瞬时转染的方法转染A375细胞,双荧光素酶检测试剂盒检测缺失片段和点突变片段的启动子活性。结果表明,成功构建了山羊DCT基因11个不同长度的启动子报告基因载体,-990^+232bp的P3片段荧光素酶活性极显著高于其他片段(P<0.01),基于P3构建的3′系列缺失片段中-881^-154bp的P8片段荧光素酶活性极显著高于其他片段(P<0.01)。转录因子SOX10结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著降低(P<0.01),MITF和OTX2结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著增强(P<0.01)。山羊DCT基因启动子核心调控区位于-881^-154bp区域,转录因子SOX10对山羊DCT基因发挥正调控作用,而转录因子MITF和OTX2对山羊DCT基因的调控作用尚需深入研究。
- 刘春杨张乐超王麒周荣艳李兰会李祥龙
- 关键词：山羊启动子MITF
- 山羊DCT基因启动子区甲基化水平、SNP与毛色特征关系研究被引量：6
- 2019年
- 旨在探究DCT基因启动子区甲基化水平和SNP突变对山羊毛色的影响,为探索DCT基因调控山羊毛色变化的机理提供理论依据。本研究以山羊为试验动物,对DCT基因启动子区进行CpG岛预测,设计引物对预测的2个CpG岛富集区域进行亚硫酸氢盐甲基化测序,使用甲基化水平分析软件BISMA统计甲基化位点,比较唐山奶山羊(白色)和南江黄羊(黑色品系)两种不同毛色山羊群体DCT基因启动子区甲基化水平差异。克隆DCT基因核心启动子区,筛选不同毛色山羊群体的SNPs,使用JASPAR和Nsite预测SNPs位点突变前后转录因子的改变,并检测比较突变前后DCT基因启动子活性变化。结果,成功克隆了山羊DCT基因启动子区甲基化序列及核心启动子区(g.-1045～-318)。在g.-348～-150区域和g.+222～+502区域分别发现6个和23个甲基化位点,其中g.+312、g.+352和g.+400位点与g.+389和g.+404位点白色山羊甲基化水平分别显著和极显著高于黑色山羊(P<0.05和P<0.01),并且g.+222～+502区域白色山羊甲基化平均水平极显著高于黑色山羊(P<0.01)。在DCT基因核心启动子区的g.-804T> G、g.-705C> T和g.-679G> A,3个SNPs位点的基因型构成在白色山羊和3个有色山羊群体中存在差异,g.-804T> G突变导致该区域的SOX10转录因子结合位点缺失,DCT基因启动子活性显著下降(P<0.05)。结果显示,白色山羊DCT基因g.+222～+502区域的高甲基化水平,g.-804、g.-714和g.-679 3个位点的突变,尤其是g.-804T> G造成SOX10转录因子结合位点的缺失,突变的G型DCT基因启动子活性显著降低。因此,DCT基因启动子区SNP突变和高甲基化水平可能抑制了基因的表达从而形成山羊白色被毛。
- 杜小龙王麒张乐超葛琳涵刘小辉王涵李兰会李祥龙
- 关键词：甲基化SNP
- 鸡ev21占位区和未占位区重复序列结构与羽速表型关系研究被引量：6
- 2017年
- 本试验旨在探讨鸡羽速基因型Hae Ⅲ酶切鉴定方法的分子基础。以羽型明确的6个品系(太行鸡、坝上长尾鸡、大午粉鸡、海兰灰鸡、海兰褐鸡、海兰灰祖代四系鸡)313份鸡基因组为模板,利用Hae Ⅲ酶切的RFLP试验进行羽速验证,并对ev21占位区(OS)和非占位区(US)共有序列以及OS区特有序列进行酶切试验。结果表明:1)Blast分析发现1 450bp为鸡ev21的US区域片段。海兰灰及其祖代四系和大午粉祖代的羽速基因型与HaeⅢ酶切结果完全一致,但太行慢羽公鸡、慢羽母鸡、坝上长尾慢羽公鸡和海兰褐慢羽鸡的一致率分别为40.0%、27.6%、28.6%和0.0%;2)太行鸡和坝上长尾鸡ev21的OS和US区共有序列538bp酶切鉴定结果与表型一致率达到92%以上,其他品系(除海兰褐快羽公鸡为0.0%)均为100.0%;3)鸡ev21的OS区特异序列1 440bp的扩增阳性率在太行慢羽公鸡、慢羽母鸡和快羽公鸡中的阳性率分别为94.1%、65.5%和0.0%,在海兰灰祖代鸡中分别为100.0%和0.0%,并且1 440片段不能被Hae Ⅲ切开。综合分析6个品系ev21的OS和US区结构特征,认为US区Hae Ⅲ酶切位点变异不能作为慢羽和内源病毒ev21的鉴定依据,而OS区的ev21插入与1 440bp序列Hae Ⅲ酶切位点的A→G突变和八碱基重复是紧密连锁的。
- 张乐超王晗张秀玲刘春杨王麒周荣艳李祥龙李兰会
- 关键词：羽速HAE
- 不同日龄和羽型太行鸡卵巢繁殖调控基因的表达分析被引量：2
- 2019年
- 旨在mRNA水平上研究催乳素受体(PRLR)、促卵泡激素受体(FSHR)、雌激素受体2 (ESR2)、多巴胺受体2(DRD2)和血管活性肠肽(VIP)5个繁殖调控基因在5个不同日龄的太行鸡卵巢中的表达变化,为太行慢羽鸡的高产蛋性能提供依据。应用RT-qPCR方法检测快慢羽太行鸡卵巢组织中5个基因的mRNA相对表达量,2^(-ΔΔCt)表示的相对表达量进行羽型和日龄的差异分析,2^(-ΔCt)表示的相对表达量进行基因间相关性分析。结果显示,52(育雏末期)～300d(产蛋高峰期)太行鸡PRLR表达持续升高,慢羽鸡表达均高于快羽鸡,且在250d产蛋高峰期慢羽鸡表达显著高于快羽鸡((1.20±0.23)vs(0.58±0.16),P<0.05);但0d表达最高并显著高于其他日龄(P<0.05),且快羽鸡表达显著高于慢羽((2.76±0.00)vs(0.70±0.54),P<0.05);FSHR表达量随日龄逐渐降低,但慢羽鸡表达均高于快羽鸡,且在0,52d显著高于快羽鸡((23.97±1.28)和(12.93±4.37)vs (18.00±0.00)和(6.00±2.15),P<0.05);DRD2表达呈现波动降低,0d慢羽鸡表达显著高于快羽鸡((51.86±9.42)vs(15.88±0.00),P<0.05);5个日龄ESR2表达慢羽鸡均高于快羽鸡,且在250d产蛋高峰期慢羽鸡显著高于快羽鸡((2.71±0.75)vs(1.11±0.40),P<0.05);VIP表达在139(开产期)～300d(产蛋高峰期)逐渐升高,产蛋高峰慢羽鸡表达高于快羽鸡但差异不显著(P>0.05)。PRLR和FSHR对卵巢卵泡发育发挥关键作用,与慢羽太行鸡的高产蛋水平密切相关;DRD2、ESR2和VIP在太行鸡发育和产蛋过程中表达波动变化,对PRLR和FSHR的表达存在调控作用影响太行鸡的产蛋性能。
- 张乐超王晗张秀玲王麒王麒周荣艳李兰会
- 关键词：羽型日龄卵巢RT-QPCR
- 鸡内源白血病病毒ev21与慢羽非连锁分析和LTR区启动子活性分析被引量：7
- 2017年
- 旨在分析鸡内源ev21病毒与慢羽的连锁关系及其结构特征和启动子活性,为建立无内源ev21病毒的慢羽种鸡提供检测方法,并对ev21的启动转录活性进行探索。长片段PCR扩增获得鸡内源ev21病毒基因序列,检测太行鸡、坝上长尾鸡、海兰褐、海兰灰及其祖代五个品系259份样本的病毒携带情况。利用NCBI数据库Blast比对分析并PCR获得病毒基因全长。构建ev21基因5′和3′LTR区的pGL3-basic重组质粒转染A375细胞检测其启动子活性。结果显示:获得完整ev21病毒基因组全长7 524bp,发现其反向插入在鸡Z染色体g.10681671-10681672之间,长片段7 590bp PCR检测发现ev21与海兰灰慢羽鸡完全连锁,但与太行鸡、坝上长尾鸡和海兰褐慢羽并不完全连锁,尤其海兰褐快羽公鸡ev21全部阳性。ev21基因5′LTR区具有高强度的启动子活性(P<0.01),3′LTR区活性高于阴性对照,但差异不显著(P>0.05)。综上,内源ev21病毒与鸡慢羽性状并不完全连锁,7 590bp长片段PCR为内源ev21病毒的筛查提供检测方法,ev21基因5′LTR区具有强启动子活性。
- 王麒王晗张秀玲刘春杨张乐超李兰会李祥龙
- 关键词：慢羽LTR启动子活性
- 水貂DCT基因5′ UTR克隆分析与启动子活性探究
- 2019年
- 旨在克隆获得水貂DCT基因5′UTR序列并分析其结构特征,预测转录调控元件并检测启动子活性,为探究DCT基因在调控水貂毛皮颜色形成中的作用提供理论依据。本研究利用PCR扩增黑貂、白貂和咖啡貂DCT基因5′UTR,构建咖啡貂DCT基因5′UTR的pGL3-1～pGL3-7和黑貂pGL3-4～pGL3-6缺失片段的荧光素酶报告基因重组质粒,检测各片段的启动子活性;利用亚硫酸氢盐法检测3种毛色水貂DCT基因启动子区CpG岛甲基化水平。结果,克隆获得水貂DCT基因长8 203 bp的5′UTR序列,发现g.7133-7336为长204 bp的转座元件,与其高相似度的100条序列中,一条为蜕皮动物总门线虫纲的索巴利吸虫,其他均来自犬形亚目。P3和P4片段具有显著的启动子活性(P<0.05);咖啡貂的CpG岛甲基化水平显著高于黑貂和白貂(P<0.05);咖啡貂CC单倍型启动子活性显著低于黑貂的TT单倍型片段(P<0.05)。结果表明,水貂DCT基因5′UTR长204 bp的犬形亚目特异短散在元件Can-SINEs由蜕皮动物门的索巴利吸虫侵入动物基因组形成;基因上游32 bp元件和近端域共同作用发挥启动子活性,而GC-box和CpG岛结构沉默水貂DCT基因启动;g.-684和g.-621位点的T> C突变形成的CC单倍型导致咖啡貂DCT基因的高甲基化与低启动子活性,从而抑制真黑素合成,产生咖啡色被毛特征。
- 李兰会杜小龙王麒王麒张乐超张乐超李雪梅
- 关键词：水貂DCT启动子CPG岛
