张勇攀
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏省“青蓝工程”基金长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌外膜蛋白A前体蛋白的克隆表达
- 2014年
- 以致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌分离株G8107菌株基因组DNA为模板,用PCR法扩增ompA precursor基因,PCR产物用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切,酶切产物回收与相同黏性末端的表达载体pET-32a(+)连接构建表达ompA precursor的重组质粒,将此重组质粒转化入表达宿主菌BL21(DE3),抽提质粒,酶切鉴定及测序正确后诱导表达。对转化菌株以IPTG进行诱导后,裂解细菌,离心,上清进行SDS-PAGE鉴定。测序结果显示,ompA precursor基因大小为1 014 bp,编码338个氨基酸残基,蛋白相对分子质量约为36。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,以28℃1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h,该基因表达效果最好。经Western Blot检测,表达的重组蛋白可与抗His标签蛋白单抗反应。
- 张笛张勇攀钱文正于恩琪秦爱建金文杰
- 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌30S核糖体蛋白S6的原核表达及纯化
- 2012年
- 根据已发表的30S核糖体蛋白S6(RPS6)基因序列,设计合成了1对针对RPS6的特异性引物,用PCR方法从致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌中扩增出RPS6基因,并将扩增的目的片段克隆至pGEM-TEasy载体中。测序正确后将RPS6基因片段克隆进表达载体pET-32a(+)中,提取pET-32a(+)-RPS6质粒,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达。结果显示,PCR产物大小为396bp,与GenBank中同源序列的相似性为99.7%。SDS-PAGE分析结果表明,构建的重组RPS6在大肠杆菌中获得了可溶性表达,分子质量约为34ku,大小与预期相一致。HisTrap FF镍柱纯化大量表达的RPS6融合蛋白(His-RPS6),证实得到了高纯度的重组蛋白,为该蛋白功能研究提供了条件。
- 金文杰张勇攀钱文正邵红霞钱琨秦爱建
- 关键词：原核表达纯化
- 细菌FabB蛋白克隆表达及其单抗的制备及应用
- FabB和FabF是大肠杆菌脂肪酸合成酶的关键酶,FabF类酶同样可以具有β酮脂酰ACp合成酶Ⅰ(FabB)活性。细菌的脂肪酸合成酶属于Ⅱ型脂肪酸合成酶系,即脂肪酸的合成以ACP(acyl carrierprotein)...
- 钱文正张勇攀张笛金文杰邵红霞钱琨秦爱建
- 文献传递
- 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌外膜蛋白A前体蛋白的克隆表达及其单克隆抗体的制备
- (目的)对致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌的外膜蛋白A前体蛋白基因进行克隆,并在原核系统中表达,为鹅卵黄性腹膜炎致病机制的研究奠定基础。(方法)以致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌分离株G8107菌株基因组DNA为模板,用PCR 法扩增o...
- 张笛张勇攀钱文正于恩琪秦爱建金文杰
- 关键词：单克隆抗体
