李艳平
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：潍坊医学院更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- IL-1β对Hepa1-6细胞增殖、迁移及IFN应答的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:构建应用于小鼠肝脏内表达和研究的IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其对小鼠Hepa1-6细胞体外增殖活性、迁移能力及干扰素增殖抑制效应等体外生物学行为的影响。方法:由C57BL/6小鼠腹腔液巨噬细胞扩增IL-1β基因,构建肝脏特异性pLIVE-IL-1β重组表达载体。利用transIT-LT1将鉴定后的pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR及双抗体夹心ELISA法分析转染前后IL-1表达水平,MTT法分析IL-1对细胞体外增殖活性的影响;利用细胞划痕实验分析对其迁移能力的影响,并确定对IFN-α诱导的细胞增殖抑制效应的作用。结果:重组载体经限制性酶谱分析酶解出822bp的条带,其序列与GenBank登录的小鼠IL-1β基因一致;转染后的Hepa1-6细胞培养上清中IL-1β的表达明显增高,细胞体外增殖速度明显加快;给予IFN-α作用后,IL-1β的表达使细胞对干扰素的抵抗性明显增强。结论:小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β能够在小鼠肝癌细胞中高效表达IL-1β,并能够显著促进肿瘤的体外增殖和迁移能力,削弱IFN-α对Hepa1-6细胞的增殖抑制作用。
- 林志娟梁淑娟王焕芹李艳平肖伟玲
- 关键词：IL-1Β肝癌NK细胞促炎性细胞因子干扰素
- ZZ亲和肽在大肠杆菌中的表达及IgG抗体亲和活性测定被引量：2
- 2011年
- 目的:ZZ亲和肽是源于葡萄球菌蛋白A的人工合成序列,能结合IgG抗体Fc段,在免疫学领域具有广泛的应用价值。本研究利用大肠杆菌表达C端带有6×His标签的ZZ亲和肽,并测定其生物学活性。方法:以pEZZ18为模板PCR扩增ZZ亲和肽基因,克隆至pUC18载体的EcoRⅠ/HindⅢ位点构建pUC-ZZ表达载体。利用大肠杆菌表达C端带有6×His的ZZ亲和肽,表达产物经Ni亲和层析纯化,利用竞争ELISA测定其与IgG抗体的亲和活性。结果:成功构建pUC-ZZ表达载体,SDS-PAGE显示ZZ亲和肽的Mr为16×103,与兔IgG抗体相对亲和常数为Ka≌1.45×108L/mol。结论:ZZ亲和肽基因成功在大肠杆菌中表达,具有与IgG抗体结合活性,为ZZ亲和肽的进一步开发利用奠定了基础。
- 李艳平唐金宝林志娟肖伟玲梁淑娟
- 关键词：大肠杆菌活性测定
