刘臣
- 作品数：9 被引量：18H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
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- 一种快速收集棉盲蝽卵的方法
- 本发明涉及一种快速收集棉盲蝽卵的方法，包括在透明养虫盒内放入适量棉盲蝽成虫，雌雄比例接近1:1；将养虫盒口用尼龙网布罩住，封紧，在所述尼龙网布上放置蘸有蜂蜜水的脱脂棉球；待棉盲蝽成虫补充营养至少7天后，向养虫盒内放入适量...
- 梁革梅赵曼刘臣陈琳王冰洁
- 斜纹夜蛾取食Cry1Ca蛋白后中肠组织病理变化
- 2022年
- Cry1Ca对斜纹夜蛾、甜菜夜蛾等多种鳞翅目害虫具有很高的杀虫活性,它在转多种Bt蛋白基因策略中,可用于扩大杀虫谱,并可用于当前Bt蛋白的抗性治理,是极具潜力蛋白之一。为明确Cry1Ca对斜纹夜蛾的作用机制,我们利用透射电镜观察了幼虫取食Cry1Ca后中肠组织的病理变化。结果表明斜纹夜蛾取食含Cry1Ca蛋白的饲料2 h后中肠组织开始表现明显的病理变化,且随取食时间的增加病变越来越严重。具体表现为:中肠细胞微绒毛肿胀、扭曲、断裂和脱落;细胞核拉长或畸形、核膜模糊、染色质不均匀或聚集;线粒体变形、空泡化和内脊模糊不清;内质网杂乱无章、肿胀变形和数量变少。研究结果可为更好地利用Cry1Ca防治斜纹夜蛾提供理论依据。
- 姚雪刘臣段云鹏魏纪珍梁革梅
- 关键词：斜纹夜蛾中肠组织病理变化
- 四种Bt蛋白对六种重要鳞翅目害虫的杀虫活性评价被引量：10
- 2017年
- 筛选对靶标害虫高效、低毒的Bt蛋白对未来开发新型Bt生物杀虫剂、转基因抗虫植物新品种等具有重要意义。我们在室内测定了Cry2Ab4、Cry2Ah1、Cry1Ca7及Vip3Aa11四种Bt蛋白对棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾、黏虫、玉米螟、二化螟的杀虫效果。结果表明,Cry2Ab4杀虫谱广、对六种鳞翅目的重要害虫都具有很高的杀虫效果,尤其是对棉铃虫、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾和玉米螟的毒力效果显著;Cry2Ah1对斜纹夜蛾、甜菜夜蛾具有很好的致死作用,对棉铃虫、玉米螟和二化螟也具有较好的杀虫效果,但对黏虫只有明显的体重抑制作用、致死效果不明显;Cry1Ca7对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾有明显的防治效果,其次对棉铃虫、二化螟也有较好的杀虫作用,但对玉米螟毒力效果较差,对黏虫没有毒力作用;Vip3Aa11对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾的防治效果好,对玉米螟、棉铃虫和二化螟有较好的防治效果,但对黏虫没有毒力作用。
- 刘臣陈琳王冰洁赵曼梁革梅郭予元
- 关键词：BT鳞翅目害虫杀虫活性害虫防治
- 棉铃虫中肠钙粘蛋白、氨肽酶N及碱性磷酸酯酶的抗血清对Cry1Ac和Cry2Aa毒力的影响被引量：1
- 2016年
- 【目的】Cry1A和Cry2A类Bt蛋白通过特异性地与昆虫中肠上的受体蛋白结合而发挥杀虫作用,现已广泛应用于转基因抗虫作物。本研究旨在进一步明确Cry2A类蛋白的作用机制和Cry1A受体蛋白在Cry2A发挥毒力中的作用。【方法】本研究首先提取了棉铃虫Helicoverpa armigera的BBMV,制备了钙粘蛋白(CAD)、氨肽酶N(APN)和碱性磷酸酯酶(ALP)3种受体蛋白的抗体和抗血清;然后,利用Western blot检测BBMV上这3种受体蛋白后,利用抗体封闭技术比较了敏感棉铃虫和Cry1Ac抗性棉铃虫(BtR)中3种受体蛋白的抗血清对Cry1Ac和Cry2Aa毒力的影响。【结果】对敏感品系棉铃虫,这3种已知的Cry1Ac受体蛋白抗血清显著地降低了Cry1Ac和Cry2Aa的毒力。其中APN抗血清对Cry1Ac毒力的影响最大,棉铃虫幼虫的死亡率降低了84.44%;ALP抗血清对Cry2Aa的毒力影响最大,棉铃虫幼虫死亡率比对照降低了71.04%。Cry1Ac对Cry1Ac抗性棉铃虫(BtR)的毒力显著降低,Cry2Aa的毒性也减弱。在Cry1Ac抗性棉铃虫(BtR)中,3种受体抗血清对Cry1Ac的影响比在敏感棉铃虫中的影响小,尤其是CAD和APN抗血清对Cry1Ac毒力的抑制率显著低于在敏感棉铃虫中的抑制作用;CAD和ALP抗血清对Cry2Aa毒力的影响与在敏感棉铃虫中的影响差异不显著,但APN抗血清可以显著降低Cry2Aa对Cry1Ac抗性棉铃虫(BtR)的毒力。【结论】棉铃虫CAD,APN和ALP不仅参与了Cry1Ac的杀虫过程,也对Cry2Aa毒力有一定的影响,而且这3种蛋白可能与棉铃虫对Cry1Ac和Cry2Aa产生抗性及交互抗性相关。
- 王冰洁袁向东赵曼刘臣陈琳梁革梅
- 关键词：棉铃虫抗血清CRY1AC抗性交互抗性
- 一种评价药剂对昆虫毒力效果的生物测定方法
- 本发明涉及生物测定，具体公开了一种评价药剂对昆虫毒力效果的生物测定方法，将饲料置于孔板中，并使其完全填充孔板底部，且形成平展表面；将待测药剂加入孔板中，覆盖饲料表面，待药剂渗入饲料内部、饲料表面药剂自然风干后，接入昆虫进...
- 梁革梅陈琳王冰洁魏纪珍刘臣赵曼
- 文献传递
- 棉铃虫对不同Bt蛋白的抗性及交互抗性研究被引量：6
- 2018年
- 【目的】棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)对Bt(Bacillus thuringiensis)的抗性问题是阻碍Bt抗虫棉持续发展的关键,探究棉铃虫对不同Bt蛋白的抗性演化趋势及交互抗性,可为选择合适的抗虫棉花备选基因提供参考。【方法】在室内通过连续多代筛选,获得了5个对Bt具有不同抗性的品系,利用饲料混合法测定了这些品系棉铃虫的交互抗性。【结果】经筛选后棉铃虫对Cry1Ac产生了超高水平的抗性、对Cry2Ab、Vip3Aa产生了超低抗性(耐性);Cry1Ac抗性棉铃虫停止筛选而换成Cry2Ab或Vip3Aa继续筛选后,棉铃虫对Cry1Ac抗性水平明显降低,对Cry2Ab或Vip3Aa产生低抗或超低抗性(耐性)。Cry1Ac抗性棉铃虫对Cry1Ab敏感性显著降低,而对Cry2Ab、Cry2Ah及Vip3Aa敏感性变化不显著;Cry2Ab抗性品系棉铃虫对Cry1Ac敏感性显著降低;Vip3Aa抗性品系棉铃虫对Cry1Ac敏感性变化不显著。说明Cry1Ac与Cry1Ab间存在明显交互抗性,与Cry2Ah、Vip3Aa没有交互抗性;而Cry2Ab与Cry1Ac间存在不对称的交互抗性。【结论】在筛选新杀虫基因或叠加基因时,应充分考虑抗性发展及交互抗性问题,Cry2Ah、Vip3Aa是治理Cry1Ac抗性棉铃虫或与Cry1Ac叠加最优的选择。
- 刘臣张丹丹王泽宇陈琳李国平梁革梅
- 关键词：棉铃虫BT蛋白抗性交互抗性
- 一种快速收集棉盲蝽卵的方法
- 本发明涉及一种快速收集棉盲蝽卵的方法，包括在透明养虫盒内放入适量棉盲蝽成虫，雌雄比例接近1:1；将养虫盒口用尼龙网布罩住，封紧，在所述尼龙网布上放置蘸有蜂蜜水的脱脂棉球；待棉盲蝽成虫补充营养至少7天后，向养虫盒内放入适量...
- 梁革梅赵曼刘臣陈琳王冰洁
- 文献传递
- 一种有毒物质对绿盲蝽若虫影响的生物测定方法
- 本发明提供一种有毒物质对绿盲蝽若虫影响的生物测定方法，包括将待测有毒物质与绿盲蝽人工饲料混合制得实验组饲料，以砷酸二氢钾和/或半胱氨酸蛋白酶抑制剂制得阳性组饲料；同时设空白对照组；用拉伸的封口膜分别包裹上述各组饲料制成大...
- 梁革梅赵曼王英丽陈琳刘臣
- 文献传递
- 棉铃虫中肠特异性结合蛋白ABCC1对Cry1Ac毒力的影响被引量：1
- 2019年
- 【目的】研究棉铃虫(Helicoverpa armigera)中肠蛋白ABCC1(HaABCC1)与Cry1Ac的结合特性及对Cry1Ac毒力的影响,明确HaABCC1在Cry1Ac杀虫机制中的作用。【方法】分析HaABCC1基因序列,设计引物,通过原核表达得到HaABCC1两个跨膜区片段的蛋白,与Cry1Ac进行Ligand blot试验,验证其与Cry1Ac的体外结合特性;利用RNAi技术干扰棉铃虫幼虫的HaABCC1,在3龄幼虫腹部注射siABCC1,比较HaABCC1的表达量及Cry1Ac处理后棉铃虫死亡率的变化;通过细胞转染将ABCC1导入Sf9细胞系中,确定pAc-ABCC1重组质粒转入Sf9细胞后,用细胞生物测定的方法比较Cry1Ac处理后细胞死亡率的变化;比较敏感品系(96S)和Cry1Ac抗性品系(BtR)棉铃虫的HaABCC1基因全长序列,并通过荧光定量RT-PCR检测HaABCC1在抗、感棉铃虫中的表达量。【结果】HaABCC1跨膜区TMD1和TMD2在Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞中成功表达,两个HaABCC1跨膜区片段蛋白均能与活化的Cry1Ac在体外结合;棉铃虫注射siABCC1后,HaABCC1的表达量显著下降,与未注射的棉铃虫、注射DEPC水和siEGFP的棉铃虫相比,用活化的Cry1Ac蛋白处理HaABCC1被干扰的棉铃虫,其幼虫死亡率显著降低,表明棉铃虫幼虫的HaABCC1被干扰后,能显著降低Cry1Ac对棉铃虫的毒力;用活化的Cry1Ac蛋白处理成功转入HaABCC1的Sf9细胞,与对照Sf9细胞相比,细胞的死亡率明显上升,表明将HaABCC1导入Sf9后能显著提高Cry1Ac处理后的细胞死亡率;抗性品系(BtR)与敏感品系(96S)棉铃虫的HaABCC1氨基酸序列没有差别,但抗性品系BtR棉铃虫HaABCC1的表达量显著降低。【结论】HaABCC1是Cry1Ac的特异性结合蛋白,可能是Cry1Ac的功能受体蛋白,并可能参与对Cry1Ac的抗性机制。
- 陈琳魏纪珍刘臣牛琳琳张彩虹梁革梅
- 关键词：棉铃虫苏云金芽孢杆菌CRY1AC结合蛋白毒力
