涂海情
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院国家生物医学分析中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：生物学理学机械工程医药卫生更多>>
- COPS3的稳定干涉细胞系建立及其在NLRP3炎症小体激活中的作用被引量：2
- 2015年
- COPS3(COP9 signalosome subunit 3)作为COP9信号复合体的第三个亚基,在多种恶性肿瘤中高表达。本实验室通过酵母双杂交系统筛选,发现COPS3与NLRP3(NOD-like receptor family,pyrin domain containing 3)存在相互作用。目前关于COPS3与NLRP3炎症小体的相关性未见文献报道。为了研究COPS3对NLRP3炎症小体的影响,利用慢病毒感染系统建立了稳定干涉COPS3的THP1细胞系。首先将COPS3的不同干涉序列片段稳定整合到THP1细胞中,通过嘌呤霉素压力筛选,应用实时定量荧光PCR(real time PCR)手段检测COPS3的干涉效果,最终确定成功建立干涉COPS3的稳定细胞株。在稳定敲低COPS3的细胞株中,发现NLRP3炎症小体的激活受到明显抑制。综上提示,COPS3能够正向调节NLRP3炎症小体的激活。
- 郭赛赛常艳涂海情徐广秦璇和吴敏李慧艳李爱玲
- 关键词：慢病毒
- 基于单细胞荧光成像技术的昼夜节律监测分析被引量：1
- 2023年
- 昼夜节律作为机体的无形时钟精密调控多种生理功能,包括睡眠、觉醒、大脑认知、免疫力等。下丘脑视交叉神经上核(suprachiasmatic nucleus, SCN)作为昼夜节律系统的主起搏器,能够自主产生节律性输出信号,协调维持全身多个组织、器官的时钟变化。同时,SCN通过神经元间的耦合作用,实现不同神经细胞节律性变化的步调一致性,产生强劲的振荡性规律,以维持机体内部节律稳定、抵抗外界环境因素干扰。为直观的研究SCN区在机体昼夜节律中的功能,实现单细胞尺度观测SCN神经元节律性变化,本研究搭建了单细胞荧光成像系统,通过深度制冷CCD相机,利用荧光素酶报告基因系统,对体外分离培养的SCN脑片进行长周期实时成像,原位观察SCN区不同细胞节律基因的振荡性表达规律。利用Eviews、IgorPro等软件,对荧光强度在单细胞尺度及时间尺度上进行量化分析,最终实现了在单细胞水平监测观察节律基因的振荡性变化。利用河豚毒素(TTX)能够可逆性的破坏SCN细胞间的耦合作用,验证了该系统的可行性。综上,本研究成功搭建了基于荧光素酶报告基因系统的单细胞实时荧光成像平台及分析技术,实现了对SCN神经元基因表达节律性变化的实时监测。
- 李森许钰铃王佳荣李佩瑶何春雨于希平李慧艳张宇程胡怀斌宋增庆王凯韩秋影涂海情
- 关键词：昼夜节律SCN荧光素酶CCD实时成像
- IFI27L2慢病毒稳定干涉细胞系的建立以及其在炎症小体激活中的功能鉴定
- 2015年
- 通过构建IFI27L2分子的慢病毒干涉表达载体,建立IFI27L2表达下调的THP1、U937稳定细胞系。将携带特异性干涉IFI27L2的DNA片段克隆插入p LKO.1载体中,并制备携带不同干涉序列的慢病毒颗粒。将获得的慢病毒颗粒感染THP1、U937细胞,建立稳定干涉细胞系,经Real-time PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白质水平检测THP1、U937细胞中内源IFI27L2的干涉效果。构建的重组质粒经酶切鉴定shRNA正确插入慢病毒载体,测序鉴定序列正确;并有干涉效果。成功制备了稳定干涉IFI27L2的慢病毒颗粒,建立IFI27L2稳定下调的THP1、U937两种细胞系;并初步证明稳定干涉IFI27L2能够抑制NLRP3炎症小体的激活。
- 张宇程涂海情徐广谭博李慧艳
- 关键词：慢病毒
