公共文化服务平台

共 6 条记录，以下是 1-6

全选清除导出

排序方式：

抗CD20嵌合抗体的构建与表达被引量：7: 2006年; 目的构建抗CD20嵌合抗体的真核表达载体并实现在真核细胞中的表达。方法采用RT-PCR,从分泌鼠源抗人CD20抗体的杂交瘤细胞系1-28中钓取其轻、重链基因,连接至T载体,进行序列测定。还原SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离抗CD20单克隆抗体(mAb)1-28的轻、重链蛋白,切取轻链及重链条带,质谱测定氨基酸序列,Biolynx和pepeseq软件分析可信度。对比所测DNA序列与蛋白序列,确定所钓取基因的正确性。将mAb1-28轻重链可变区基因,连接至表达载体pCMV-VH和pCMV-VL,构建成嵌合抗体C1-28的轻链真核表达载体C1-28L及重链真核表达载体C1-28H。PCR、酶切及序列测定以确定连入基因的正确性。脂质体介导法将嵌合抗体的轻重链真核表达载体共转染入293T细胞,RT-PCR检测mRNA水平的表达,夹心ELISA法检测蛋白表达量,Westernblot检测目的蛋白的大小。结果钓取到mAb1-28基因。mAb部分蛋白序列测定结果与根据所钓取基因推出的蛋白序列相对应。成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达,表达量可达257mg/L,其相对分子质量(Mr)与人IgG的Mr一致。结论为后续研究嵌合抗CD20抗体对非霍奇金淋巴瘤的治疗提供了一定的依据。; 王玉刚黄英谷欣于鸣冯健男孙瑛勋黎燕沈倍奋; 关键词：杂交瘤质谱分析嵌合抗体

位点特异性重组技术研究进展被引量：7: 2005年; 位点特异性重组技术是现代生命科学中研究基因敲除与靶向整合的工具。它的应用实现了外源基因可预测、可重复的高效表达;对于利用模型动物进行基因分析更是具有划时代的意义;在转基因植物中的运用价值同样不可忽视。; 谷欣黎燕; 关键词：位点特异性重组重组酶

电转染哺乳类动物细胞DG44-CHO的方法探讨被引量：3: 2008年; 目的:建立并验证DG44-CHO细胞快速、无血清培养体系的转染方法。方法:将绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-N1电转入DG44-CHO细胞,用流式细胞仪检测绿色荧光蛋白的表达量;将不同重组蛋白表达质粒C1-28/GL1/pCMV163、C1-28/GL2/pCMV163和TmHL/pCMV163分别电转入DG44-CHO细胞,ELISA检测其培养上清中相应重组蛋白的表达。结果:280 V电压电击20 ms、质粒用量为20μg时,转染细胞中绿色荧光蛋白的表达量最高;同样在该条件下,培养上清中重组蛋白浓度最高。结论:上述电转染条件具有一定的适用性。; 谷欣黎燕; 关键词：电转染重组蛋白

DR5胞外段基因的表达及功能初步鉴定被引量：1: 2007年; 目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白。方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEM(-T Easy载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30 a中,在E.coliBL21(DE3)实现蛋白表达。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。ELISA法分析其与抗DR5单克隆抗体(mAb)结合能力。结果:克隆到人DR5基因的胞外段基因,测序结果和报道的一致;构建了人DR5胞外段基因的原核表达载体并实现在E.coliBL21(DE3)中大量表达;SDS-PAGE表明所表达蛋白与预期蛋白的相对分子质量(Mr)一致;Western blot及ELISA的结果表明该蛋白能与抗DR5抗体反应,竞争阻断试验表明DR5胞外段可阻断TRAIL对Jurkat细胞生长的抑制。结论:成功地制备了具有生物活性的DR5胞外区,为后续研究打下了基础。; 陈居杲王玉刚赵昆朋谷欣黎燕马远方沈倍奋; 关键词：RT-PCR 原核表达

新型抗CD20嵌合抗体TGLA体内、外活性的研究: ＜正＞目的:针对B细胞非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma,NHL）的表面抗原CD20分子,已有三种抗体成功应用于临床,分别是美罗华（Rituximab）、Zevalin（放射性核素90Y与美罗华...; 耿树生孙瑛勋谷欣王玉刚冯健男黄英沈倍奋黎燕; 关键词：CD20 抗CD20抗体 B淋巴细胞瘤肿瘤模型; 文献传递

抗人BlyS嵌合抗体的研制及功能鉴定: 2007年; 目的:在具有中和功能的母本抗体基础上,进行人源化改造,获得具有相同功能的嵌合抗体。方法:本研究以一株具有中和活性的抗人BlyS鼠单抗(B20)为母本,将抗人BlyS鼠单抗B20的轻、重链可变区基因分别插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核表达载体中,构建了人-鼠嵌合抗体表达载体,转染真核细胞,通过ELISA、RT-PCR、免疫印迹、体外中和实验分别对嵌合抗体(CB20)进行检测。结果:RT-PCR结果显示,转染后细胞系有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录;ELISA、免疫印迹实验鉴定表明,该嵌合抗体与人BlyS特异性结合;体外中和实验表明,此抗体能中和BlyS对B淋巴细胞促增殖效应。结论:成功地构建人-鼠嵌合抗体CB20。; 林周程建贞谷欣冯健男黎燕沈倍奋; 关键词：BLYS 真核表达中和抗体

全选清除导出

共1页<1>

谷欣