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羊口疮病毒三种分子生物学检测方法的比较研究: 引言羊口疮（Orf）又称羊传染性脓疱,是由羊口疮病毒（Orf Virus,OrfV）引起危害山羊和绵羊的一种急性、高度接触性人兽共患传染病[1,2]。目前,诊断OrfV的方法中,核酸扩增技术仍为首选[3]。B2L基因是O...; 杨钰鲜思美刘嫒吴健刘宗胜

琼脂扩散试验检测羊口疮病毒被引量：5: 2014年; 以羊口疮痂皮毒抗原接种家兔制备高免血清,经琼扩试验检测血清价为1∶16;通过抗原与兔抗羊口疮高免血清的方阵分析,确定兔抗羊口疮高免血清诊断抗体的最佳稀释度为1∶4;该诊断抗体对5份不同地区的羊口疮疑似病料都呈现特异性反应,不与山羊痘疫苗毒、口蹄疫疫苗毒和羊正常皮肤抗原发生交叉反应。琼脂扩散试验检测羊口疮病毒是一种简便、易于判断、实用性强的诊断方法。; 鲜思美吴健杨钰刘宗胜刘嫒苏刚; 关键词：羊口疮病毒高免血清琼脂扩散试验

RT-LAMP检测鸡传染性支气管炎病毒方法的建立及应用被引量：3: 2014年; 以鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)的N基因保守区域设计4条引物,通过优化反应条件,建立了检测IBV的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),并进行了特异性试验、敏感性试验及临床样本检测。结果显示,建立的RT-LAMP方法对IBV参考株扩增产物的电泳呈特征性梯状条带,而新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、马立克病病毒(MDV)、传染性囊病病毒(IBDV)等的扩增产物电泳后均无扩增条带。该方法最低能检出0.19 pg的IBV cDNA模板,敏感性比常规RT-PCR方法高1 000倍。用该方法检测了6份临床疑似IB临床病料,检出率为100%(6/6),与常规RT-PCR的符合率为100%。60 min反应结束后,离心可以看到白色沉淀物,简单直观,适用于基层实验室快速准确诊断。; 鲜思美杨钰汪德生刘嫒尹强军邓诗苏刚孔维祥; 关键词：鸡传染性支气管炎病毒

羊口疮病毒贵州株F1L基因的克隆及生物信息学分析: 目的与意义羊口疮(Off),是由羊口疮病毒(Orf virus,OrfV)引起绵羊和山羊急性、高度接触性、嗜上皮性人畜共患传染病[1].OrfV为副痘病毒属成员之一,基因组全长134～139 kb,中央编码区(ORFs...; 刘嫒杨钰鲜思美刘宗胜吴健罗波陈永翠

重庆地区羊口疮病毒的分离鉴定及F1L基因的原核表达被引量：7: 2015年; 本试验旨在对重庆地区羊口疮病毒(ORFV)进行分离培养及鉴定,并研究其F1L基因序列在大肠杆菌中的表达情况。利用MDBK细胞对疑似ORFV感染的羔羊痂皮中的病毒进行分离培养;对F1L基因序列进行PCR扩增,引入限制性内切酶NotⅠ和EcoRⅠ,构建重组质粒pET-32a-F1L,转化至大肠杆菌BL21菌株后,对阳性菌株进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE检测和Western blotting鉴定。结果表明,所获得的毒株为ORFV,其F1L基因在大肠杆菌中的表达产物大小约为57.4ku,主要以包涵体形式存在,5h为最佳诱导表达时间,并具有良好的反应原性。; 杨钰冯杰刘嫒张素辉许国洋冯将刘宗胜鲜思美; 关键词：羊口疮病毒原核表达

羊口疮病毒重庆株的分离鉴定及其F1L基因原核表达研究: 羊口疮病毒（Orf virus，OrfV）属于痘病毒科、副痘病毒属成员，为有囊膜线性双股DNA病毒，是引起绵羊、山羊发生以口唇、舌、鼻、乳房等部位皮肤、黏膜形成丘疹、脓疱、溃疡以及结成疣状厚痂为主要特征的接触性、嗜上皮性...; 杨钰; 关键词：羊口疮病毒原核表达生物信息学

羊口疮病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR的建立及应用被引量：10: 2014年; 为羊口疮（Orf）的分子流行病学调查、早期快速诊断及细胞培养物的检测等提供参考，根据GenBank 发表的羊口疮病毒（OrfV）B2L 基因序列设计合成1对引物，以 pMD18-T-B2L 重组质粒为阳性标准品，建立了检测 OrfV 核酸的 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 方法，并进行了临床应用。结果表明：建立的 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 的线性关系良好，标准曲线的相关系数达到-1；最低检测限为1．0x10^3 copies／μL，比常规 PCR 方法高100倍，与山羊痘和口蹄疫疫苗毒均不发生交叉反应；组内变异系数为1．061％-2．873％，组间变异系数为0．397％-3．829％。用该方法检测5例 OrfV 感染临床病例和8份不同代次的 OrfV 细胞培养物，阳性率均为100％。SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 PCR 方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可以用于 OrfV 的病原检测及定量分析。; 鲜思美张素辉杨钰邓诗吴健刘嫒刘宗胜; 关键词：羊口疮病毒

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杨钰