何云凤
- 作品数：3 被引量：8H指数：1
- 供职机构：重庆理工大学药学与生物工程学院更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 精氨酸脱亚胺酶位点突变对聚乙二醇修饰的影响研究
- 目的：对野生型ADI(wADI)进行定点突变改造，构建突变型ADI(mADI)大肠杆菌重组表达系统，筛选出高表达的重组工程菌。建立重组mADI的发酵工艺和纯化工艺。对比分析位点突变对酶活性的影响。对野生型和突变型ADI进...
- 何云凤
- 关键词：蛋白结构基因表达
- 荧光定量PCR法检测重组毕赤酵母工程菌的外源基因拷贝数被引量：7
- 2016年
- 提出了重组毕赤酵母工程菌p PICZ-DT30/GS115基因组中外源基因DT30拷贝数的实时荧光定量PCR方法。该重组工程菌用来表达人胰岛素前体(PI-DT30),其表达量的高低、菌种稳定性对工艺研究及整体项目成本等有重大影响。外源基因拷贝数是检测表达量的一个重要指标。该方法中,利用毕赤酵母的看家基因GAP(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)为内参,分别建立含GAP基因和DT30基因的双标准曲线。将工程菌基因组进行荧光定量PCR,根据标准曲线和Ct值计算目的基因DT30在重组毕赤酵母工程菌中的拷贝数,结果为7个。
- 郭晋霞何云凤范开
- 关键词：基因拷贝数
- 重组精氨酸脱亚胺酶的制备工艺
- 2016年
- 研究了重组精氨酸脱亚胺酶(r ADIES)的30 L规模发酵、制备工艺及其生物学活性。将构建好的工程菌先进行摇瓶活化获得种子液,转入30 L发酵罐进行培养,用IPTG进行诱导表达;表达产物进行高压匀浆破菌、包涵体洗涤、溶解稀释复性后经DEAE阴离子交换层析柱和Butyl疏水层析柱纯化;通过SDS-PAGE和RP-HPLC等方法检测表达和纯度;用体外测活法检测活性。将工程菌进行放大培养并诱导表达,获得了相对分子质量在46 k Da的r ADIES。重组蛋白表达量占总蛋白的25%以上,经制备工艺获得的r ADIES纯度高于95%,酶活性为42IU。实验结果表明:该工艺具有可行性,可以获得较高活性的重组精氨酸脱亚胺酶。
- 何云凤郭晋霞范开
- 关键词：精氨酸脱亚胺酶发酵复性分离纯化
