赵雨欣
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：新疆医科大学公共卫生学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 混合无机砷对Keap1基因沉默HaCaT细胞中Nrf2通路的影响
- 2017年
- 目的探讨Keap1沉默及染砷对Nrf2通路相关基因表达的影响及砷致皮肤早期氧化损伤的机制。方法培养人源性正常HaCaT细胞(正常细胞)和Keap1沉默HaCaT细胞,将无机砷混合受试物按照LC50的1/100、1/50、1/10分为低(2.90μmol/L)、中(5.80μmol/L)、高(29.00μmol/L)3个不同浓度组,以0μmol/L无机砷混合受试物染毒Keap1沉默HaCaT细胞组为阴性对照组,正常细胞组为空白对照组,于3个时间点(24、48、72h)采用实时荧光定量PCR检测Nrf2通路相关基因(Nrf2和Bach1)mRNA表达,使用ELISA试剂盒检测GSH、HO-1蛋白表达。结果以阴性对照组作参照,Nrf2基因24h2.90、29.00μmol/L染砷组表达上调,48h和72h时2.90μmol/L染砷组表达上调,而5.80μmol/L及29.00μmol/L染砷组表达均下调,差异有统计学意义(P<0.012 5);Bach1基因24h2.90、5.80及29.00μmol/L染砷组表达上调,48h2.90、5.80μmol/L染砷组表达上调,而72h2.90、5.80及29.00μmol/L染砷组表达均下调,差异有统计学意义(P<0.012 5)。随染毒浓度的增加,GSH蛋白和HO-1蛋白表达总体呈持续增长趋势。其中GSH蛋白24h2.90、5.80及29.00μmol/L染砷组,48h5.80μmol/L和29.00μmol/L染砷组以及72h29.00μmol/L染砷组表达差异有统计学意义(P<0.012 5);HO-1蛋白24、48、72h2.90、5.80及29.00μmol/L染砷组差异均有统计学意义(P<0.012 5);空白对照组GSH蛋白和HO-1蛋白表达总体上低于阴性对照组,24h差异均有统计学意义(P<0.012 5)。结论 Keap1基因沉默会引起Nrf2持续激活。Keap1、Nrf2、Bach1、GSH和HO-1均参与砷诱导的抗氧化反应,并在砷致皮肤氧化应激损伤中发挥作用。
- 赵雨欣吴军蒙好孝郑玉建
- 关键词：HACAT细胞KEAP1基因沉默基因表达蛋白表达
- 抑制Keap1基因对染砷HaCaT细胞Nrf2通路的影响
- 2017年
- 目的观察无机砷混合物对Keap1抑制HaCaT细胞的活力及形态变化,探讨Keap1抑制及染砷对Nrf2通路相关基因表达的影响,探究砷致皮肤早期氧化损伤的机制。方法培养正常与Keap1抑制HaCaT细胞,将无机砷混合受试物按照LC50的1/100、1/50、1/10分为低、中、高3个不同浓度组,即为2.90μmol/L、5.80μmol/L、29.00μmol/L,以0μmol/L无机砷混合受试物染毒Keap1抑制HaCaT细胞组为阴性对照组,正常细胞组为空白对照组,于4个时间点(8、24、48、72 h)采用MTT法检测细胞活力,使用实时荧光定量PCR检测Nrf2通路相关基因(Nrf2、Keap1、Bach1及CBP)mRNA表达。结果随染砷浓度增加,细胞收缩明显,边缘多不规则,脱壁明显。2.90μmol/L混合砷染毒促进细胞增殖,≥5.80μmol/L混合无机砷染毒抑制细胞增殖。与空白对照组比较,阴性组Nrf2通路相关基因(Bach1,CBP)随时间延长,基因表达持续升高,差异均有统计学意义(F=200.261,P<0.05)。与阴性组比较,2.90μmol/L染砷组24、48 h时Nrf2基因表达无差异;Bach1、CBP基因表达均上调,差异均有统计学意义(F=29.015、43.964,P<0.01)。5.80μmol/L染砷组24 h时Nrf2基因表达无差异,Bach1、CBP基因表达均上调;48、72 h时Nrf2、Bach1、CBP基因表达均下调,差异均有统计学意义(F=5.289、29.015、43.964,P<0.01)。29.00μmol/L染砷组24、48 h时Nrf2、Bach1、CBP基因表达均上调;72 h时Nrf2、Bach1、CBP基因表达均下调,差异有统计学意义(F=34.275,P<0.01)。经两两比较,72 h时随染砷浓度逐渐增加,Nrf2、Bach1、CBP基因表达逐渐下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制Keap1基因会引起Nrf2持续激活。Bach1和CBP协同调控Nrf2通路可能在砷致氧化应激反应中起调节作用。
- 赵雨欣蒙好孝陈柔锦李煜吴军郑玉建
- 关键词：HACAT细胞KEAP1基因抑制
- 抑制Keap1基因对染砷HaCaT细胞蛋白底物的影响
- 2017年
- 目的探讨抑制Keap1基因对染砷人永生化皮肤角质(HaCaT)细胞砷蛋白底物的影响。方法将人源性正常HaCaT细胞作为实验的空白对照组,Keap1抑制HaCaT细胞作为染毒组和阴性对照组,培养8、24、48、72h,对染毒组给予无机砷混合物进行染毒,分为高、中、低浓度组,各浓度组的染毒浓度为LC50的1/10(29μmol/L)、1/50(5.8μmol/L)和1/100(2.9μmol/L);采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测砷处理细胞内同型半胱氨酸(HCY)、S-腺苷甲硫氨酸(SAM)、三价砷甲基转移酶(As3MT)N-6-腺嘌呤DNA甲基转移酶1(N6AMT1的蛋白含量。结果染砷8h,与阴性对照组比较,空白对照组、高浓度组SAM蛋白表达下调,低、中浓度组表达上调;低、中浓度组HCY蛋白表达上调,AS3MT蛋白在空白对照组、低浓度组表达上调,N6AMT1蛋白在空白对照组下调,低、中浓度组表达上调(P<0.012 5)。染砷24h,与阴性对照组比较,As3MT蛋白在低、中、高3个浓度组表达上调,SAM蛋白在空白对照组表达下调,低浓度组表达上调,高浓度组表达下调,HCY在空白对照组、低浓度组表达上调(P<0.012 5)。染砷48h,与阴性对照组比较,SAM、HCY的蛋白在低、中浓度组表达上调;N6AMT1的蛋白在中浓度组表达上调,高浓度组表达下调(P<0.012 5)。染砷72h,与阴性对照组比较,SAM蛋白在空白组和高浓度组表达下调,低浓度组表达上调,AS3MT的蛋白在空白对照组、低和中浓度组表达上调;N6AMT1的蛋白在空白对照组、高浓度组表达下调,在高浓度组SAM、As3MT、N6AMT1蛋白表达均下调(P<0.012 5)。结论 SAM和HCY蛋白表达在砷甲基代谢中表达有一致性;砷甲基化代谢中N6AMT1与AS3MT共同作用,其中N6AMT1起辅助作用;在高浓度、长时间的砷暴露中造成蛋白底物的耗竭,砷代谢发生障碍。
- 蒙好孝赵雨欣李煜陈柔锦郑玉建吴军
- 关键词：KEAP1
