张兴旺
- 作品数：10 被引量：44H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划甘肃省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 细菌内同源重组法制备FMDV聚蛋白编码基因重组腺病毒被引量：5
- 2006年
- 采用PCR方法从重组质粒pMD18_T/PP中扩增出FMDV的聚蛋白(PP)编码基因,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成重组穿梭质粒rpAd_CMV/PP;将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体通过在大肠杆菌内质粒间同源重组获得重组腺病毒质粒rpAd/PP。将腺病毒载体线性化后用脂质体介导转染293细胞从而获得含有口蹄疫病毒PP编码基因的重组腺病毒。通过倒置显微镜观测,可见明显的细胞病变,利用荧光显微镜可观测到报告基因绿色荧光蛋白的表达,并在电镜下观察到FMDV的空衣壳。结果证明已成功获得了含有口蹄疫病毒PP编码基因的重组腺病毒rAd/PP,并成功表达组装FMDV空衣壳,为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。
- 张兴旺王勤柳纪省殷相平李志勇
- 关键词：FMDV编码基因同源重组重组腺病毒
- 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法
- 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法，其特征在于它包括以下步骤：(1)制作抗原剂，将制苗毒(菌)株用敏感细胞或培养基复制，灭活后，获得抗原；并将所述的抗原制成抗原剂；(2)制作植物油佐剂；(3)混匀，将所述...
- 柳纪省殷相平黄银君白银梅牟克斌李宝玉杨联李志勇王辉兰喜张兴旺
- 文献传递
- 一种利用腺病毒载体表达狂犬病病毒双基因制备狂犬病活载体疫苗的方法
- 一种利用腺病毒载体表达狂犬病病毒双基因制备狂犬病活载体疫苗的方法，包括如下过程：一、制备目的基因：设计引物，扩增出狂犬病病毒(rabies virus，RV)抗原蛋白G基因与N基因；二、构建腺病毒穿梭载体：将抗原蛋白G基...
- 柳纪省殷相平白银梅胡永浩李志勇张兴旺王辉兰喜李宝玉刘兆弼
- 文献传递
- 红茂草注射液对免疫低下小鼠免疫功能的影响被引量：33
- 2006年
- 研究红茂草注射液对小鼠实验性免疫功能低下的影响．以地塞米松(DEX,0．8 mg／kg)造成免疫功能低下的动物模型,用3个不同质量分数的红茂草注射液(50,100,200 mg／(kg·d)×4 d)分别予以治疗后,采用碳粒廓清法、溶血素测定法、器官指数测定等有关免疫指标．红茂草注射液可使小鼠的廓清指数K值、吞噬指数α值、器官指数、血清溶血素及溶菌酶活力增高,尤以100 mg／kg剂量组效果显著．红茂草注射液对实验性免疫功能低下小鼠有明显的免疫增强作用,这为其应用于临床治疗提供了一定的实验依据．
- 张兴旺何莉莉王勤
- 关键词：地塞米松免疫功能
- 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法
- 一种利用植物油佐剂制备动物病毒性、细菌性疫苗的方法，其特征在于它包括以下步骤：(1)制作抗原剂，将制苗毒(菌)株用敏感细胞或培养基复制，灭活后，获得抗原；并将所述的抗原制成抗原剂；(2)制作植物油佐剂；(3)混匀，将所述...
- 柳纪省殷相平黄银君白银梅牟克斌李宝玉杨联李志勇王辉兰喜张兴旺
- 文献传递
- 口蹄疫病毒P1+3CD基因重组腺病毒穿梭载体的构建
- 通过RT-PCR方法获得含有口蹄疫毒的P1、3CD编码区的目的基因.将P1基因经Bg1Ⅱ和XhoI,3CD基因经XhoI和XhaI双酶切后与经Bg1Ⅱ和XhoI双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接.通过...
- 李志勇柳纪省张兴旺王辉刘春燕兰喜程杰殷相平李宝玉
- 关键词：FMDV口蹄疫病毒酶切鉴定
- 文献传递
- 狂犬病的分子生物学诊断被引量：3
- 2004年
- 从攻击咬伤人并致其死亡的犬脑组织中提取总RNA ,用特异性引物通过反转录聚合酶链反应 (RT PCR)获得了长度约为 14 2 3bp的核酸片段 ,与预期的片段大小相符 ;将扩增产物连接到pMD 18 T 载体中 ,转化大肠埃希氏菌JM 10 9,筛选氨苄青霉素抗性菌落 ,提取质粒 ,经酶切鉴定、PCR分析及测序 ,证明所克隆的 14 2 3bp片段含有完整的狂犬病病毒N基因 ,与国外参考毒株的序列相比同源性较高 ,从而做出正确的诊断。试验表明 ,用RT PCR技术检测狂犬病病毒灵敏度高、特异性强 。
- 殷相平柳纪省胡永浩张兴旺李志勇王辉李宝玉兰喜
- 关键词：狂犬病分子生物学狂犬病病毒人畜共患急性传染病
- 一种利用腺病毒载体表达狂犬病病毒双基因制备狂犬病活载体疫苗的方法
- 一种利用腺病毒载体表达狂犬病病毒双基因制备狂犬病活载体疫苗的方法，包括如下过程：一、制备目的基因：设计引物，扩增出狂犬病病毒(rabies virus，RV)抗原蛋白G基因与N基因；二、构建腺病毒穿梭载体：将抗原蛋白G基...
- 柳纪省殷相平白银梅胡永浩李志勇张兴旺王辉兰喜李宝玉刘兆弼
- 文献传递
- FMDV全ORF编码基因的克隆及其腺病毒穿梭质粒的构建被引量：2
- 2006年
- 为研制FMD复制缺陷型腺病毒活载体疫苗,通过RT-PCR方法获得了O型口蹄疫病毒(FMDV)全开放阅读框(ORF)基因片段,将其克隆到pMD18-T载体后测序,再将ORF编码基因定向克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建了重组腺病毒穿梭质粒。经PCR、酶切及测序鉴定,所克隆的ORF编码基因序列与原始强毒株Akesu/58的ORF编码基因比较,L、P1、P2、P3基因的核苷酸同源性分别为98.8%、97.9%、99.0%和97.6%,PCR、酶切鉴定重组腺病毒穿梭质粒均获得了长约6.9 kb的目的基因片段。表明,成功获得了含有O型FMDV全ORF编码基因的阳性克隆,并成功构建了含有完整FMDV开放阅读框架的编码基因表达盒的重组腺病毒穿梭质粒。
- 张兴旺王勤柳纪省李志勇王辉殷相平谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒克隆
- 口蹄疫病毒P1+3CD基因重组腺病毒的构建被引量：1
- 2007年
- 目的构建包含有O型口蹄疫病毒(FMDV)强毒结构蛋白(P1)基因及弱毒非结构蛋白(3CD)基因的重组腺病毒,为进一步研制FMD活载体疫苗奠定基础。方法通过RT-PCR方法扩增得到含有FMDV P1、3CD编码区的目的基因。P1基因经BglⅡ和XhoⅠ,3CD基因经XhoⅠ和XbaⅠ双酶切后与经BglⅡ和XbaⅠ双酶切处理的腺病毒穿梭载体pAd Track-CMV连接。将获得的重组穿梭质粒与腺病毒骨架载体在大肠杆菌内同源重组获得重组腺病毒质粒。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞,通过观测细胞病变及报告基因绿色荧光蛋白的表达鉴定重组的腺病毒。结果在pAd Track-CMV载体中成功克隆了P1+3CD基因,并与腺病毒骨架载体在大肠杆菌中实现了同源重组。线性化后的重组腺病毒质粒转染293细胞后可观测到典型的细胞病变与绿色荧光蛋白的表达。结论成功获得了含有FMD P1+3CD基因的重组腺病毒,为FMD活载体疫苗的研制提供了依据。
- 李志勇柳纪省张兴旺王辉殷相平兰喜李宝玉谢庆阁
- 关键词：口蹄疫病毒重组腺病毒
