王铮
- 作品数：13 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国疾病预防控制中心青年科研基金传染病预防控制国家重点实验室基金更多>>
- 相关领域：医药卫生建筑科学更多>>
- 一组靶向HIV膜蛋白的单克隆抗体的分离和功能鉴定
- 2021年
- 目的从中国人类免疫缺陷病毒I型(human immunodeficiency virus type I, HIV-1)慢性感染者体内筛选针对膜蛋白的单克隆抗体并对其进行功能鉴定。方法采用单细胞特异性分选的方法从HIV-1感染者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中筛选抗原特异性单个B细胞,通过逆转录和巢式PCR获得抗体重链和轻链的可变区基因。利用免疫遗传学数据库(immunogenetics database, IMGT)分析抗体基因家系及突变率。抗体表达纯化后,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)鉴定其结合活性和识别表位,通过假病毒中和实验检测抗体中和能力。结果从1例慢性HIV-1感染者样本中筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性抗体。抗体重链可变区基因来自IGHV1-69*09、IGHV1-08*01、IGHV1-46*01、IGHV4-34*01、IGHV4-61*01和IGHV3-43*02家系,突变率为10.76%~21.05%。轻链可变区基因来自IGKV3-20*01、IGKV1-39*01、IGKV1-NL1*01、IGKV3-15*01和IGKV1-9*01家系,突变率为6.03%~18.64%。7个抗体均可以结合gp140,其中抗体508-B1、508-C1、508-C5、508-D4和508-E5主要识别gp41区;508-D6和508-F1结合gp120区。508-D4和508-F1分别可以中和Global Panel假病毒盘中的CNE8(Tier 2)和X2278(Tier 2),IC50值分别为38.1 μg/ml和41.7 μg/ml。结论本研究成功筛选得到7个HIV-1膜蛋白特异性的单克隆抗体,其中5个为识别gp41区的单克隆抗体,2个为gp120结合抗体。2个抗体具备有限的中和能力。该组抗体可为HIV-1检测试剂和抗体药物研发以及艾滋病疫苗免疫原设计提供技术储备。
- 胡园园亢佳星郝彦玲任莉王硕洪坤学邵一鸣王铮李丹
- 关键词：HIV-1中和活性表位单克隆抗体
- 昆明市静脉吸毒感染者HIV-1env基因C2-V4区序列特征分析被引量：3
- 2017年
- 目的分析昆明市静脉吸毒(intravenous drug user,IDU)感染者艾滋病病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)env基因C2-V4区序列特征及代表性广谱单克隆中和抗体(broadly monoclonal neutralizing antibodies,bm NAbs)的表位变异。方法在昆明市收集165份IDUHIV-1感染者血浆样品,提取RNA,通过逆转录得到cDNA,巢式聚合酶链反应(nested-polymerase chain reaction,nested-PCR)扩增HIV-1膜蛋白基因C2-V4区,应用Bio Edit和MEGA等生物信息软件分析所获得序列的特征,并分析2G12、PGT135、PGT128、b12和VRC01等bm NAbs的表位变异。结果 165条序列主要为CRF08_BC(74.55%)和CRF07_BC(23.03%)重组毒株,各可变环变异程度由小到大为V3区
- 邹森高占齐中伟任莉胡园园王铮洪坤学
- 关键词：人免疫缺陷病毒1型流行病学研究
- 一例 HIV-1 广谱中和者体内病毒膜蛋白基因 进化特征及中和敏感性研究被引量：2
- 2023年
- 目的分析一例HIV-1广谱中和者体内病毒膜蛋白基因(env)进化特征及其中和敏感性。方法从感染者两个随访时间点的全血样本中提取前病毒DNA,使用单拷贝基因组扩增(SGA)方法扩增全长env基因,测序后进行序列比对和进化树构建,分析env基因可变区特征及CD4结合位点(CD4bs)的氨基酸特征。将有代表性的env基因克隆到pcDNA^(TM)3.1载体上,与骨架质粒pSG3△env共转染293T细胞制备假病毒,检验其感染能力,筛选出功能性膜蛋白,再将有功能性的假病毒与不同的广谱中和抗体进行中和试验,分析膜蛋白的中和特征。结果从两个时间点全血样本中共获得43条全长env基因,进化树分析显示两个时间点的env序列交叉聚集,膜蛋白序列的基因距离随时间推移而增加。对病毒膜蛋白基因可变区的分析显示,V5区的糖基化位点数目随时间的推移而减少,后一时间点有16%的序列在V1区进化出两个额外的半胱氨酸;中和实验显示V1区半胱氨酸插入不会影响病毒针对V3环中和抗体的敏感性,V5区N460糖基化位点缺失导致假病毒对CD4bs类抗体的敏感性略有下降。结论病毒膜蛋白基因在体液免疫的压力下持续进化;关键中和表位中氨基酸变异导致病毒发生中和逃逸。
- 苑珍珍李康胡彩琴郝彦玲冯毅王铮
- 关键词：艾滋病病毒膜蛋白基因假病毒免疫逃逸
- 人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体，本发明的中和抗体通过单个B细胞流式分选‑抗体基因扩增配对表达技术筛选获得，具有独特的CDR区域，能特异性与SARS‑COV‑2结合并且可以有效中和目前多株国际流行...
- 邵一鸣李丹王铮靳昌忠苏俊威任莉
- 人源化广谱抗新型冠状病毒单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种人源化广谱抗SARS‑COV‑2病毒的单克隆中和抗体，本发明的中和抗体通过单个B细胞流式分选‑抗体基因扩增配对表达技术筛选获得，具有独特的CDR区域，能特异性与SARS‑COV‑2结合并且可以有效中和目前...
- 邵一鸣王铮李丹苏俊威靳昌忠任莉
- 文献传递
- 具有广谱中和活性的新型冠状病毒受体结合结构域抗体的筛选和鉴定
- 2024年
- 目的从2名新型冠状病毒感染康复者体内分离针对新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coro‐navirus 2,SARS-CoV-2)受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)的特异性单克隆B细胞,并筛选出具有广谱中和活性的SARS-CoV-2 RBD中和抗体。方法以生物素化的RBD为分子探针,利用流式细胞仪对康复者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)进行单克隆B细胞分选,将获得的B细胞经裂解并完成逆转录后,采用随机引物对抗体的重链及轻链进行巢式PCR扩增,扩增产物分别克隆至对应的表达载体,随后相应配对的重轻链质粒共转染293F细胞中进行表达,利用Protein A柱纯化获得单克隆抗体。采用原始株(WT)假病毒开展中和实验挑选出半数抑制浓度(IC_(50))<0.1µg/mL的抗体,进一步在原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒以及目前的流行株XBB、BA.5、BF.7假病毒中进行中和能力及宽度测试。结果从2名康复者体内共获得21个RBD特异性单克隆B细胞,从中分离出13对抗体轻/重链,成功表达出9个抗体,P1-A1、P1-B6、P1-B9对原始株(WT)假病毒IC_(50)值均低于0.1µg/mL,其中P1-B6可以有效中和原始株(WT)、Beta株(B.1.351)和Delta株(B.1.617.2)活病毒,IC_(50)值均达到了0.01µg/mL。P1-B9可以有效中和原始株(WT)、Beta株(B.1.351)、Delta株(B.1.617.2)及Gamma株(P.1)活病毒,IC_(50)值分别为0.42、0.63、0.28、2.50µg/mL。此外,P1-B6对BA.5、BF.7假病毒具有较好的中和效果,IC_(50)值分别为0.06µg/mL和0.09µg/mL。结论SARS-CoV-2原始株感染可以诱导出具有广谱中和活性的抗体,且这些广谱中和抗体的产生不需要过高的体细胞高频突变率,获得的抗体可以作为诊断和预防新冠病毒感染的候选。
- 倪婉琦任莉靳昌忠杨馥榕申玉敏王硕胡彩琴郝彦玲刘颖朱彪邵一鸣李丹王铮
- 关键词：新型冠状病毒中和抗体
- HIV-1 RT连接区耐药突变位点T369V/I可以严重削弱病毒的复制适应性
- 目的：耐药HIV毒株的传播已引起公众关注，而复制适应性是衡量耐药病毒传播能力的重要参数。位于HIV-1 RT连接区的新型耐药突变位点T369V/I和A371V在接受抗病毒治疗(NNRTI)失败的人群中出现频率较高。我们将...
- 王铮张俊利李樊纪晓琳廖玲洁马丽英邢辉冯毅李丹邵一鸣
- 关键词：艾滋病病毒耐药
- HIV-1 CRF07_BC亚型gp140探针的构建及特异性B细胞分选与单克隆中和抗体制备
- 2020年
- 目的构建用于膜蛋白特异性B细胞分选的BC亚型gp140分子探针(CN54 gp140-Avi),从我国1型艾滋病病毒(HIV-1)感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中分选特异性记忆B细胞进而获得单克隆抗体,并鉴定其生物特性。方法利用聚合酶链反应(PCR)方法构建特异性分子探针(CN54 gp140-Avi),并进行生物素化,利用该探针分选特异性记忆B细胞克隆,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出IgG的轻重链可变区基因,并克隆入表达载体,共转染293F细胞后获得抗体,检测抗体的中和活性。结果成功构建出CN54 gp140-Avi生物素化分子探针,利用该分子探针从HIV-1 BC亚型感染者PBMCs中分离得到单克隆抗体CBJB363-B4,B4抗体重链来源于IGHV1-3*01F家系,轻链为Lambda链,属于IGLV1-40*01F家系,体细胞突变率均较低。B4抗体可以很好地结合CN54 gp140蛋白。该抗体可以有效中和MW965、X2278、398-F1毒株。结论成功制备出具有生物学活性的CN54 gp140-Avi探针,并获得具有中和活性的单克隆抗体。利用该分子探针,未来有望获得较多更强中和能力的抗体,为开发艾滋病抗体药物和基础疫苗学研究等领域提供新的工具和思路。
- 亢佳星李丹任莉郝彦玲王铮王静媛
- 关键词：分子探针中和活性
- 1例慢性HIV-1感染者体内CD4结合位点特异性记忆B细胞分选及抗体表达研究被引量：1
- 2016年
- 目的通过抗原特异性记忆B细胞(Memory B)分选、抗体基因克隆表达和鉴定方法,从艾滋病病毒1型(HIV-1)感染者中获得HIV-1中和抗体,并进一步探讨获得抗体的特征。方法通过检测血浆中和抗体活性和表位筛选,挑选出1例含有CD4结合位点(CD4bs)特异性抗体的慢性HIV-1感染者。采用一对含有/缺失CD4-bs的探针RSC3/ΔRSC3进行Memory B分选,获得抗体可变区基因后进行抗体的表达纯化,并检验所得抗体的结合能力和中和能力。结果从9×106外周血单核淋巴细胞(PBMCs)中分离得6个特异性Memory B。通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增出3对重链和轻链可变区基因,配对得到3个抗体,其中有一个抗体具有HIV-1CD4bs结合能力。中和实验表明,这个抗体能中和毒株SF162[50%抑制浓度(IC50=0.89μg/mL]。抗体可变区基因家系分析表明,该抗体属于IGHV1-18家系,重链可变区(VH)自体突变率为12%,低于广谱中和抗体VRC01VH的自体突变率(32%)。结论建立的单克隆特异性Memory B分选方法,可以获得有中和能力的抗体。该平台有希望获得具有我国自主知识产权的广谱中和抗体,并为开发抗体药物和设计新型免疫原提供技术支持。
- 李丹王铮任莉梁华洪坤学鞠斌王硕李亚峰邵一鸣
- 关键词：艾滋病病毒1型
- 人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体及应用
- 本发明公开了一种人源化高中和活性抗新型冠状病毒单克隆抗体，本发明的中和抗体通过单个B细胞流式分选‑抗体基因扩增配对表达技术筛选获得，具有独特的CDR区域，能特异性与SARS‑COV‑2结合并且可以有效中和目前多株国际流行...
- 邵一鸣李丹王铮靳昌忠苏俊威任莉
- 文献传递
