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Botrytis cinerea蛋白磷酸酶的分离纯化及酶学性质被引量：1: 2011年; 【目的】植物真菌病害灰霉病是由灰葡萄孢菌（Uotrytis cinerea）侵染引起，它在世界范围内造成了严重的经济损失。B．cinerea易对化学药剂产生抗性，寻找更多对灰霉病有特效的生物农药是目前急需解决的难题。鉴于顺丁烯二酸酐类化合物良好的生物活性，研究此类化合物对蛋白磷酸酶的抑制效果。【方法】将发酵优化后的B．cinerea菌体经超声破碎、硫酸铵分级盐析、透析浓缩、DEAE—Sepharase离子交换层析等步骤分离纯化，并以SDS—PAGE验证酶纯度。考察所得纯酶的酶学性质，研究顺丁烯二酸酐类化合物对B．cinerea蛋白磷酸酶的抑制作用。【结果】经分离纯化后，该酶SDS—PAGE为单一条带，提纯倍数达30．79倍，酶活回收率为39．26％。酶学特性研究结果表明其最适反应pH值为4．0，最适反应温度为37℃。该酶在pH值3．0～6．0，50℃以下内稳定。考察金属离子对B．cinerea蛋白磷酸酶酶活的影响，发现Mg2＋、Fe2＋、Ca2＋、Ba2＋能提高该酶活性，Zn2＋Cu2＋、Mn2＋对酶活有抑制作用。以p-NPP为底物的酶动力学参数Vmax和Km分别为12．71mmol／（L·min）与12．84mmol／L。4种顺丁烯二酸酐类化合物对B．cinerea蛋白磷酸酶的抑制作用由大到小排名为苯基马来酸酐、4,5-二氯邻苯二甲酸酐、二甲基马来酸酐、顺丁烯二酸酐。【结论】此酶分离纯化步骤少，减少了酶活损失。以纯化的蛋白磷酸酶为靶标，顺丁烯二酸酐类化合物对酶活抑制效果良好，可研究抑制灰霉病机理及作为生物源农药开发。; 方夏李琳韩君芳吴芳毛雪萍陈小龙; 关键词：BOTRYTIS CINEREA 蛋白磷酸酶分离纯化

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吴芳

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