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弓形虫表面抗原SAG2基因的克隆表达纯化及鉴定被引量：1: 2015年; 目的构建弓形虫表面抗原2(SAG2)基因重组质粒并在大肠埃希菌中表达。方法根据SAG2基因序列设计并合成引物,用PCR法从弓形虫基因组DNA中扩增SAG2基因片段,再克隆到p GEX-4T载体中,构建重组质粒。重组质粒经酶切鉴定并测序后,在大肠埃希菌BL21中诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blotting分析其反应原性。结果 SAG2基因PCR产物大小约为561 bp,与预期相符。重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合。重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的SAG2融合蛋白分子量约为47 ku,该蛋白可被GST标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫SAG2基因,表达蛋白具有反应原性。; 王卫艳李瑾魏庆宽贾凤菊肖婷徐超尹昆黄炳成; 关键词：刚地弓形虫基因克隆融合蛋白蛋白纯化

山东省间日疟原虫MSP-1和CSP等位基因型及同源性分析: 2017年; 目的分析山东省间日疟原虫MSP-1和CSP基因类型及其同源性,为病例溯源提供科学依据。方法采集2011年山东省报告的12例间日疟患者血样,提取疟原虫基因组DNA;分别根据间日疟原虫MSP-1和CSP基因序列设计引物,进行巢式PCR扩增、酶切、测序、序列比对及同源性分析。结果 12份间日疟患者血样MSP-1基因全部出现470bp扩增条带以及350、120 bp酶切片段,均为Sal-1型;MSP-1进化树分析显示,9份省内感染者样品序列同属一个分枝,1份印度感染者样品序列与印度分离株位于同一分枝。12份间日疟患者样品CSP基因均包含GDRA(D/A)GQPA序列,为PV-Ⅰ型,其中10份省内感染者和1份广东感染者样品CSP基因出现560~840 bp和150~230 bp两种扩增条带,为PV-Ⅰ型温带族,1份在印度感染者样品CSP基因仅出现560~840 bp条带,为PV-Ⅰ型热带族。CSP进化树表明,10份省内感染者及1份广东感染者样品序列同属一个分枝,1份在印度感染者样品序列与印度和印度尼西亚分离株位于同一分枝。结论山东省本地感染间日疟原虫MSP-1基因型均为Sal-1型,CSP基因型均为PV-Ⅰ型温带族,本地虫株具有较强的基因同源性。; 徐超魏庆宽孔祥礼李瑾王用斌肖婷尹昆贾凤菊孙慧黄炳成陈延平; 关键词：间日疟原虫基因分型同源性

刚地弓形虫致密颗粒蛋白GRA7基因的重组、表达及鉴定被引量：7: 2014年; 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白7(GRA7)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据GRA7基因序列设计合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA7基因片段,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经酶切、PCR鉴定并测序;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析并纯化,Western blot分析其反应原性。结果 GRA7基因PCR产物大小约为714bp,与预期相符;重组质粒经酶切及PCR鉴定构建成功,测序结果与已知序列吻合;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA7融合蛋白分子质量单位约为53ku,该蛋白可被His标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA7基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。; 张成芳李瑾张海国魏庆宽王卫艳肖婷徐超贾凤菊黄炳成; 关键词：弓形虫融合蛋白蛋白纯化

弓形虫GRA6基因的重组、表达及鉴定被引量：3: 2015年; 目的构建弓形虫致密颗粒蛋白6(GRA6)基因重组质粒并在大肠埃希菌中进行表达。方法根据弓形虫GRA6基因序列设计并合成引物,用PCR方法从弓形虫基因组DNA中扩增GRA6基因片段,扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定后,再克隆到pGEX-4T载体中,重组质粒经限制性内切酶BamHI、EcoRI酶切鉴定并测序后,将重组质粒转化大肠埃希菌BL21后并用IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE分析并纯化,以Western blot分析其反应原性。结果以弓形虫DNA为模板扩增GRA6基因片段,经1%琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物大小为693bp,与理论值相符;重组质粒经酶切鉴定构建成功,测序结果与GenBank上弓形虫RH株GRA6序列AF239283.1同源性100%;重组质粒转化菌经IPTG诱导后表达的GRA6融合蛋白分子质量单位约为52ku,与GST-GRA6的理论分子质量相符,该融合蛋白可被GST标签抗体识别。结论成功重组了弓形虫GRA6基因,表达蛋白具有反应原性,为弓形虫诊断抗原试剂盒的制备奠定了基础。; 李瑾魏庆宽贾凤菊徐超肖婷王卫艳尹昆刘功振黄炳成; 关键词：弓形虫基因克隆融合蛋白蛋白纯化

猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B2基因的原核表达、纯化以及免疫反应性分析: 2019年; 目的原核表达猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B2基因,分析重组蛋白的免疫反应性。方法参照GenBank中Ts8B2基因序列设计引物,以合成基因为模板获得预期DNA片段,双酶切后连接至原核表达载体pGEX-4T-1。将重组质粒转化入大肠埃希菌DH5α(E.coli DH5α),PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli Rosstea,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物。尿素法提取重组蛋白,然后以脑囊虫病患者血清为一抗,Western blot分析其免疫反应性。结果 Ts8B2基因PCR扩增产物为258 bp,与理论值一致。双酶切和测序鉴定重组表达质粒构建成功,SDS-PAGE分析重组质粒转化菌表达相对分子质量为3.5×10~3,以包涵体形式存在目的蛋白,Western blot分析尿素法提取的重组蛋白能被脑囊虫患者血清识别。结论成功构建Ts8B2基因重组表达质粒表达的重组蛋白具有免疫反应性,为进一步研究该蛋白在抗体检测中的应用奠定了基础。; 陈静梅陈静梅李瑾孙慧肖婷魏庆宽贾凤菊; 关键词：猪囊尾蚴原核表达免疫反应性

我国输血性三日疟病例分析被引量：1: 1996年; 疟疾是以疟原虫为病原体的寄生虫病,通常由感染性按蚊叮咬传播,但也可通过输血时输入带疟原虫的血液而感染,称为输血性疟疾.改革开放以来,由于流动人口日益增多,临床上对血源需求量又不断增长,加之供血来源复杂,因此,输血性疟疾在局部地区有增多趋势.根据作者搜集的有关资料,本文统计国内1980年8月至今已公开报道的70例输血性三日疟病例,作临床分析,以供同道参考.; 毛协仁贾洪忠徐静曹永凤孔巧云贾凤菊毛德华; 关键词：病例分析供血者寄生虫病防治受血者十二指肠球部溃疡

猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B3基因的原核表达、纯化以及免疫反应性分析被引量：8: 2018年; 目的将猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B3基因进行原核表达,分析重组蛋白的免疫反应性。方法根据Ts8B3基因序列设计引物,以囊尾蚴RNA反转录的cDNA为模板PCR扩增Ts8B3基因,扩增产物经BamHⅠ/XhoⅠ双酶切后连接至原核表达载体pGEX-4T-1,将重组质粒转化入大肠埃希菌DH5α(E.coli DH5α),PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物。纯化重组蛋白,以囊虫病人血清为一抗,采用Western blot分析其免疫反应性。结果 PCR扩增Ts8B3基因片段为201bp,双酶切和测序显示重组表达质粒构建成功。重组质粒转化BL21后经IPTG诱导4h,以包涵体的形式表达相对分子质量单位(Mr)为33×103的目的蛋白。纯化的重组蛋白能被囊虫病患者血清识别。结论成功构建Ts8B3基因重组质粒,表达的重组蛋白具有免疫反应性,为进一步研究该蛋白在抗体检测中的应用奠定了基础。; 李瑾肖婷孙慧魏庆宽贾凤菊黄炳成; 关键词：猪囊尾蚴原核表达免疫反应性

脑囊尾蚴病患者治疗后脑CT影像学特征变化被引量：1: 2018年; 目的探讨脑囊尾蚴病患者抗囊尾蚴治疗期间脑CT影像变化。方法选择2010年5月至2015年5月在山东省医学科学院第三附属医院就诊的380例脑囊尾蚴病住院患者作为研究对象,临床给予3阶段阿苯达唑、吡喹酮抗囊尾蚴化疗,治疗前后均行头颅CT扫描,其中210例行增强扫描,对治疗不同阶段患者脑CT影像学资料进行分析。结果脑囊尾蚴病患者治疗前CT影像显示有单个或多个小囊状低密度,囊内可见小结节状高密度头节影,伴周围水肿;治疗后脑CT复查显示81.58%(310/380)的脑囊尾蚴病患者低密度灶完全吸收,16.32%(62/380)病灶大部分吸收,2.11%(8/380)CT影像显示为钙化灶。患者一般于服用抗囊尾蚴药物2~3 d后出现杀虫反应;随着治疗时间的延长,抗囊尾蚴药物反应逐渐减轻,在第3阶段治疗后大多数患者病灶吸收或钙化。结论 CT检查可明确脑囊尾蚴病病变部位、范围,并可对脑囊尾蚴病进行分型,还能根据抗囊尾蚴治疗期间影像学变化评价治疗效果。; 胡颖新贾凤菊台桦于振华戴军于涛; 关键词：脑囊尾蚴病体层摄影术影像学特征

提取陈旧阳性血膜疟原虫DNA方法的研究被引量：1: 2015年; 目的建立一种能够提取陈旧阳性血膜疟原虫DNA的方法,为疟原虫基因溯源研究奠定基础。方法应用DNA抽提试剂盒(QIAampDNA Mini Kit)改良后提取41份吉氏染色镜检阳性血膜的疟原虫DNA,并与Chelex-100和Na2HPO4法进行比较。巢式PCR扩增疟原虫SSU r RNA基因片段,鉴定疟原虫虫种。PCR结果进行测序和序列比对,统计分析20世纪80年代与近10年血膜、不同血膜处理方法以及不同质量血膜的PCR阳性检出率差异。结果改良试剂盒法PCR结果总阳性检出率为70.7%(29/41)。80年代和近10年血膜PCR阳性检出率分别为78.6%(11/14)和66.7%(18/27),两组间差异无统计学意义(χ2=0.63,P>0.05)。经去油、脱色处理和未经处理组血膜的PCR阳性检出率分别为62.5%(15/24)和82.4%(14/17),两组间差异无统计学意义(χ2=1.89,P>0.05)。质量较好和较差血膜的PCR阳性检出率分别为93.3%(28/30)和9.1%(1/11),两组间差异有统计学意义(χ2=27.59,P<0.01)。测序结果表明扩增目的片段与预期结果一致。Chelex-100和Na2HPO4法PCR未能扩增出特异性目的条带。结论试剂盒(QIAampDNA Mini Kit)改良法提取80年代血膜疟原虫DNA可获得较高PCR阳性检出率,且染色剂和镜检油渍对血膜疟原虫DNA提取效果无明显影响。; 徐超魏庆宽李瑾肖婷贾凤菊王卫艳尹昆付婷霞赵桂华刘功振黄炳成; 关键词：疟原虫 DNA提取巢式PCR

用改良试剂盒提取陈旧血膜DNA用于疟疾基因溯源研究: 目的:建立一种能够提取陈旧血膜DNA的方法,为疟疾基因溯源研究奠定基础. 方法:应用DNA抽提试剂盒(QIAamp DNA Mini Kit)改良后提取41份疟原虫吉氏染色血膜DNA,并与Chelex-100和...; 徐超刘功振黄炳成魏庆宽李瑾肖婷贾凤菊王卫艳尹昆付婷霞赵桂华; 关键词：疟疾脱氧核糖核酸; 文献传递

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