罗云
- 作品数：6 被引量：13H指数：1
- 供职机构：昆明医科大学更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的构建大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒,为进一步探究RNA干扰技术对CaSR在肾脏对钙重吸收调控中的作用提供基础准备。方法(1)CaSR基因慢病毒高表达细胞系构建:PCR克隆CaSR目的基因,双酶切CaSR基因和pcDNA3.1载体,连接酶连接,阳性克隆筛选后测序,将pcDNA3.1-CaSR高表达载体和空载体(对照组)经慢病毒包装后转染NRK-52E细胞,Western blot测定CaSR蛋白表达;(2)CaSR基因的RNA干扰质粒构建:设计3对靶向干扰CaSR基因的RNA引物序列,双酶切干扰引物和pLV[shRNA]-EGFP载体,然后经T4连接酶连接,获得重组干扰质粒pLV[shRNA]-EGFP-CaSR,转化至感受态E.coli DH5,阳性克隆筛选后测序,测定干扰效率。结果(1)测序结果与CaSR基因序列一致;(2)测序结果与设计shRNA引物序列一致;(3)Western blot检测获得慢病毒高表达稳定细胞系的CaSR蛋白;(4)干扰质粒干扰高表达细胞系有效。结论成功构建大鼠CaSR基因的慢病毒高表达细胞系和RNA干扰质粒。
- 罗云罗钰辉刘孝东崔庆鹏
- 关键词：钙敏感受体干扰RNA质粒
- 沉默钙敏感受体对大鼠尿钙排泄影响及对紧密连接蛋白14的作用被引量：1
- 2020年
- 目的了解沉默大鼠钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)基因后,肾脏组织紧密连接蛋白14(the tight junction protein claudin 14,CLDN14)的表达情况及24 h尿钙排泄量变化情况。方法 (1)建立遗传高钙尿结石形成(GHS)大鼠模型;(2)CaSR-miRNA干扰病毒分别干扰GHS组大鼠和正常尿钙对照组大鼠(NC)作为实验组,生理盐水干预作为对照组。(3)处死大鼠取双肾并测24 h尿钙;(4)RT-PCR和Western Blot技术检测大鼠肾上皮细胞CLDN14的mRNA和蛋白表达水平。结果 (1)CaSR-miRNA干扰病毒后,与对照组大鼠相比,GHS大鼠组尿钙排泄量减少,差异有统计学意义(P <0.05);NC组大鼠尿钙排泄量变化不明显,差异无统计学意义(P> 0.05)。(2)GHS组大鼠CLDN14 mRNA和蛋白表达量减少,差异有统计学意义(P <0.05);NC组大鼠CLDN14 mRNA和蛋白表达无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 (1)干扰病毒体内干扰GHS大鼠后尿钙排泄量下降,NC组大鼠无此现象。(2)CaSR可能通过调控CLDN14的表达来调节肾脏对Ca2+的重吸收。
- 崔庆鹏刘孝东范世成朱元全罗云罗钰辉
- 关键词：钙敏感受体泌尿系结石特发性高钙尿症
- 钙敏感受体在肾脏中的表达及生理作用研究进展被引量：1
- 2018年
- 钙敏感受体(calcium-sensing receptor,Ca SR)是一个C族G蛋白偶联受体,肾脏中,沿着肾单位不同部位(近端小管、远曲小管、髓袢段等)均有Ca SR的表达。Ca SR的主要功能是通过平衡胃肠道摄入和吸收钙,肾脏重吸收和排泄以及骨组织的消融维持钙稳态。肾脏中,Ca SR具有特定的功能,Ca SR在肾脏内通过调节水和电解质,肾素的释放,pH值,尿液浓度维持体内血钙浓度以及尿钙排泄量,如果Ca SR基因发生突变,可引起血钙和尿钙分泌的紊乱而引发疾病。本文从Ca SR在肾脏中不同部位的表达及生理作用做一综述,为进一步研究干扰RNA技术对Ca SR基因表达变化引起肾脏内钙代谢紊乱对钙肾结石的形成提供理论基础。
- 罗云罗钰辉刘孝东崔庆鹏
- 关键词：钙敏感受体钙离子钙稳态
- 钙敏感受体与泌尿系疾病关系的研究进展被引量：1
- 2020年
- 钙敏感受体自从被发现以来就引起了人们广泛的兴趣。目前许多研究已经阐述了CaSR的结构及其介导的信号传导通路,但CaSR在泌尿系疾病的发生、发展中所起的具体作用却不甚清楚。泌尿系结石、前列腺癌、肾细胞癌是常见的泌尿系疾病,而肾脏纤维化则是各种终末期肾病的共同病理表现,这些泌尿系疾病严重威胁着人类的健康。目前关于钙敏感受体在上述疾病中的作用机制相对较少,针对钙敏感受体的治疗药物缺乏,相信随着对钙敏感受体与泌尿系疾病的进一步研究,会为泌尿系疾病的治疗提供新的药物及治疗思路。
- 崔庆鹏罗云熊磊范世成朱元全李同海罗钰辉
- 关键词：泌尿系结石钙敏感受体前列腺癌肾癌肾纤维化
- 肥大细胞与实验性大鼠自身免疫性前列腺炎相关性研究被引量：8
- 2017年
- 目的:探讨前列腺组织中的肥大细胞在Ⅲ型前列腺炎(CP/CPPS)中的作用。方法:选取雄性SD大鼠45只,分为对照组(0.9%NaCl盆腔区域及双侧肩胛皮下多点注射)、自身免疫性前列腺炎(EAP)模型组(完全弗氏佐剂与前列腺组织混合悬液盆腔区域及双侧肩胛皮下多点注射)、干预组(EAP模型组基础上加入肥大细胞类胰蛋白酶脱落抑制剂色甘酸钠),每组15只。建立EAP模型过程中,用Von-Frey测痛纤维在第5、10、20、30、40天对对照组、EAP组进行骨盆区域痛觉测试。建模成功后,干预组予色甘酸钠连续腹腔内注射10 d,每两天对其及EAP组进行痛觉测试。选取3组大鼠的前列腺,进行HE染色及甲苯胺蓝染色病理学检查;并通过免疫组化和Western印迹法检测肥大细胞类胰蛋白酶的表达。结果:Von-Frey测痛结果显示:EAP模型组大鼠骨盆疼痛表现较对照组明显,干预组大鼠骨盆疼痛表现较EAP组减轻。HE染色提示:EAP组大鼠前列腺间质内淋巴细胞和中性粒细胞浸润,腺体周围充血。对照组未见明显炎症细胞浸润。与EAP组对比,干预组腺体充血及炎症细胞浸润情况较之减轻。甲苯胺蓝染色提示:EAP组大鼠的前列腺组织中,肥大细胞总数及脱颗粒的肥大细胞数目较对照组增加(P<0.01),干预组较EAP组减少(P<0.05)。免疫组化染色提示:EAP组大鼠的前列腺组织中,肥大细胞类胰蛋白酶较对照组表达增加(主要表达于细胞核和细胞质中)(P<0.01),干预组较EAP组减少(P<0.05)。Western印迹提示:EAP组大鼠的前列腺组织中,肥大细胞类胰蛋白酶较对照组表达增加(P<0.01),干预组较EAP组减少(P<0.01)。结论:EAP大鼠前列腺组织中肥大细胞的总数及脱颗粒的肥大细胞数目增加,肥大细胞是导致Ⅲ型前列腺炎骨盆区域疼痛介质之一,可作为干预及治疗Ⅲ型前列腺炎中一个靶向指标。
- 郑明星范世成华四清罗云崔庆鹏刘孝东
- 关键词：肥大细胞色甘酸钠
