房洁
- 作品数：4 被引量：3H指数：1
- 供职机构：泸州医学院附属医院更多>>
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- STAT3 siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3及其下游基因表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:观察RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9蛋白表达的影响及其相关性及对细胞生长的影响,探讨肺癌基因治疗的新途径。方法:采用化学合成法,合成针对STAT3基因不同位点设计的3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列(siRNA1-3)和1条带有荧光标记的应用STAT3-siRNA转染处理人肺腺癌细胞系A549,转染16h后荧光显微镜观察转染效率,RT-PCR检测STAT3基因表达的变化,蛋白免疫印迹法检测转染后A549细胞STAT3,CyclinD1,BAX,Bcl-2,Caspase-9蛋白表达,AM-BLUE检测A549细胞生长情况。结果:经RNA干扰能有效减低A549细胞STAT3mRNA表达水平(P<0.05),转染后A549细胞STAT3、CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05),而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高(P<0.05)。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.854,0.910,P<0.05);与BAX蛋白表达程负相关性(r=-0.848,P<0.05);与Caspase-9蛋白表达程无相关性(r=-0.787,P>0.05)。RNA干扰法沉默STAT3基因后,A549细胞增殖受到明显抑制。结论:STAT3-siRNA可有效抑制STAT3、CyclinD1、Bcl-2在人肺腺癌A549细胞中的表达,升高BAX、Caspase-9在人肺腺癌A549细胞中的表达,抑制A549细胞生长。
- 张洁罗麟洁徐丽娜房洁王鸿程
- 关键词：肺腺癌RNA干扰STAT3基因
- STAT3siRNA对肺腺癌A549细胞STAT3表达和细胞生物学行为的影响
- 2010年
- 目的:观察经RNA干扰沉默STAT3基因对人肺腺癌细胞A549生长和凋亡的影响。方法:设计并经化学合成了针对STAT3基因不同位点的3条小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列(STAT3siRNA1、STAT3siRNA2、STAT3siRNA3),在脂质体(LipofectamineTM2000)介导下转染人肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR法检测STAT3mRNA表达变化,筛选出抑制作用最强的STAT3-siRNA。免疫印迹法检测细胞STAT3、Cyclin D1、BAX、Bcl-2、Caspase-9蛋白表达。AM-BLUE法测定A549细胞体外增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:经RNA干扰能有效降低A549细胞STAT3mRNA表达水平(P<0.05),转染STAT3siRNA后,A549细胞STAT3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05),而BAX、Caspase-9蛋白的表达水平升高(P<0.05)。STAT3蛋白表达分别与CyclinD1、Bcl-2蛋白表达呈正相关(r=0.854,0.910,P<0.05);与BAX蛋白表达呈负相关性(r=-0.848,P<0.05);与Caspase-9蛋白表达呈无相关性(r=-0.787,P>0.05)。RNA干扰法沉默STAT3基因表达后,A549细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加。结论:STAT3siRNA可有效抑制A549细胞STAT3表达,抑制A549细胞生长并促进其凋亡。
- 张洁罗麟洁徐丽娜房洁王鸿程
- 关键词：RNA干扰STAT3凋亡
- RNA干扰技术沉默STAT3对肺腺癌A549细胞生长抑制的作用被引量：1
- 2010年
- 目的：利用RNAi技术研究STAT3对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用，同时研究STAT3对CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9的影响及其意义。方法-利用荧光定量PCR法检测后STAT3mRNA的表达，选取1条最能有效抑制STA鸭mRNA的siRNA进行后续实验；利用AM—BLUE法检测STAT3siRNA的抑制率；利用流式细胞术（FCM）检测STAT3沉默前后肺腺癌A549细胞周期分布状况和凋亡情况；利用Westernblot检测RNA干扰前后STAT3与CyclinD1、Bcl-2、BAX、Caspase-9的蛋白表达。结果：STAT3被沉默后，肺腺癌细胞A549生长被抑制（P〈0．05）；细胞处于G0／G1期（P〈0．05），而S，G2／M期的细胞相对减少（P〈0．05）；凋亡细胞明显增多（P〈0．05）；STAT3基因被沉默后，CyclinD1、Bcl-2蛋白的表达明显降低（P〈0．05），BAX、Caspase-9蛋白的表达增高（P〈0．05）。Person相关性分析显示，RNAi后人肺腺癌细胞A549中STAT3与CyclinDl、Bcl一2蛋白表达呈正相关（P〈0．05），STAT3与BAX蛋白表达呈负相关（P〈0．05），sTArl3与Caspase-9蛋白表达无相关性（P〉0．05）。结论：RNA干扰技术抑制A549细胞STAT3基因后，可阻断A549的细胞周期，使细胞阻滞在G0／G1期，无法进入到S、M期。同时可诱导肺腺癌A549细胞的凋亡。其机制可能为STAT3 siRNA抑制了STAT3基因的表达，从而使CyclinD1、Bcl-2蛋白表达降低，BAX蛋白表达增高。
- 罗麟洁徐丽娜张洁房洁王鸿程
- 关键词：RNA干扰STAT3基因
- 应用荧光定量PCR和Western-blot检测RNA干扰肺腺癌A549细胞STAT3基因表达水平的实验研究
- 2010年
- 目的:研究RNAi技术对人肺腺癌A549细胞系中STAT3基因的阻断效应,探讨STAT3在肺癌中的重要作用,为肺癌的基因治疗寻找新的靶点。方法:将化学合成siRNA用脂质体介导法转染肺腺癌A549细胞,应用荧光定量PCR法检测RNA干扰后STAT3 mRNA表达量,得出抑制率。应用Western-blot检测RNA干扰后对STAT3蛋白表达的影响。结果:成功将siRNA转染肺腺癌A549细胞,荧光定量PCR结果显示,在转染24h、48h、72h后,各干扰组与阴性组比较STAT3基因表达量明显下调(P<0.05),Western blot显示转染前后STAT3蛋白的表达水平明显受到抑制,干扰组与阴性组空白组相比具有显著差异(P<0.05),内参基因在各组的表达量无明显差异。结论:将合成的STAT3 siRNA能有效抑制STAT3蛋白的表达、降低STAT3 mRNA水平,对STAT3有高效和特异的沉默作用,以STAT3为靶点的RNA干扰技术可望成为肺癌基因治疗的新策略。
- 徐丽娜罗麟洁张洁房洁王鸿程
- 关键词：STAT3基因治疗
