毛岩
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- DNAJB11促进卵巢颗粒细胞中FOXL2诱导的雌激素合成被引量：1
- 2017年
- 目的转录因子FOXL2是颗粒细胞雌激素合成与颗粒细胞功能维持的关键调控分子,但目前尚不清楚FOXL2蛋白的表达及功能调控机制。文章旨在鉴定调控FOXL2蛋白功能的新分子。方法通过分离小鼠卵巢组织进行免疫组化染色检测DNAJB11的表达定位情况,含有全长DNAJB11基因c DNA序列(Ad-DNAJB11-Flag和Ad-Flag-DNAJB11)的腺病毒载体按Ad Max系统(Microbix)方法进行病毒颗粒的包装。按NE-PERTMNuclear and Cytoplasmic抽提试剂盒所述方法进行细胞核质蛋白的分离。KGN细胞感染不同浓度腺病毒(Ad-DNAJB11和Ad-Lac Z),测量波长450 nm的吸光度值,进行细胞增殖检测。采用Access Immunoassay System 2化学发光自动检测系统(Beckman Coulter)检测细胞培养上清中雌二醇的浓度。采用PCR方法扩增含有人FOXL2和人DNAJB 11基因的全长c DNA序列,并分别亚克隆至p CS2-6XMT载体(Myc-FOXL2)和p FLAG-CMV2载体(Flag-DNAJB11)中。采用Lipofectamine 2000转染试剂将Myc-FOXL2和Flag-DNAJB11表达质粒瞬时转染至细胞HEK-293细胞中。收集HEK-293细胞或FSH处理的KGN细胞的裂解液,进行FOXL2和DNAJB11的免疫共沉淀实验。通过细胞免疫荧光染色和荧光素酶报告基因等实验检测内质网Hsp40/Dna J家族成员DNAJB11调控颗粒细胞的雌激素水平。结果 Western blot表明DNAJB11蛋白在人卵癌颗粒细胞KGN、小鼠原代卵巢颗粒细胞m GC以及小鼠卵巢中高表达,免疫组化染色结果亦证实DNAJB11蛋白表达于小鼠卵巢的卵母细胞质中,并在窦前卵泡、排卵前卵泡的颗粒细胞中持续表达。免疫荧光染色和Western blot分析亦表明外源性激素FSH可以诱导KGN细胞中内源性DNAJB11蛋白从内质网转移到细胞核中。腺病毒介导的DNAJB11-Flag过表达定位于细胞内质网中,但当Flag标签阻断DNAJB11信号肽功能时,外源FlagDNAJB11过表达则定位于颗粒细胞的细胞核,内质网中DNAJB11-Flag蛋白高表达以浓度依赖的方式减少KGN细胞中雌
- 毛岩闫蔷张春雪甄鑫曹瑞兵颜桂军
- 关键词：卵巢颗粒细胞
- 日本脑炎病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及特性分析被引量：3
- 2016年
- 将日本脑炎病毒(JEV)囊膜蛋白Cap-ED3重组蛋白免疫BALB/c雌鼠,应用细胞融合技术制备单克隆抗体,经ELISA筛选获得4株稳定分泌识别JEV ED3蛋白单抗的杂交瘤细胞,命名为1B10、3F5、4H1和5F9。这4株单抗在Western blot和间接免疫荧光试验中均能特异识别JEV NJ2008株。制备4株单抗的小鼠腹水,5F9效价最高,为1∶409 600。空斑减少中和试验结果表明:4株单抗均没有中和活性。相加ELISA试验表明:4株单抗中3F5和4H1识别相同抗原表位,1B10、5F9分别识别其他的抗原表位,且差异较大。应用鸭坦布苏病毒(DTMUV)特异性抗原进行ELISA检测的结果表明:5F9识别的表位与DTMUV有交叉,其他3株识别的抗原表位与DTMUV无交叉。本研究获得了3株JEV囊膜蛋白特异性的单抗和1株识别JEV和DTMUV交叉抗原表位的单抗,为JEV抗原和抗体检测试剂盒的研制提供了良好的物质基础。
- 倪慧王钰毛岩陈溥言杨梅曹瑞兵
- 关键词：日本脑炎病毒囊膜蛋白单克隆抗体
- 日本脑炎病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及特性分析
- 流行性乙型脑炎是一种重要的虫媒性人兽共患病,该病的病原为日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV).该病自1934年在日本首次发现,中国、韩国、印度等多国相继出现了对JEV的报道.中国...
- 倪慧王钰毛岩陈溥言杨梅曹瑞兵
- 关键词：流行性乙型脑炎囊膜蛋白细胞融合
