李慧萍
- 作品数：11 被引量：17H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学文化科学生物学更多>>
- 内蒙古包头市1例绵羊肺腺瘤病的诊断与病毒env基因分析
- 2022年
- 绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)是由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的慢性、进行性、接触性绵羊肺肿瘤疾病。本研究通过尸体剖检、病理组织学、PCR、免疫组织化学和蛋白免疫印迹等方法确诊了1例绵羊肺腺瘤病,用病毒env基因测序结果进行基因结构和遗传进化分析。病理诊断结果显示,尸体剖检见肺肿大且质地坚实,肺表面有大量白色结节,肺叶上有数个有光泽的实变区,肺切面可见大面积实变区;光镜下可见肺泡Ⅱ型上皮细胞增生明显,呈立方状或柱状生长形成典型的“菜花样”腺瘤灶,肺泡腔内可见巨噬细胞。在病原(JSRV)的env和U3区分别设计两对引物的PCR检测结果显示,所扩增的目的条带大小与预期扩增片段大小一致,同时序列分析结果显示JSRV env与本实验室上传至GenBank中的参考序列JQ837489同源性为97.7%,JSRV env与JQ837489和新疆株KP691837聚为一支,亲缘关系较近;采用本实验室制备的JSRV的囊膜蛋白(Env)的多克隆抗体为一抗进行免疫组织化学检测,结果显示在增生的肺泡Ⅱ型上皮细胞中出现棕黄色深染的阳性信号;蛋白免疫印迹实验检测肺组织中JSRV Env相对表达量的结果显示,在80 kDa处表达特异性条带。研究结果表明,内蒙古包头地区已存在JSRV感染病例,这为今后OPA的诊断提供参考依据。
- 段续接杜晓悦张培王金玲丁玉林张良李慧萍刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒病理学PCR
- 内蒙古绵羊梅迪-维斯纳病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：3
- 2021年
- 为建立一种检测内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan荧光定量PCR方法,根据高度保守的gag基因序列设计特异性引物和探针,通过对反应条件和反应体系的优化,建立了快速检测MVV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果显示,扩增相关系数为0.999,对重组标准质粒的最低检测量为1.0×100 copies/μL,对羊的其他肺炎表现常见病原核酸无扩增反应;利用该方法对内蒙古地区12份疑似病例的肺组织进行检测,其中3份为MVV阳性。结果表明,本研究建立的实时荧光定量PCR方法在MVV的快速、准确诊断中具有良好的应用前景,也将为内蒙古地区防控梅迪-维斯纳病提供可靠的检测手段。
- 李慧萍张良徐斯日古楞王多智刘淑英
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白引起绵羊绒毛膜滋养层细胞的恶性转化被引量：5
- 2018年
- 为了明确绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(Env)的致瘤作用,将重组真核表达质粒pEGFP-C1/exJSRVenv和pEGFP-C1/enJSRV-env分别转染到永生化绵羊绒毛膜滋养层细胞(STCs)中,筛选最佳转染条件并利用软琼脂集落形成试验检测是否引起细胞的恶性转化;用平板克隆试验检测囊膜蛋白的表达对细胞增殖的影响。结果显示:在STCs中转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒后细胞在软琼脂中生长并产生集落,同时表现细胞接触抑制性消失;转染pEGFP-C1/enJSRV-env质粒的STCs则表现为不能在软琼脂中产生集落;平板克隆试验结果经SPSS软件分析,转染pEGFP-C1/exJSRV-env的绵羊绒毛膜滋养层细胞的克隆形成率显著高于转染pEGFP-C1/enJSRV-env细胞、pEGFP-C1空载体的细胞以及未转染的细胞(P<0.01)。exJSRV-Env的表达可以诱导STCs发生恶性转化以及细胞增殖。本试验可以为进一步探讨绵羊肺腺瘤逆转录病毒囊膜蛋白的功能提供理论依据,并为研究绵羊肺腺瘤病的致瘤机制提供新思路。
- 赵娟徐斯日古楞李慧萍刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白恶性转化细胞增殖
- 绵羊梅迪-维斯纳病毒CA蛋白可溶性表达、多克隆抗体制备及鉴定
- 2022年
- [目的]制备绵羊梅迪-维斯纳病毒(maedi-visna virus,MVV)衣壳蛋白(capsid protein,CA)多克隆抗体,并鉴定其特异性。[方法]根据MVV内蒙古分离株CA基因序列设计特异性引物,扩增CA基因,构建重组质粒;对CA重组蛋白进行原核表达及纯化,制备兔源MVV CA重组蛋白多克隆抗体,采用间接ELISA方法测定其抗体效价,利用Western blot和免疫组化方法对其进行特异性鉴定。[结果]成功构建MVV CA重组蛋白原核表达系统,纯化后的目的蛋白大小约27 kDa;间接ELISA方法测定制备的多克隆抗体效价为1∶8192;Western blot检测感染MVV绵羊的病肺组织,在25 kDa处出现特异性条带;免疫组化结果显示感染MVV绵羊的病肺中巨噬细胞的胞浆内有明显棕黄色阳性信号。[结论]利用获得的可溶性重组MVV CA蛋白制备的多克隆抗体具有较好特异性,可为MVV血清学诊断技术提供检测抗体。
- 李慧萍陈思旭张良史晓娜史晓娜
- 关键词：绵羊衣壳蛋白原核表达多克隆抗体
- 绵羊SUN2基因生物信息学分析及其在A549细胞中的表达被引量：1
- 2021年
- 本研究旨在克隆绵羊SUN2(Sad1 and UNC84 domain containing 2)基因并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测其在A549细胞中的表达。根据绵羊SUN2基因序列(GenBank登录号:XM_015095026.2)设计特异性引物,应用RT-PCR方法扩增并克隆绵羊SUN2基因CDS序列,测序鉴定后对其进行生物信息学分析,并构建pEGFP-C1-SUN2重组质粒。利用脂质体转染方法将pEGFP-C1-SUN2重组质粒转染至A549细胞并检测其表达。结果显示,绵羊SUN2基因CDS区序列全长2187 bp,编码728个氨基酸,理论分子质量为81.06 ku,分子式为C_(3593)H_(5639)N_(1031)O_(1110)S_(14),等电点(pI)为6.20,总原子数为11387,不稳定系数为56.88,属于不稳定蛋白。绵羊SUN2基因序列与山羊、牛、猪、马、家犬、大鼠、小鼠及人的相似性分别为98.9%、97.2%、91.6%、90.6%、87.1%、82.4%、82.1%和86.1%,不同物种间基因相似性较高,进化过程中相对保守。系统进化树分析表明,绵羊SUN2基因与山羊、牛、猪、马和家犬等哺乳动物的遗传距离相对较近,与鸡的遗传距离较远。结构域及跨膜结构域预测显示,绵羊SUN2蛋白含有1个高度保守的SUN结构域,且存在跨膜结构域。信号肽预测显示其不存在信号肽位点,疏水性分析为亲水性蛋白,氨基酸序列二级结构主要为α-螺旋(51.65%),其余为无规则卷曲(31.46%)、延伸链(12.36%)和β-转角(4.53%)。试验成功构建了绵羊SUN2基因真核表达载体pEGFP-C1-SUN2,将其转染至A549细胞并检测到蛋白表达。本试验结果为绵羊SUN2基因功能的研究提供了参考依据,为后续探究SUN2基因在绵羊肺腺瘤病中的作用奠定了基础。
- 杜晓悦张良李慧萍刘淑英
- 关键词：绵羊生物信息学分析转染
- 磷酸二酯酶在金黄色葡萄球菌性乳腺炎中的表达分析
- 2024年
- 为了探究磷酸二酯酶(PDEs)家族成员表达与金黄色葡萄球菌性乳腺炎的关系,试验采用PCR技术检测了PDE家族除PDE6、PDE10和PDE11基因外的各亚型在奶牛乳腺上皮细胞(bMECs)、小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)及小鼠乳腺(mMG)中的表达情况,实时荧光定量PCR技术检测了金黄色葡萄球菌刺激下这些PDE家族亚型的表达差异及PDE4抑制剂RO-20-1724对金黄色葡萄球菌诱导的炎症因子表达的影响。结果表明:在bMECs中,PDE3B、PDE5A、PDE8B、PDE9A基因呈高表达;在mMECs中,PDE2A基因呈高表达;而在mMG中,PDE2A、PDE3A基因呈高表达。金黄色葡萄球菌刺激8 h后bMECs中PDE1C、PDE4A、PDE4B、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A基因的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1B、PDE7A、PDE7B基因相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01);mMECs中PDE1B、PDE1C、PDE2A、PDE3A、PDE4A、PDE4C、PDE4D、PDE5A基因相对表达量极显著升高(P<0.01),而PDE7A基因相对表达量极显著降低(P<0.01);mMG中PDE1B、PDE3A、PDE4C、PDE4D、PDE5A、PDE8A、PDE8B基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),而PDE1C、PDE4B、PDE7B基因相对表达量极显著降低(P<0.01)。加入PDE4抑制剂RO-20-1724孵育8 h后可极显著降低金黄色葡萄球菌诱导的mMECs中IL-1β基因的相对表达量。说明乳腺上皮细胞中PDE家族的一些亚型表达存在种属差异,金黄色葡萄球菌感染后可引起不同PDE亚型表达发生改变。
- 张良万凯陈灰李慧萍刘淑英
- 关键词：乳腺炎磷酸二酯酶MRNA表达上皮细胞
- 动物生理学课程思政元素探索——以内蒙古农业大学为例被引量：3
- 2022年
- 本文以内蒙古农业大学为例,基于动物生理学的课程特点,通过对理论、实验教学内容和教学过程的分析和延展,探索和挖掘了10个思政元素。通过课程设计将思政元素贯穿于动物生理学的日常教学中,并对学生的满意度进行调查。结果显示,学生对10个元素的完全满意度平均为81.6%。本文初步挖掘动物生理学课程中的思政元素,为建设动物生理学的课程思政体系提供一定参考。
- 李慧萍张良徐斯日古楞刘淑英
- 关键词：动物生理学教学设计
- 自然感染绵羊肺腺瘤病毒病肺组织中凋亡相关因子的表达分析
- 2023年
- 绵羊肺腺瘤(ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是一种由绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)引起的慢性、接触传染性肺脏肿瘤疾病。为了探究细胞凋亡在OPA发展过程中的作用,本研究利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹等方法检测了凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3及其对应的凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3在健康和自然感染JSRV绵羊肺组织中的表达情况。结果显示:与对照组相比,OPA肺组织中Bcl-2基因和蛋白表达量均显著上调,而Bax和Caspase-3基因和蛋白表达量均显著下调。此外,免疫组织化学显示,Bcl-2、Bax、Caspase-3主要表达于腺瘤灶内增生的Ⅱ型肺泡上皮细胞中。结果表明,细胞凋亡在OPA肺组织中的活动受到抑制,提示绵羊肺腺瘤病毒可能通过调节细胞凋亡活动影响OPA的发生发展。
- 张良黄家荣孙志伟李慧萍刘淑英
- 关键词：绵羊绵羊肺腺瘤病毒BCL-2
- 内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒全基因组序列的测定与分析被引量：3
- 2021年
- 为了解内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒(MVV)的分子结构特征和遗传变异情况,本研究利用Illumina Hiseq 4000二代测序技术对MVV阳性绵羊病肺组织进行病毒全基因组测定,并对全基因组特征、gag和env及其编码的氨基酸序列进行系统进化分析。结果显示,获得全长9193 bp的MVV全基因组序列,命名为NM1111,并上传GenBank获得基因登录号MW248464;全基因组、gag和env核苷酸序列与参考株的相应核苷酸序列的同源性分别为75.8%~81.4%、77.1%~86.8%和67.7%~75.5%;基于gag序列的系统进化分析,NM1111与A2型MVV聚为一支,属于A2型;Gag蛋白的主要同源区(MHR)存在D^(296)E的突变,Env蛋白变异程度较大,表面蛋白V4区存在氨基酸插入,SU5抗原表位在氨基端有一个完全保守的基序(VRAYTYGV),在羧基端有一个高度可变的基序。本研究提供了中国地区首个绵羊MVV完整序列,为中国地区MVV分子生物学特性研究提供基础参考。
- 赵玲王振玲史晓娜段续接张良李慧萍李慧萍
- 关键词：GAGENV
- 蒙古绵羊内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因组序列测定与囊膜蛋白的表达分析被引量：2
- 2018年
- 为了克隆内源性绵羊肺腺瘤病毒（en JSRV）全基因组序列,针对env基因分析其结构并构建原核表达质粒,并诱导囊膜蛋白表达。根据Gen Bank中提供的en JSRV DNA序列（AF152615）设计引物,采用PCR方法进行序列扩增并克隆,并对克隆结果进行测序和生物信息学分析。然后将添加了Bam HⅠ和HindⅢ酶切位点的env基因片段克隆至p ET-32a载体构建表达质粒,并将质粒转化至大肠杆菌（E.coli）BL21（DE3）中诱导囊膜蛋白表达,最后利用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测、鉴定囊膜蛋白。结果显示,en JSRV序列长7 382 bp,其中env基因片段长1 836 bp,en JSRV与en JSRV-23的同源性为97.3%。PSORTⅡ及DNAStar等软件预测分析en JSRV囊膜蛋白主要定位于细胞质、线粒体内膜等位置,且存在多个抗原表位。在37℃条件下,0.5 mmol/L IPTG诱导转入p ET32-Env的E.coli BL21（DE3）,8 h后可获得分子质量约为89 ku的以包涵体形式存在的囊膜蛋白。本试验测定了en JSRV全基因序列,并成功构建了表达囊膜蛋白的p ET32a-Env载体,为今后制备en JSRV-Env抗体奠定了试验基础,同时为囊膜蛋白生物学功能的深入探讨提供了理论参考。
- 吴丹丹徐斯日古楞李慧萍鲁凤霞刘淑英
- 关键词：内源性绵羊肺腺瘤病毒全基因序列生物信息学分析
