田杰
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 补体应答基因-32过表达对SW480细胞骨架的影响被引量：4
- 2011年
- 目的通过基因重组技术构建pcDNA3.0-RGC32重组质粒,并检测其对细胞骨架的影响。方法扩增RGC32的全长并定向克隆到真核表达载体pcDNA3.0,获得重组质粒pcDNA3.0-RGC32,转染SW480细胞,采用G418筛选单克隆,Westernblot检测转染前后SW480细胞中RGC32的表达水平,并制作转染前后SW480细胞骨架标本,并采用划痕实验观察细胞的迁移能力。结果 pcDNA3.0-RGC32真核表达载体构建成功,转染重组载体后细胞中RGC32的表达量明显增多。转染重组质粒前,SW480细胞骨架中微丝纤维束少而短、极性不明显;转染重组载体后的细胞微丝纤维束数量增多,变长,有了明显的极性,并且可见细胞膜向前伸出丝状结构的伪足或者是片状结构的伪足,细胞骨架发生了重组,并且过表达后细胞的迁移能力增强。结论通过过表达RGC32,促进细胞骨架重组,有利于细胞运动,推测细胞骨架重组是RGC32促进肿瘤转移的重要机制。
- 田杰徐川徐川李祖国
- 关键词：细胞骨架结直肠癌
- MALAT-1基因种属同源序列重组质粒的构建及其与人鼻咽癌细胞株C666-1侵袭转移的关系被引量：4
- 2011年
- 目的：运用基因重组技术构建人MAL-AT-1基因种属同源序列（Species homologous frag-ments/shf）重组真核荧光表达载体,并探讨其在MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1中的表达和对其侵袭转移的影响。方法：应用RT-touchdown PCR的方法,从鼻咽癌患者正常切缘组织中扩增出MALAT-1基因的种属同源序列,将所得的cDNA序列定向克隆至真核表达载体pEGFP-C1质粒中,构建出重组真核荧光表达载体;采用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒pEGFP-C1-MALAT-1/shf瞬时转染MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1;通过实时荧光定量PCR方法检测MALAT-1基因种属同源序列转染组和空载体转染组细胞中MALAT-1/shf的表达水平;细胞基质胶侵袭实验研究转染组细胞侵袭能力的变化。结果：经酶切鉴定及测序分析,证实成功构建人MALAT-1/shf重组真核荧光表达载体。pEGFP-C1-MALAT-1/shf（6 918~8 441 bp）转染组平均侵袭细胞数（51.20±5.933）显著高于MALAT-1/mock组（13.40±3.847）,差异具有统计学意义（P=0.000）。这说明转染pEGFP-C1-MALAT-1/shf（6 918~8 441 bp）重组质粒后,细胞的侵袭能力明显增强。结论：成功构建了人MALAT-1基因种属同源序列真核荧光表达载体pEGFP-C1-MALAT-1/shf,并成功在MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1中表达,MALAT-1/shf（6 918~8 441 bp）与人鼻咽癌C666-1细胞株的侵袭转移密切相关。
- 徐川杨敏慧田杰王晓燕李祖国
- 关键词：真核表达载体鼻咽肿瘤
