刘艳荣
- 作品数：2 被引量：6H指数：2
- 供职机构：山东大学医学院病原生物学研究所更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蠕形螨ISSR-PCR的反应体系优化及引物筛选被引量：3
- 2012年
- 目的以蠕形螨的DNA为模板,对蠕形螨简单重复序列锚定PCR(ISSR-PCR)反应体系优化并对ISSR引物进行筛选,为ISSR分析奠定基础。方法用自然沉降法收集山羊蠕形螨,用基因组DNA提取试剂盒提取山羊蠕形螨DNA,并以此为模板,以(CA)8RG(R为1分子的嘧啶)为引物,利用正交实验法,从Mg2+浓度、引物用量、dNTPs、DNA模板用量和TaqDNA聚合酶以及退火温度对蠕形螨ISSR-PCR反应体系进行优化,并以优化的反应体系筛选ISSR-PCR的引物。结果 ISSR-PCR 25μL最佳反应体系包括:0.4 mmol/L Mg2+、30 pmol引物、30～60 ng模板DNA、2u Taq酶,最佳退火温度为49℃、循环35次。筛选出10条条带清晰、多态性好、重复性高的引物。结论筛选出蠕形螨ISSR-PCR最佳反应体系和理想的引物,为蠕形螨的分子生物学研究奠定了基础。
- 刘艳荣刘付红肖克源郭淑玲冯玉新袁方曙
- 关键词：微卫星重复反应体系优化DNA引物
- 蠕形螨cDNA文库的构建及鉴定被引量：4
- 2012年
- 目的构建蠕形螨cDNA文库,以便进一步研究蠕形螨相关的基因。方法采用自然沉降法收集山羊蠕形螨,用TransZol Up试剂盒提取其总RNA,然后反转录合成第1链cDNA,通过LD-PCR获得第2链cDNA,将双链cDNA纯化去除小片段,收集大于500 bp的cDNA片段,与pGM-T载体连接,将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞TOP10建成蠕形螨cDNA文库,检验文库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入cDNA片段大小进行分析。结果 cDNA文库的库容量为2.56×106cfu,重组效率达98%,平均插入片段长度大于1 000 bp。结论构建的蠕形螨cDNA文库质量良好,为进一步对蠕形螨基因探索奠定基础。
- 肖克源郭淑玲刘艳荣苏磊冯玉新袁方曙
- 关键词：基因文库聚合酶链反应
