江宇峰
- 作品数:4 被引量:20H指数:2
- 供职机构:安徽医科大学更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- MAPK抑制因子对HSC中Smad2/3磷酸化及Smad4核转位的影响被引量:1
- 2015年
- 目的探究3种丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制因子对转化生长因子-β(TGF-β)活化的大鼠肝星状细胞(HSC)中Smad2/3磷酸化及Smad4核转位的影响。方法采用Ⅳ型胶原酶和链酶蛋白酶原位肝灌流法分离正常大鼠HSC并传代培养,分别用细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38抑制因子(PD98059、SP600125、SB203580)与HSC共同培养,再加入TGF-β1活化细胞,采用免疫沉淀和Western blot法检测p Smad2C、p Smad2L、p Smad3L蛋白表达;采用细胞免疫荧光法检测Smad4蛋白表达及细胞内定位情况。结果 Western blot显示静息状态下HSC几乎不表达p Smad2C而低表达p Smad2L、p Smad3L,TGF-β1刺激后显著上调上述磷酸化蛋白表达,p38抑制因子(1、3μmol/L)、ERK抑制因子(1μmol/L)对Smad2C、Smad2L、Smad3L磷酸化无显著影响;p38抑制因子(10μmol/L)降低了p Smad3L蛋白表达;ERK抑制因子(3、10μmol/L)降低了p Smad2C蛋白表达;JNK抑制因子(1、3、10μmol/L)减少了p Smad2C、p Smad2L、p Smad3L蛋白表达。TGF-β1刺激可明显诱导Smad4核转位,而3种MAPK抑制因子不同程度地抑制TGF-β1诱导的Smad4转位入核。结论在HSC细胞中TGF-β1可能通过活化JNK通路促进Smad2/3磷酸化,活化ERK、JNK、p38通路促进Smad4核转位。
- 江宇峰伍超吴佳俊王极宇马成骁陈帆吴德卫杨明郑凌云杨雁
- 关键词:大鼠肝星状细胞SMAD2SMAD4
- 积雪苷霜软膏对兔耳增生性瘢痕组织中Smad4蛋白表达的影响被引量:15
- 2015年
- 目的探讨积雪苷霜软膏对兔耳增生性瘢痕组织中Smad4蛋白表达的影响。方法新西兰大耳白兔18只,随机分为正常对照组、模型组、积雪苷霜软膏组。模型组和积雪苷霜软膏组建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,术后21 d,积雪苷霜软膏组瘢痕局部涂抹积雪苷霜软膏,每天2次,连续用药28 d;正常组和模型组涂抹软膏基质。每周观察并拍照记录瘢痕的生长情况,于术后49 d处死动物,进行病理、羟脯氨酸和Smad4蛋白检测。结果模型组瘢痕以较快速度生长,积雪苷霜软膏组,瘢痕生长显著被抑制。病理检测显示,模型组增生性瘢痕组织纤维化明显,而积雪苷治疗可显著改善纤维化。羟脯氨酸定量显示,增生性瘢痕组织中羟脯氨酸(Hyp)含量显著升高(P<0.01),而积雪苷治疗显著降低瘢痕组织中Hyp水平(P<0.01)。免疫印迹结果显示增生性瘢痕组织中Smad4蛋白水平显著上调,而积雪苷治疗显著降低Smad4蛋白表达(P<0.01)。结论积雪苷霜抗增生性瘢痕作用可能与调控Smad4蛋白表达有关。
- 江宇峰伍超吴佳俊王极宇庄文豪马腾飞江洁美杨雁
- 关键词:积雪苷霜软膏增生性瘢痕纤维化SMAD4
- Smad3 WT、Smad3 EPSM、Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株的建立与功能研究被引量:4
- 2016年
- 目的建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,探究单纯转染3种质粒及选择性上调p Smad3C、p Smad3L对HepG2细胞功能的影响。方法采用脂质体转染试剂盒将Smad3 WT(野生型Smad3基因)、Smad3 EPSM(Smad3L区磷酸化位点突变)、Smad3 3S-A(Smad3C区磷酸化位点突变)3种质粒转染至HepG2细胞中,经G418筛选阳性细胞,Western blot法鉴定3种质粒稳转细胞株的转染效率。MTT法检测细胞增殖情况。流式细胞术检测细胞周期及凋亡。结果 Western blot结果显示,转染相应质粒的HepG2细胞高表达目的蛋白,提示稳转细胞株构建成功。MTT结果显示,在缺乏TGF-β_1刺激情况下,转染3种质粒后对HepG2细胞增殖几乎没有影响,TGF-β_1能够诱导稳转细胞株的细胞增殖,且转染Smad3 EPSM质粒的HepG2细胞,较未转染、转染Smad3 WT或Smad3 3S-A质粒的HepG2细胞对TGF-β_1诱导的细胞增殖反应减弱。细胞周期分析显示,TGF-β_1刺激下,转染Smad3 EPSM质粒组G_0/G_1期细胞数明显增多,而转染Smad3 3S-A质粒组G_2/M期细胞数增加明显。细胞凋亡检测显示,TGF-β_1刺激下,较未转染和转染Smad3 WT质粒组,转染Smad3 EPSM质粒组细胞凋亡率明显增加,而转染Smad3 3S-A质粒组细胞凋亡率明显降低。结论成功建立Smad3 WT、Smad3 EPSM及Smad3 3S-A 3种质粒稳转HepG2细胞株,为进一步探讨开发能够经由调控p Smad3C、p Smad3L的药物提供一定的基础。
- 吴佳俊江宇峰伍超马滢陈宁陶李芬芳张雨露赵享龙杨雁
- 关键词:SMAD3SMAD3SMAD3HEPG2细胞稳定转染
- Smad3 WT,Smad3 EPSM,Smad3 3S-A三种质粒稳转HepG2细胞株的建立与功能研究以及复方芪参提取物的干预
- 目的:采用脂质体转染法,构建Smad3 WT, Smad3 EPSM及Smad3 3S-A三种质粒稳转HepG2细胞株,探究:1.转染三种质粒本身对HepG2细胞形态及增殖的影响;2.选择性上调pSmad3C/pSmad...
- 江宇峰
- 关键词:HEPG2细胞稳定转染
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