徐向荣
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：宁夏医科大学临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-142-3p靶向ATG4c调控RAW264.7巨噬细胞自噬被引量：4
- 2016年
- 目的:研究miR-142-3p对自噬相关基因ATG4c的靶向调控作用,探究miR-142-3p影响RAW264.7细胞自噬途径的作用机制。方法:生物信息学软件分析miR-142-3p的靶基因为ATG4c,构建pMIR-Report-ATG4c和pMIR-Report-ATG4c mut重组质粒,双荧光素酶报告系统、qRT-PCR、Western blot验证miR-142-3p与ATG4c的靶向作用;将做不同处理的RAW264.7细胞分为4组:正常细胞作为对照、50ng/ml雷帕霉素作用2h、EBSS饥饿作用12 h、10 nmol/L的3-甲基腺嘌呤(3-MA)作用12h后,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-142-3p不同干预组中的相对表达情况;将miR-142-3p mimics、miR-142-3p inhibitor及miR-142-3p control分别转染到RAW264.7细胞中,检测miR-142-3p和LC3Ⅱ的相对表达。结果:双荧光素酶报告系统、qRT-PCR、Western blot验证miR-142-3p通过靶向作用于ATG4c的3'-UTR抑制其表达;与对照组相比,雷帕霉素和饥饿处理的RAW264.7细胞miR-142-3p明显上调,而3-MA处理组miR-142-3p明显下调;与miR-142-3p control组相比,转染miR-142-3p mimics组中LC3Ⅱ蛋白表达显著下调,而miR-142-3p inhibitor组中表达显著上调。结论:miR-142-3p通过靶向调控自噬相关基因ATG4c,参与RAW264.7小鼠巨噬细胞自噬的调控。
- 高倩段相国李振昊徐向荣蒋丹徐广贤
- 关键词：细胞自噬
- miR-506-3p对PIK3CA基因的靶向调控作用被引量：1
- 2017年
- 目的研究miR-506-3p对PI3K-Akt信号通路中关键基因PIK3CA的靶向调控机制。方法化学合成miR-506-3p过表达模拟物mimic及miR-506-3p抑制剂inhibitor;构建含有PIK3CA基因3’-UTR野生型及突变体到荧光素酶报告载体中;将测序结果正确的p MIR-Report-PIK3CA-Wt和p MIR-Report-PIK3CA-Mut重组质粒,与miR-506-3p的mimic/inhibitor及p RL-TK共转染至HEK-293T细胞,利用双荧光素酶报告系统和Western blot验证miR-506-3p与PIK3CA的靶向关系。结果测序结果显示p MIR-Report-PIK3CAWt和p MIR-Report-PIK3CA-Mut两个重组质粒构建成功,Western blot结果显示转染miR-506-3p mimic的293T细胞中PIK3CA蛋白表达下调(P<0.05);而转染miR-506-3p inhibitors的PIK3CA蛋白表达上调(P<0.05)。结论 miR-506-3p可作用于PI3K-AKt信号通路,通过靶向PIK3CA发挥其负性调控作用。
- 李振昊徐广贤高倩蒋丹徐向荣屈昱良
- 关键词：PI3K-AKT信号通路PIK3CA基因
- 雷帕霉素和3-甲基腺嘌呤对RAW264.7细胞中8种miRNAs表达的影响
- 2017年
- 目的探究雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理对RAW264.7细胞中miR-181c,miR-101b和miR-1192等8种自噬相关miRNAs的表达水平,为研究miRNAs在细胞自噬中的功能提供理论基础。方法生物信息学预测分析与细胞自噬相关的miRNAs并构建miRNAs调控细胞自噬的网络图;分别用Rapa和3-MA对RAW264.7细胞做不同条件处理,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测不同条件处理后RAW264.7细胞中miR-181b、miR-181c、miR-101b、miR-1192、miR-362-3p、miR-590-3p、miR-875-5p和miR-335-5p的相对表达量。结果生物信息学预测结果显示8种miRNAs可能分别靶向作用于细胞自噬通路中多个关键蛋白,对细胞自噬起到促进或抑制作用;与正常对照组相比,miR-181c、miR-101b、miR-1192、miR-362-3p、miR-335-5p、miR-875-5p在Rapa处理RAW264.7细胞组中表达显著下调(P<0.05),而在3-MA处理组则都显著上调(P<0.05);miR-181b在Rapa组表达显著上调,在3-MA组表达下调(P<0.05);miR-590-3p在Rapa组和3-MA组都无显著性变化(P>0.05)。结论 miR-181c、miR-101b等7种miRNAs可能在RAW264.7巨噬细胞自噬过程中发挥重要调控作用。
- 徐向荣马占兵蒋丹屈昱良王羡方媛郭乐徐广贤
- 关键词：自噬MIRNASREAL-TIME
