丁海涛
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 供职机构：中国极地研究中心更多>>
- 发文基金：上海市自然科学基金国家高技术研究发展计划国家公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程农业科学医药卫生更多>>
- 北冰洋海单胞菌β-D-半乳糖苷酶的异源表达及酶学特性研究被引量：1
- 2015年
- 初筛表明,一株分离自北极加拿大海盆海冰心芯样品的海单胞菌（Marinomonas sp.BSi20584）具有较高的β-D-半乳糖苷酶活性,为了研究清楚其酶学性质,将经hiTAIL-PCR扩增得到的β-D-半乳糖苷酶基因（galt）与pET-28a（＋）原核表达载体结合,转入大肠杆菌BL21（DE3）。经IPTG诱导后对重组β-D-半乳糖苷酶（GALT）的表达条件进行了优化,采用金属螯合亲和层析技术制备纯酶,并对重组GALT的酶学性质进行了研究。结果显示,重组酶的最适诱导温度为20℃,在IPTG浓度为0.07mmol/L时诱导22h后,酶活和产酶量达到最大值。GALT单体分子量约为6.6×104 g/mol,天然酶为同源三聚体。GALT最适作用温度为35℃,其热稳定性较好,在60℃处理5h后,仍可保持50%以上的相对活性。GALT的最适作用pH为9.0,在pH为6.0~11.0范围内比较稳定。GALT的最适NaCl浓度为0.5mol/L,对盐度具有较高的耐受性。Mg2＋、K＋、DTT和EDTA对酶活不具有显著影响,而Mn2＋、Fe2＋对酶活有促进作用,Zn2＋和L-谷胱甘肽对酶活有抑制作用。GALT对Galβ1-4GlcNAc具有水解作用,而对Galβ1-3GalNAc和Galβ1-3GlcNAc糖苷键型没有水解能力。本研究实现了海单胞菌属菌株的β-D-半乳糖苷酶基因在大肠杆菌系统中的高效表达,并系统研究了重组酶的酶学特性,为后续开展该酶的代谢适应性和潜在应用研究提供详细的酶学数据基础。
- 孙茜廖丽丁海涛刘双陈波
- 关键词：Β-D-半乳糖苷酶异源表达酶学特性
- 低温β-葡萄糖苷酶的挖掘及其在纤维二糖水解中的应用
- 目的：从嗜冷微生物中挖掘具有工业应用潜力的低温β-葡萄糖苷酶。方法：(1)酶基因克隆、表达及纯化：将来源于嗜冷菌Colwellia psychrerythraea 34H 中的GH1 家族β-葡萄糖苷酶(CpBGL)序列...
- 刘双丁海涛陈波
- 关键词：Β-葡萄糖苷酶低温活性酶学性质固定化
