本试验旨在探讨非酯化脂肪酸（Nonestesterified fatty acid,NEFAs）对体外原代培养犊牛肝细胞线粒体功能以及罗格列酮对NEFAs诱导的线粒体功能紊乱的影响。体外添加NEFAs（1.8mmol/L）处理犊牛原代肝细胞不同时间,运用Western blot和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测线粒体呼吸链复合体IV（COX IV）蛋白水平及mRNA水平的影响。另外选取细胞,罗格列酮（10nmol/L）预处理细胞24h后添加NEFAs（1.8mmol/L）处理9h。运用Western blot和qRT-PCR方法检测PGC-1α、Mfn-2的蛋白表达水平及COX IV mRNA表达水平。结果显示,随着NEFAs作用时间的增加,与0h组相比,NEFAs处理5h以上时COX IV蛋白表达水平极显著降低（P〈0.01）,处理7-12h时COX IV mRNA表达水平呈显著降低（P〈0.05）。添加罗格列酮后,罗格列酮可极显著增加COX IV mRNA水平,PGC-1α、Mfn-2蛋白表达水平（P〈0.01）。结果表明,NEFAs可诱导犊牛原代肝细胞发生线粒体功能紊乱,罗格列酮可缓解由NEFAs诱导的犊牛原代肝细胞线粒体功能紊乱。
为探讨组胺对体外原代培养犊牛瘤胃上皮细胞炎性因子表达及含量的影响。体外培养犊牛瘤胃上皮细胞,在不同p H的培养液(p H 5.5和p H 7.2)中添加不同浓度的组胺(0,0.5,2.5,12.5,62.5μmol/L)。运用实时荧光定量PCR和ELISA方法,检测组胺对瘤胃上皮细胞炎性因子白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)m RNA表达及其含量的影响。结果表明:p H 5.5的培养液组,TNF-α、IL-1β和IL-6的m RNA表达水平均显著或极显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);TNF-α、IL-6和IL-1β的含量在2.5,12.5,62.5μmol/L组胺处理组显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。p H 7.2的培养液组,TNF-α和IL-6 m RNA表达水平在2.5,12.5μmol/L组胺处理组显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),IL-1βm RNA表达水平在2.5,12.5,62.5μmol/L组显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);TNF-α含量在62.5μmol/L组极显著高于对照组(P<0.01),IL-6在2.5,12.5,62.5μmol/L组显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),IL-1β在12.5,62.5μmol/L组极显著高于对照组(P<0.01)。在组胺各浓度组,TNF-α、IL-6和IL-1βm RNA表达水平在p H5.5条件下均显著高于p H 7.2(P<0.05,P<0.01),但含量差异不显著。低p H条件下,高浓度组胺能增加犊牛瘤胃上皮细胞炎性反应。
