赵鹏宇
- 作品数：10 被引量：5H指数：1
- 供职机构：黑龙江八一农垦大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 不同生长期坏死杆菌OMVs的分离鉴定及其对RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-8的影响
- 2023年
- 为初步探究坏死杆菌不同生长期外膜囊泡(OMVs)在形态、蛋白组成和功能的差异,利用密度梯度离心法提取坏死杆菌OMVs,通过透射电镜观察OMVs的形态结构,SDS-PAGE和Western blot分析OMVs的蛋白组成差异,ELISA检测OMVs刺激RAW264.7细胞后TNF-α和IL-8的分泌情况。结果显示:坏死杆菌在培养2 h后进入对数生长期,在8 h时达到峰值,随后进入稳定期和衰亡期;坏死杆菌不同生长期均可产生球形的OMVs,在坏死杆菌培养24 h时产生的OMVs中43 K OMP和白细胞毒素的水平显著高于其他各组(P<0.01);坏死杆菌培养12 h时产生的OMVs刺激RAW264.7细胞12 h和24 h后分泌的IL-8和TNF-α水平均高于其他组。因此,坏死杆菌稳定期产生的OMVs可以更好的刺激RAW264.7细胞产生炎症因子IL-8和TNF-α。
- 赵鹏宇蒋凯毕栏于思雯王天硕肖佳薇贺显晶郭东华
- 关键词：坏死杆菌TNF-ΑIL-8
- 车前草总黄酮提取工艺优化及其抗腹泻活性的研究
- 2023年
- 为确定车前草中的总黄酮提取工艺以及总黄酮对腹泻治疗的作用,通过单因素分析实验法和响应面法对车前草总黄酮的提取工艺进行分析和优化。实验采用蓖麻油诱导小鼠腹泻,灌服0.2 mL蓖麻油建立小鼠腹泻模型,进而分析研究车前草中的黄酮类物质在小鼠腹泻中的影响。经研究得出,车前草中的总黄酮提取效果最佳的条件是:(1)乙醇的浓度为70.36%;(2)提取实验过程中温度应控制在85.6℃;(3)原料和提取液的比例应为1∶15.99。在最优工艺条件下每克车前草提取的黄酮的量为12.41 mg·g^(-1),纯度为67.34%。此外,车前草黄酮能显著降低蓖麻油诱导小鼠的腹泻次数、延缓肠道碳粉推进,具有良好的抗腹泻活性。研究为车前草的合理利用以及开发提供了理论基础。
- 李璐邢晓旭朱庆贺王俊李梓健赵飞宇赵鹏宇孙东波
- 关键词：车前草总黄酮响应面法
- 坏死杆菌外膜囊泡诱导羊中性粒细胞自噬和NLRP3炎性小体的研究被引量：1
- 2023年
- 为探究坏死杆菌(Fn)外膜囊泡(OMV)对羊中性粒细胞自噬及NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体激活的影响,本研究提取并纯化Fn OMV,经透射电子显微镜观察并测定纯度后,以5μg/mL的OMV刺激羊中性粒细胞1 h、2 h、4 h、6 h,以未刺激的细胞作为对照组,经姬姆萨染色和倒置光学显微镜观察羊中性粒细胞形态。电镜观察可见OMV为球形囊泡状结构且纯度较高。姬姆萨染色结果显示,细胞为典型的杆状核和分叶核样中性粒细胞。光学显微镜观察结果显示,对照组羊中性粒细胞为圆形,而5μg/mL OMV刺激组细胞出现细胞肿胀、体积变大变形的现象,且刺激2 h~6 h上述细胞变化更明显。采用荧光定量RT-PCR检测OMV刺激后的羊中性粒细胞中炎性小体相关基因NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18,自噬相关基因mTOR、Beclin 1、MAP1LC3B、P62 mRNA的相对转录水平。结果显示,与对照组相比,OMV刺激1 h时GSDMD mRNA的相对转录水平极显著升高(P<0.0001),其他炎性小体相关基因mRNA的相对转录水平无显著变化;刺激2 h时GSDMD mRNA的相对转录水平显著下降(P<0.05),炎性小体相关基因NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA的相对转录水平均显著升高(P<0.05);刺激4 h和6 h时GSDMD mRNA的相对转录平极显著下降(P<0.0001),NLRP3、IL-1βmRNA的相对转录水平均显著升高(P<0.05),Caspase-1、IL-18 mRNA的相对转录水平均无显著变化。自噬相关基因mTOR、Beclin 1、MAP1LC3B、P62 mRNA的相对转录水平在不同刺激时间后均显著升高(P<0.05)。上述结果表明,5μg/mL的Fn OMV刺激羊中性粒细胞2 h可激活NLRP3炎性小体;5μg/mL的Fn OMV可在基因水平上启动羊中性粒细胞自噬并形成自噬小体。本研究为Fn的致病机制研究奠定了基础。
- 毕栏赵鹏宇王天硕于思雯肖佳薇郭东华
- 关键词：坏死杆菌自噬
- 一例猪流行性腹泻病毒与致病性大肠杆菌混合感染的诊断及分析被引量：1
- 2023年
- 为明确齐齐哈尔市泰来县某猪场引起哺乳仔猪腹泻的病因,试验采集腹泻仔猪的粪便样品,通过PCR检测、细菌分离培养、16S rRNA序列测定、同源比对分析以及分离菌株的致病性试验等对腹泻仔猪的病原进行了鉴定,同时对分离菌株进行药敏试验。结果表明:在腹泻仔猪粪便样本中猪流行腹泻病毒(PEDV)呈阳性;从病料中分离出的菌株与大肠杆菌(KJ477007.1、MW301234.1等)的同源性均超过99%;将分离菌株以腹腔接种的方法注射给BALB/c小鼠,约20 h后接种分离菌株的小鼠全部死亡,剖检和HE结果显示该分离菌株致病性较强;该分离菌株对头孢噻呋、头孢吡肟存在高度敏感性;对头孢喹肟和林可霉素存在中度敏感性;对庆大霉素、恩诺沙星、卡那霉素、氟苯尼考以及阿奇霉素存在耐药性。说明该猪场的仔猪腹泻主要是由猪流行性腹泻病毒和致病性大肠杆菌的混合感染所致,在进行治疗时,应结合药敏试验的结果进行用药。
- 李梓健朱庆贺邢晓旭宋军苏明俊李璐赵飞宇赵鹏宇孙东波
- 关键词：猪流行性腹泻病毒致病性大肠杆菌
- 猫传染性腹膜炎病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体制备
- 2023年
- 为制备猫传染性腹膜炎病毒N蛋白特异性多克隆抗体,研究根据HLJ/HRB/2016/11毒株N基因序列设计引物,通过PCR进行基因扩增,并将目的基因在Bam HⅠ、HindⅢ酶切位点克隆至pET32a(+)原核表达载体上,将其转化到BL21(DE3)感受态细胞,经终浓度为1 mmol·L^(-1)的IPTG在16℃诱导16 h后,SDS-PAGE检测表达产物,结果显示,在约69 kda处出现目的条带,且该蛋白主要以可溶形式表达。将重组N蛋白经Ni柱纯化后,按每只BALB/c小鼠免疫50μg,三免后7 d采血分离血清,经间接ELSA检测结果显示,获得的N蛋白可被特异性识别且效价可达到1∶12800。研究制备的猫传染性腹膜炎病毒N蛋白及其多克隆抗体为后续猫传染性腹膜炎的疫苗提供基础。
- 赵飞宇杨丹赵鹏宇李梓健李璐孙东波
- 关键词：衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 牛坏死杆菌对小鼠巨噬细胞的增殖和自噬影响的初步探究
- 2023年
- 为探究牛坏死杆菌对小鼠巨噬细胞系(RAW264.7细胞)增殖和自噬的影响,本研究将牛坏死杆菌A25株以MOI 10感染RAW264.7细胞作为实验组,以未感染的RAW264.7细胞作为对照组。分别于感染后1 h、2 h、4 h收集细胞,采用Ed U和MDC染色法观察细胞荧光,并计算各组细胞增殖率及细胞自噬小体的数量。Ed U染色法观察可见,各实验组随着感染时间的延长,绿色荧光的量逐渐减少,对照细胞绿色荧光的量基本无变化,且与对照组相比,随着感染时间的延长,感染组细胞增殖率均极显著降低(P<0.05);MDC染色法观察结果可见,与对照组相比,随着感染时间的延长,感染组细胞中的绿色荧光逐渐增强,且随着感染时间的延长,细胞中自噬小体的数量与对照组相比均极显著增多(P<0.01)。上述结果表明,牛坏死杆菌感染RAW264.7细胞后抑制细胞的增殖,并且诱导该细胞发生自噬。分别采用荧光定量PCR(RT-qPCR)和western blot检测上述各组细胞中自噬基因Beclin-1和P62 mRNA的相对转录水平及自噬蛋白LC3和P62的相对表达水平。RT-q PCR结果显示,与对照组相比,感染1 h后RAW264.7细胞中Beclin-1基因mRNA的相对转录水平无显著变化;感染2 h和4 h时该基因mRNA的相对转录水平极显著升高(P<0.01),P62基因mRNA的相对转录水平在不同感染时间均极显著降低(P<0.001);western blot结果显示,与对照组相比,各实验组细胞中LC3-Ⅱ蛋白的表达量于不同感染时间均极显著升高(P<0.01),P62蛋白的表达量于不同感染时间均极显著降低(P<0.001)。上述结果从自噬相关基因mRNA转录水平和其蛋白表达水平均证明牛坏死杆菌诱导RAW264.7细胞发生了自噬,首次证实牛坏死杆菌可以诱导RAW264.7细胞发生自噬,并且抑制该细胞的增殖,本研究为进一步探究牛坏死杆菌的感染机制奠定实验基础。
- 王天硕于思雯毕栏赵鹏宇蒋凯肖佳薇郭东华
- 关键词：小鼠巨噬细胞自噬
- 牛坏死杆菌对EPH4细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用被引量：1
- 2022年
- 为探究牛坏死杆菌对小鼠乳腺上皮细胞系(EPH4细胞)增殖和凋亡的影响,本研究将坏死杆菌(牛A25菌株)以感染复数(MOI)为100感染EPH4细胞,用EdU细胞增殖法检测细胞增殖率,用Hoechst染色以及DNA Ladder检测细胞凋亡,并用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测凋亡基因的mRNA相对表达量变化。EdU检测结果显示,坏死杆菌可抑制EPH4细胞增殖;Hoechst染色以及DNA Ladder检测结果均显示,坏死杆菌可促进细胞凋亡的发生;RT-qPCR结果显示,与对照组相比,坏死杆菌感染EPH4细胞2 h时,促凋亡基因Bax、Bax/Bcl-2的mRNA相对表达量显著上调(P<0.05),感染4 h时,促凋亡基因Caspase-3和Caspase-9的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001),感染6 h时,促凋亡基因AIF的mRNA相对表达量极显著上调(P<0.001)。由此可见,牛坏死杆菌能够抑制EPH4细胞增殖且诱导细胞凋亡,为进一步研究坏死杆菌致病机制提供了相关数据支持。
- 汪锋锋蒋凯赵鹏宇王天硕于思雯郭东华
- 关键词：增殖抑制诱导凋亡实时荧光定量PCR
- A25Δ43K OMP基因缺失株和亲本株对坏死杆菌生物被膜和耐药性影响的比较与分析
- 2023年
- 坏死杆菌(Fusobacterium necrophorum,F.necrophorum)是一种严格厌氧的革兰阴性菌,感染动物可引起反刍动物腐蹄病、肝脓肿、犊牛白喉、乳房炎和子宫内膜炎等疾病。生物被膜的存在是造成细菌持续感染的重要原因之一。细菌黏附素在生物被膜形成初期的不可逆附着阶段起重要作用。43K OMP是坏死杆菌重要的外膜蛋白之一,具有介导坏死杆菌黏附的功能,43K OMP对生物被膜形成是否产生影响尚未有人报道。通过对坏死杆菌亲本株A25和缺失株A25Δ43K OMP的生物被膜初期不可逆附着阶段细菌数、生物被膜成熟时间、生物被膜形态和耐药性进行检测。结果显示,坏死杆菌缺失43K OMP基因对生物被膜成熟时间无显著影响,会导致成熟生物被膜含量显著增多,接种24 h不可逆附着阶段细菌含量显著减少,生物被膜形态更早出现聚集性菌落和沟壑状结构,对卡那霉素、庆大霉素、安普霉素和磺胺嘧啶的耐药性减弱。43K OMP基因缺失促进坏死杆菌形成生物被膜,抑制坏死杆菌对氨基糖苷类药物的耐药。为坏死杆菌43K OMP基因的功能研究和坏死杆菌病的治疗提供新的研究思路。
- 蒋凯赵鹏宇贺显晶郭东华
- 关键词：坏死杆菌基因缺失生物被膜耐药性
- 黄曲霉毒素B1干预下雏鸡的临床观察
- 2016年
- 为了对AFB1中毒雏鸡提供临床诊断依据,将20只7日龄雏鸡随机分为两组:AFB1组饲喂添加含AFB1标准品饲料;正常对照组给予正常饲料。实验持续28天,对实验雏鸡进行临床观察。结果表明本实验成功观察到了雏鸡黄曲霉毒素B1中毒动物模型的典型临床症状,本研究结果可为临床上黄曲霉毒素B1中毒的家禽病例诊断及AFB1毒素致病机制提供参考依据。
- 吴正娇李红霞田崇柏慧赵鹏宇刘慧婷李明明董海鑫杨鹤白杰陈媛媛
- 关键词：雏鸡临床症状黄曲霉毒素B1
- 牛坏死杆菌43K OMP的生物信息学分析及B细胞表位预测被引量：2
- 2022年
- 为了对牛坏死杆菌43K OMP进行生物信息学分析,并预测其B细胞表位,研究利用Prot Param在线软件、TMHMM在线软件、Net Phos软件、DNA star软件和I-TASSER在线软件,分别对43K OMP的理化性质、跨膜区、磷酸化位点、二级结构和三级结构进行分析,用Bepipred在线软件和Ellipro在线软件对其B细胞表位进行预测,并对预测的表位肽进行验证。结果表明43K OMP共编码377个氨基酸,相对分子质量为42.927×10^(3),理论等电点为8.74,该蛋白在1-20aa处存在信号肽区域,无跨膜区,包括34个磷酸化位点,具有10个构象B细胞表位,多个线性B细胞表位,合成的4表位肽经ELISA验证显示反应性良好。通过生物信息学技术分析出43K OMP的性质及结构,预测出其具有多个B细胞表位,为该蛋白的功能研究及基因工程疫苗的研制提供依据。
- 王丽娜贺显晶蒋剑成汪锋锋肖佳薇蒋凯赵鹏宇王天硕于思雯毕栏郭东华
- 关键词：生物信息学分析B细胞表位
