何晓静
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 供职机构：环境与疾病相关基因教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省国际科技合作计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小反应体积实时定量PCR的可行性评价被引量：4
- 2010年
- 目的从扩增稳定性、扩增效率以及可靠性等多方面评估实时定量PCR（RtPCR）反应小体积的可行性,同时确定适合小体积体系的模板量。方法将实验分为10、15、20μL 3个体积组,每组分别采用0.1、0.2、0.3、0.4μL的大鼠cDNA为模板,进行大鼠-βactin mRNA的RtPCR扩增。通过扩增曲线和熔解曲线考察反应的稳定性,以梯度模板拟合标准曲线获得反应的扩增效率,其线性相关程度反映模板量是否合适。另外,构建大鼠降植烷诱导的关节炎（pristane-induced arthritis,PIA）模型,采用选定的反应体系,分别对模型组和正常组大鼠脾脏TNF-αmRNA进行扩增,通过TNF-α的相对表达趋势反映小体积扩增的可靠性。结果在大鼠-βactin mRNA的RtPCR扩增中,10、15、20μL 3个体积组均能特异稳定地进行扩增,并保证高扩增效率。而且每个体积组中的模板梯度表现出很好的线性相关趋势。同时选用10μL和20μL反应体积、0.2μL模板对关节炎大鼠脾脏进行TNF-αmRNA扩增,结果一致表现出了预期的显著性上调。结论实验证实10μL、15μL等小反应体积应用于RtPCR扩增中是可行的,具有较好的稳定性和可靠性,同时0.10.4μL cDNA模板在3种体系的合适模板范围内。这种较小的PCR反应体积,不仅节省了试剂和实验材料,对一些来之不易的临床标本尤为重要,也利于高通量大规模的RtPCR检测的实现。
- 韩燕朱文华何晓静蒋丛姗宁启兰吕社民孟列素
- 关键词：实时定量PCR稳定性可靠性
