周英彪
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：天津科技大学生物工程学院更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 用于筛选抑制丙型肝炎病毒内部核糖体进入位点活性药物的整合型细胞药物筛选模型的构建和评价
- 2007年
- 目的:构建一个能用于筛选抑制丙型肝炎病毒内部核糖体进入位点(HCV-IRES)活性药物的整合型细胞药筛模型。方法:构建携带HCV5'-UTR调控报告基因分泌型碱性磷酸酶(SEAP)基因的质粒pHCV5'-SEAP和用作筛选标记的pNeoR,线性化后共转染于Huh-7细胞中,经G418筛选后得到抗性细胞克隆,进行SEAP定量检测筛选后,得到能用于筛选抑制HCV-IRES活性药物的整合型细胞药筛模型;连续培养24代,用MTT法测细胞相对活力评价该药筛模型的生长稳定性,用SEAP定量检测法评价该药筛模型的SEAP表达稳定性,用反义寡聚核苷酸抑制试验评价模型的药筛灵敏度。结果:G418筛选后得到26个抗性细胞克隆;对其中5个抗性细胞克隆进行SEAP定量检测筛选后,得到3个能表达SEAP的阳性细胞克隆;连续培养24代过程中,该药筛模型的生长稳定性大于80%,SEAP表达稳定性达95%。结论:构建的细胞模型具有良好的稳定性和药筛灵敏度,符合作为药物筛选模型的要求。
- 周英彪王瑞肖冬光
- 关键词：药物筛选细胞模型丙型肝炎病毒内部核糖体进入位点
- 水翁悬浮细胞系的建立及其悬浮培养的生长特性被引量：6
- 2007年
- 建立了水翁悬浮细胞系,并对其悬浮培养的生长特性作了初步探讨.以水翁新生芽尖作为外植体,接种于添加有不同浓度和配比的生长调节物质及各种附加 物的MS固体培养基中,诱导培养产生初代愈伤组织;挑选Ⅰ和Ⅱ型的愈伤组织进行 继代培养改良,考察愈伤组织的生长状况和统计生长量来决定最佳继代培养基的配 方和得到适合悬浮培养的愈伤组织;将以上得到的愈伤组织转接于最佳继代液体培 养基中,于24±1 ℃,120r/min条件下振荡培养,筛选分散度好、较均匀、生长快、 色浅透明的细胞作为种子传代,数次传代后得到性能良好的悬浮细胞系;以细胞生 长量（鲜重）为指标,绘制了水翁悬浮细胞的生长曲线.研究表明：2.0mg/L的2,4-D的 诱导率最高（92%,初代愈伤组织为Ⅰ型）,Ⅱ型愈伤组织的最高诱导率为75%;最佳的 继代培养基配方为MS＋0.5 mg/L 2,4-D＋0.5 mg/L 6-BA＋1.0 mg/LIAA＋0.5 mg/LIBA＋0.5 mg/L NAA＋0.1 mg/L KT＋700mg/L LH,形成Ⅱ型愈伤组织的生长量可 达3.28g/瓶（鲜重）;液体继代培养3代后,可得到性能良好的悬浮细胞系;水翁悬浮 细胞的生长曲线表明,最佳接种期为培养后的16～18 d.
- 周英彪王瑞肖冬光
- 关键词：悬浮细胞系
