龙钢 作品数:4 被引量:3 H指数:1 供职机构: 中国科学院上海巴斯德研究所 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法 本发明提供了一种新型构建HCV病毒感染可视化报告系统的细胞修饰方法使用该方法能够简单灵敏实时进行丙型肝炎病毒(HCV)病毒感染的检测,能清晰准确的显示被感染细胞,可应用于感染细胞筛选及抗HCV病毒药物的高通量筛选。 龙钢 赵凡凡 马鹏娟 杨再立 蒋望文献传递 丙型肝炎病毒的发现及研究——从2020年度诺贝尔生理学或医学奖谈起 被引量:2 2020年 肝组织炎症主要由5种不同类型的肝炎病毒(A、B、C、D、E)引起其中甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)和戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)主要通过受污染的食物和水传播,引发自限性急性肝炎.乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)和丁型肝炎病毒(hepatitis D virus,HDV)主要通过血液或体液传播,并能形成慢性感染. 徐咏芬 龙钢 钟劲关键词:丁型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 甲型肝炎病毒 肝组织炎症 体液传播 诺贝尔生理学或医学奖 多配体聚糖结合蛋白1过表达增加低密度丙型肝炎病毒颗粒的产生 被引量:1 2018年 目的探讨多配体聚糖结合蛋白1(syntenin-1)对丙型肝炎病毒(HCV)颗粒组装的影响。方法采用免疫印迹法分析人原代肝细胞中syntenin-1的含量。使用慢病毒质粒转染人肝癌细胞系Huh7.5.1构建syntenin-1过表达细胞系和绿色荧光蛋白(GFP)过表达细胞系。采用电转染法将HCV RNA转入Huh7.5.1细胞、syntenin-1过表达细胞和GFP过表达细胞后,用荧光素酶分析、免疫印迹分析和病毒滴度测定方法分别从RNA复制、病毒蛋白表达和感染性病毒颗粒的分泌方面研究syntenin-1过表达对HCV的影响。用密度梯度分析法检测HCV RNA和感染滴度在不同密度组分的分布情况。结果 3例不同人原代肝细胞中syntenin-1的含量均较Huh7.5.1细胞高(P<0.01)。Syntenin-1过表达不影响HCV RNA在宿主细胞中的复制;syntenin-1过表达细胞来源HCV病毒的感染性与Huh7.5.1细胞或GFP过表达细胞相比差异均无统计学意义。在syntenin-1过表达细胞培养上清液中,HCV感染性颗粒从主要集中在1.08~1.16 g/m L区域逐渐转变为有部分转移到密度为1.01~1.02 g/m L的低密度区域。结论 Syntenin-1过表达改变了HCV感染性颗粒的密度组分分布。 邓力宾 郭巾旭 马鹏娟 王刚 龙钢关键词:病毒颗粒 表达载脂蛋白E-增强型绿色荧光蛋白的细胞系支持感染性丙型肝炎病毒的组装 2016年 目的探讨表达载脂蛋白E-增强型绿色荧光蛋白(apolipoprotein E-enhanced green fluorescence protein,apoEEGFP)的细胞系是否支持感染性丙型肝炎病毒(HCV)颗粒的组装。方法利用shRNA基因沉默技术建立apoE稳定下调的Huh7.5.1细胞系,然后通过基因工程技术在该细胞系中建立稳定表达apoE-EGFP融合蛋白的细胞系。将HCV RNA转染进入野生型细胞(Huh7.5.1细胞)、对照组sh-NT细胞(转导非靶向野生型细胞基因的shRNA质粒的细胞)、apoE下调的Huh7.5.1细胞(sh-apoE细胞)以及表达apoE-EGFP融合蛋白的sh-apoE细胞(apoE-EGFP细胞)中,收集病毒液;通过半数组织培养感染剂量(TCID50)方法检测释放到Huh7.5.1、sh-NT、sh-apoE和apoE-EGFP细胞培养上清液中的HCV的滴度。利用免疫荧光技术检测apoE与HCV的结构蛋白E2的相互作用,利用蛋白质印迹法检测用具有特异亲和性FLAG-gel纯化的HCV颗粒表面的apoE-EGFP的表达。结果 apoE-EGFP融合蛋白在apoE-EGFP细胞系中高效表达;apoE-EGFP细胞来源的HCV的感染性与Huh7.5.1、sh-NT细胞相比差异无统计意义;在apoE-EGFP细胞系中,apoE-EGFP融合蛋白与HCV结构蛋白E2存在共定位,并且可以在HCV颗粒表面上检测到apoE-EGFP融合蛋白。结论 apoE-EGFP融合蛋白是HCV颗粒的组分,apoE-EGFP细胞系支持感染性HCV颗粒的组装。 杨再立 赵凡凡 王刚 龙钢关键词:丙型肝炎病毒 载脂蛋白E 绿色荧光蛋白质类 细胞系